《乳酸脫氫酶測定試劑盒注冊審查指導(dǎo)原則（2023年修訂版）》

乳酸脫氫酶測定試劑盒注冊審查指導(dǎo)原則（2023年修訂版）（征求意見稿）本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對乳酸脫氫酶測定試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。本指導(dǎo)原則是對乳酸脫氫酶測定試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。本指導(dǎo)原則是供注冊申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。一、適用范圍乳酸脫氫酶測定試劑是指用于定量測定人體樣本（血清、血漿等）中乳酸脫氫酶活性的試劑。本指導(dǎo)原則適用于以酶促反應(yīng)動力學(xué)為檢驗原理，采用全自動、半自動生化分析儀或分光光度計，進行乳酸脫氫酶定量測定的臨床化學(xué)體外診斷試劑。不包括用于單獨銷售的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。其他方法學(xué)的乳酸脫氫酶測定試劑注冊可參考本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，如不適用，應(yīng)另行選擇適用自身方法學(xué)特性的研究步驟及方法。乳酸脫氫酶（lactatedehydrogenase，LDH

）活性的測定方法目前主要有乳酸底物法（L→P：乳酸→丙酮酸）和丙酮酸底物法（P→L：丙酮酸→乳酸）。1.乳酸底物法（L→P）在堿性條件下，乳酸脫氫酶催化L-乳酸生成丙酮酸，同時將NAD+（氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）還原成NADH（還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）。NADH生成的速率與血清中乳酸脫氫酶的活性成正比，340nm波長處監(jiān)測NADH吸光度上升時變化速率，計算乳酸脫氫酶的活性。（國際臨床化學(xué)聯(lián)合會IFCC參考方法）2.丙酮酸底物法（P→L）中性條件下，乳酸脫氫酶催化丙酮酸生成L-乳酸，同時將NADH（還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）氧化成NAD+（氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）。NADH消耗的速率與血清中乳酸脫氫酶的活性成正比，340nm波長處監(jiān)測NADH吸光度下降時變化速率，計算乳酸脫氫酶的活性。從方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則主要指乳酸脫氫酶催化丙酮酸和乳酸之間的氧化或還原反應(yīng)的相互轉(zhuǎn)化的同時，NADH量的下降或上升速率，通過在340nm處吸光度的變化，計算乳酸脫氫酶活性。不包括干化學(xué)、酶聯(lián)免疫類檢測試劑及電泳等檢測方法。注冊審查要點監(jiān)管信息應(yīng)按《體外診斷試劑注冊申報資料要求及說明》的要求提交申請表、術(shù)語縮寫詞列表、產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄、符合性聲明以及其它相關(guān)信息。1.產(chǎn)品名稱產(chǎn)品名稱一般由三部分組成。第一部分：被測物名稱；第二部分：用途，如測定試劑；第三部分：方法或者原理，如乳酸底物法、丙酮酸底物法等。2.分類依據(jù)根據(jù)《體外診斷試劑分類子目錄》，乳酸脫氫酶測定試劑產(chǎn)品類別為：II-4用于酶類檢測的試劑，管理類別為第二類，分類編碼為6840。3.注冊單元劃分應(yīng)符合《醫(yī)療器械注冊單元劃分指導(dǎo)原則》中體外診斷試劑注冊單元劃分相關(guān)要求。如包含不同的包裝規(guī)格，不同規(guī)格間僅試劑組分裝量或檢測數(shù)有差異，原則上劃分為同一注冊單元；如包含不同的包裝規(guī)格，不同規(guī)格間除試劑裝量或檢測數(shù)的差異外，適用于不同的儀器機型，原則上劃分為同一注冊單元。校準(zhǔn)品、質(zhì)控品可以與配合使用的乳酸脫氫酶測定試劑合并申請注冊，也可以單獨申請注冊。4.產(chǎn)品列表5.關(guān)聯(lián)文件應(yīng)由境內(nèi)（外）申請人提供相關(guān)證明材料和文件、主文檔授權(quán)信（如適用）。授權(quán)信中應(yīng)當(dāng)包括引用主文檔的申請人信息、產(chǎn)品名稱、已備案的主文檔編號、授權(quán)引用的主文檔頁碼/章節(jié)信息等內(nèi)容。6.既往溝通記錄在產(chǎn)品申報前，如果申請人與監(jiān)管機構(gòu)針對申報產(chǎn)品以會議形式進行了溝通，或者申報產(chǎn)品與既往注冊申報相關(guān)。應(yīng)當(dāng)提供相關(guān)內(nèi)容（如適用）。如不適用，應(yīng)當(dāng)明確聲明申報產(chǎn)品沒有既往申報和/或申報前溝通。7.符合性聲明申請人應(yīng)當(dāng)聲明下列內(nèi)容：7.1申報產(chǎn)品符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》和相關(guān)法規(guī)的要求。7.2申報產(chǎn)品符合《體外診斷試劑分類規(guī)則》、《體外診斷試劑分類子目錄》有關(guān)分類的要求。7.3申報產(chǎn)品符合現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，并提供符合標(biāo)準(zhǔn)的清單。7.4申報產(chǎn)品符合國家標(biāo)準(zhǔn)品的清單。7.5保證所提交資料的真實性（境內(nèi)產(chǎn)品由申請人出具，進口產(chǎn)品由申請人和代理人分別出具）。（二）綜述資料綜述資料主要包括章節(jié)目錄、概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報產(chǎn)品上市歷史、其他需說明的內(nèi)容等。1.章節(jié)目錄應(yīng)包括本章的所有標(biāo)題和小標(biāo)題，注明目錄中各內(nèi)容的頁碼。2.概述應(yīng)描述乳酸脫氫酶測定試劑名稱及其確定依據(jù)；該產(chǎn)品屬于II-4用于酶類檢測的試劑，管理類別為第二類，分類編碼為6840；描述申報產(chǎn)品預(yù)期用途；描述有關(guān)申報產(chǎn)品的背景信息概述或特別細節(jié)（如適用），如申報產(chǎn)品的歷史概述、歷次提交的信息，與其他經(jīng)批準(zhǔn)上市產(chǎn)品的關(guān)系等。3.產(chǎn)品描述3.1產(chǎn)品綜述應(yīng)明確產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，產(chǎn)品組成，原材料的來源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝，檢驗方法，質(zhì)控品的制備方法及賦值情況等。如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品，應(yīng)提供校準(zhǔn)品的制備方法及溯源情況。技術(shù)原理包括反應(yīng)原理，方法學(xué)，測量方法（速率法），信號處理方法，數(shù)據(jù)獲取和解讀方式，分析前處理步驟等。描述產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價，包括分析性能評估、參考區(qū)間、穩(wěn)定性以及臨床評價等。描述不同包裝規(guī)格之間的差異。描述產(chǎn)品中使用的生物材料或衍生物（如適用），包括生物學(xué)來源（如人、動物、病原體、重組或發(fā)酵產(chǎn)物）和組織來源（如血液）的描述。人源性材料須對有關(guān)傳染?。℉IV、HBV、HCV等）病原體測定予以說明；其他動物源及微生物來源的材料，應(yīng)當(dāng)說明其在產(chǎn)品運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境是安全的，并提供相關(guān)的證明文件。3.2包裝描述提供有關(guān)產(chǎn)品包裝信息，包括包裝形狀和材料等。3.3研發(fā)歷程闡述申請注冊產(chǎn)品的研發(fā)背景和目的。如有參考的同類產(chǎn)品或前代產(chǎn)品，應(yīng)當(dāng)提供同類產(chǎn)品和/或前代產(chǎn)品的信息，并說明選擇其作為研發(fā)參考的原因。3.4與同類和/或前代產(chǎn)品的比較應(yīng)著重從預(yù)期用途、主要組成成分、溯源情況、主要性能指標(biāo)、參考區(qū)間等方面寫明擬申報產(chǎn)品與境內(nèi)、外已上市同類產(chǎn)品和/或前代產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。4.預(yù)期用途4.1預(yù)期用途說明產(chǎn)品用于體外定量測定人體樣本中乳酸脫氫酶的活性，應(yīng)明確具體的樣本類型如血清、血漿等，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實際的分析性能研究及臨床研究情況進行確認(rèn)。臨床適應(yīng)證：乳酸脫氫酶（LDH）廣泛分布于各組織，特別是在心、肝、肌肉和腎中。根據(jù)電泳遷移率的不同，血清中的LDH可被分為5種不同的同工酶。每個同工酶都是由兩個不同亞基組成的四聚體。這兩種亞基根據(jù)多肽鏈的不同，被命名為心型和肌型。5種同工酶中，有2種是同源四聚體：LDH-1（心）和LDH-5（肌肉），其他3種為雜合體。血清LDH升高見于多種疾病。臨床上主要用于心肌梗死、肝病等疾病的輔助診斷。臨床適應(yīng)證應(yīng)鑒別疾病等的發(fā)生率、易感人群、分析物的詳細介紹及與臨床適應(yīng)證的關(guān)系，相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法。適用人群：目標(biāo)患者/人群的信息，對于適用人群包含亞群、兒童或新生兒的情況，應(yīng)進行明確。預(yù)期使用者：專業(yè)或非專業(yè)。4.2預(yù)期使用環(huán)境提供申報產(chǎn)品預(yù)期使用的地點及可能會影響其安全性和有效性的環(huán)境條件（如溫度、濕度、海拔）等。5.提供申報產(chǎn)品上市歷史情況（如適用）。6.其他需說明的內(nèi)容除申報產(chǎn)品外，還需提供測定系統(tǒng)的其他組成部分，如樣本處理用試劑、適用儀器、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品、獨立軟件等的基本信息，并說明其在測定中發(fā)揮的作用。對于已獲得批準(zhǔn)的測定系統(tǒng)的其他組成部分，應(yīng)當(dāng)提供注冊證編號和國家藥監(jiān)局官方網(wǎng)站公布的注冊證信息。（三）非臨床資料1.章節(jié)目錄應(yīng)包括本章的所有標(biāo)題和小標(biāo)題，注明目錄中各內(nèi)容的頁碼。2.產(chǎn)品風(fēng)險管理資料申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品生命周期的各個環(huán)節(jié)，從產(chǎn)品設(shè)計開發(fā)、原材料的采購控制、生產(chǎn)、預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知和可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進行風(fēng)險分析、風(fēng)險評價和相應(yīng)的風(fēng)險控制基礎(chǔ)上，綜合評價產(chǎn)品風(fēng)險可接受程度，形成風(fēng)險管理資料。應(yīng)符合GB/T42062《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。3.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單產(chǎn)品應(yīng)符合《體外診斷試劑安全和性能基本原則清單》各項適用要求所采用的方法，以及證明其符合性的文件。對于其中不適用的各項要求，應(yīng)當(dāng)說明理由。對于包含在產(chǎn)品注冊申報資料中的文件，應(yīng)當(dāng)說明其在申報資料中的具體位置；對于未包含在產(chǎn)品注冊申報資料中的文件，應(yīng)當(dāng)注明該證據(jù)文件名稱及其在質(zhì)量管理體系文件中的編號以備查。4.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告4.1適用的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)申報產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)符合適用的強制性標(biāo)準(zhǔn)。對于強制性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，若申報產(chǎn)品結(jié)構(gòu)特征、技術(shù)原理、預(yù)期用途、使用方式等與強制性標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍不一致，申請人應(yīng)當(dāng)提出不適用強制性標(biāo)準(zhǔn)的說明，并提供經(jīng)驗證的證明性資料。4.2產(chǎn)品技術(shù)要求申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的有關(guān)要求進行產(chǎn)品技術(shù)要求編寫。產(chǎn)品技術(shù)要求的性能指標(biāo)應(yīng)不低于國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。產(chǎn)品各性能指標(biāo)建議不低于YY/T1241《乳酸脫氫酶測定試劑（盒）》的要求。如有修訂，以最新發(fā)布版本為準(zhǔn)。不同方法學(xué)的產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)方法學(xué)特點制訂不同的性能指標(biāo)。產(chǎn)品的檢驗方法需根據(jù)技術(shù)性能指標(biāo)設(shè)定，檢驗方法需優(yōu)先采用公認(rèn)的或已頒布的標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法；自建檢驗方法應(yīng)進行方法學(xué)研究，以確保檢驗方法的科學(xué)性、準(zhǔn)確性、可重現(xiàn)性和可操作性。4.3產(chǎn)品檢驗報告在保證產(chǎn)品原材料和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)上，采用在符合醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系相關(guān)要求的條件下生產(chǎn)的產(chǎn)品進行檢驗。有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品的，應(yīng)當(dāng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對產(chǎn)品進行檢驗。可提交以下任一形式的檢驗報告：（1）申請人出具的自檢報告。（2）委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗機構(gòu)出具的檢驗報告。如產(chǎn)品提交自檢報告，還需按照《醫(yī)療器械注冊自檢管理規(guī)定》的要求提交相應(yīng)資料。5.分析性能評估申請人應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的生產(chǎn)環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進行的所有性能評估驗證的研究資料，對于每項分析性能的研究都應(yīng)包括研究目的、試驗設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細資料。分析性能研究的試驗方法，可以參考《定量檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導(dǎo)原則》或YY/T1789《體外診斷檢驗系統(tǒng)性能評價方法》系列標(biāo)準(zhǔn)。分析性能評估時應(yīng)將試劑、儀器和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能評估的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括試驗時間、地點、檢驗人員、適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品、臨床樣本來源等。用于分析性能評估的樣本，應(yīng)盡量與預(yù)期適用的真實臨床樣本一致，并按照說明書描述的方式進行樣本采集、處理、運輸和保存。如申報產(chǎn)品適用不同的機型，需要提交在不同機型上進行評估的資料。如試劑包含不同包裝規(guī)格，需對各包裝規(guī)格間的差異進行分析或驗證。如不同規(guī)格間存在性能差異，需采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行分析性能評估；如不同規(guī)格間不存在性能差異，需要詳細說明各規(guī)格間的差別及可能產(chǎn)生的影響，采用具有代表性的包裝規(guī)格進行分析性能評估。5.1樣本穩(wěn)定性應(yīng)充分考慮實際使用過程中樣本采集、處理、運輸及保存等各個階段的條件，對不同類型樣本的穩(wěn)定性分別進行評價并提交研究資料。包括建議的保存條件（如溫度范圍、是否需要避光等）、添加劑（如抗凝劑等）和運輸條件（如涉及）等。LDH尤其是LDH-4和LDH-5與其它酶不同，不是熱變性而是冷變性，易受冷藏或冷凍的影響，在4℃貯存活性下降快于室溫25℃，申請人應(yīng)充分研究確定適合的樣本儲存條件。對于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。樣本穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【樣本要求】中進行詳細描述。5.2適用的樣本類型申請人應(yīng)對適用的樣本類型及添加劑進行適用性確認(rèn)。如試劑盒不僅適用于一種血液樣本類型，則應(yīng)選擇具有統(tǒng)計學(xué)意義數(shù)量的樣本進行樣本一致性的同源比對研究。研究樣本應(yīng)包含醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限濃度附近的樣本。采用抗凝劑時，應(yīng)說明抗凝劑對樣本測定結(jié)果的影響。樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義，說明樣本的來源及制備方法。5.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值（如適用）可參考GB/T21415《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》、YY/T1709《外診斷試劑用校準(zhǔn)物測量不確定度評定》、YY/T1549《生化分析用校準(zhǔn)物》、YY/T1662《生化分析儀用質(zhì)控物》、YY/T1652《體外診斷試劑用質(zhì)控物通用技術(shù)要求》的要求，提供試劑配套校準(zhǔn)品量值溯源相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。同時，應(yīng)對校準(zhǔn)品的正確度、質(zhì)控品的可接受區(qū)間/值（預(yù)期結(jié)果）以及校準(zhǔn)品/質(zhì)控品的均勻性進行評價。5.4正確度對測量正確度的評價，可采用參考物質(zhì)檢測、方法學(xué)比對、回收試驗等方法，申請人可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。5.4.1參考物質(zhì)測定參考物質(zhì)包括具有互換性的有證參考物質(zhì)、公認(rèn)的參考品、標(biāo)準(zhǔn)品，參考測量程序賦值的臨床樣本等。不可采用產(chǎn)品校準(zhǔn)品、申報試劑檢測系統(tǒng)定值的質(zhì)控品進行正確度評價。采用至少兩個濃度的參考物質(zhì)，代表臨床意義相關(guān)的高、低濃度水平，進行多次重復(fù)測定，根據(jù)測定結(jié)果平均值與參考量值計算偏倚。如參考物質(zhì)只有一個水平，且無合理稀釋方法，亦可在說明原因的基礎(chǔ)上，僅采用一個水平的參考物質(zhì)進行正確度評價，結(jié)果應(yīng)在申請人給定范圍內(nèi)。5.4.2方法學(xué)比對采用參考測量程序或國內(nèi)普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時測定一批臨床樣品，臨床樣本的濃度水平應(yīng)覆蓋申報試劑的測量區(qū)間并均勻分布。比較兩種方法之間的偏倚，如果偏倚在申請人給定的允許誤差范圍內(nèi)，說明兩種測定系統(tǒng)對樣本的測定結(jié)果基本相符。擬申報試劑與比對試劑相比，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋不會產(chǎn)生差異結(jié)果。在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和比對試劑進行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意適用機型、質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。如條件允許，建議與具有相同溯源性的分析系統(tǒng)作比對。樣本盡可能使用新鮮樣本。5.4.3回收試驗將標(biāo)準(zhǔn)溶液、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或分析物純品加入臨床樣本中，配制成回收樣品，進行檢測。標(biāo)準(zhǔn)溶液、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的體積與臨床樣本的體積比應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化，一般加入體積不超過總體積的10%。檢測至少3個水平的回收樣品，代表試劑測量區(qū)間內(nèi)的高、中、低濃度，其中應(yīng)包括醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限附近的濃度。每個濃度應(yīng)進行多次重復(fù)檢測，采用檢測結(jié)果平均值計算回收率。5.5精密度應(yīng)根據(jù)各測量條件對檢測結(jié)果影響程度的分析，設(shè)計合理的精密度試驗方案進行評價，包括重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性。精密度研究用樣本一般為臨床實際檢測樣本或其混合物。樣本濃度一般包括測量區(qū)間高、中、低在內(nèi)的3～5個水平，應(yīng)有醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限濃度附近的樣本。精密度研究可能涉及多天、多地點檢測，應(yīng)確保樣本的穩(wěn)定性和一致性，可將樣本等分保存。5.6空白限、檢出限、定量限5.6.1空白限、檢出限與定量限的建立空白限（LoB），檢出限(LoD)，定量限(LoQ)的建立需分別選擇多個獨立的樣本（空白樣本、低濃度水平樣本、已知濃度的低水平樣本），在多天內(nèi)進行研究?？瞻紫抟话阌啥鄠€獨立的空白樣本（無分析物）的測定結(jié)果，經(jīng)計算獲得；檢出限一般由多個低濃度（含有分析物）樣本的測定結(jié)果結(jié)合空白限（或單獨計算）獲得。定量限應(yīng)滿足預(yù)設(shè)正確度指標(biāo)，即考慮偏倚和精密度的要求。5.6.2空白限、檢出限與定量限的驗證空白限、檢出限及定量限的驗證，每個項目需選擇至少2個樣本（空白樣本、檢出限濃度樣本、定量限濃度樣本），在多天內(nèi)進行試驗。每個試劑批次至少需要獲得20個檢測結(jié)果，計算與5.6.1研究獲得的空白限、檢出限及定量限呈現(xiàn)一致性的檢測結(jié)果比例，如果比例符合統(tǒng)計學(xué)要求/預(yù)設(shè)的臨界值，則空白限、檢出限及定量限得到驗證。5.7分析特異性干擾物質(zhì)研究應(yīng)當(dāng)考慮常見的內(nèi)源性干擾、外源性干擾和已有報道的干擾物質(zhì)等對產(chǎn)品測定結(jié)果的影響。常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等，常見的外源性干擾物質(zhì)包括樣本添加劑（如防腐劑）、常用藥物及其代謝物（如維生素C）、患者群體使用的藥物及其代謝物、膳食物質(zhì)、樣本收集或處理過程中接觸到的物質(zhì)，樣本污染物；亦應(yīng)考慮文獻中已報道的對類似試劑或測量程序存在干擾的物質(zhì)。研究的干擾物質(zhì)濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度，并對干擾的程度進行量化。將研究結(jié)果在說明書中進行描述，明確干擾物質(zhì)影響的最大濃度。5.8線性區(qū)間與測量區(qū)間5.8.1線性區(qū)間線性區(qū)間的研究所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，需采用高值和零濃度/低值樣本配制一系列不同濃度的樣本。當(dāng)建立試劑的線性區(qū)間時，需配制較預(yù)期線性區(qū)間更寬的9-11個左右不同濃度的樣本（不包括零濃度樣本），每個樣本進行多次重復(fù)檢測，根據(jù)可接受線性偏差和各濃度的重復(fù)性，確定檢測次數(shù)。采用重復(fù)檢測均值和預(yù)期值進行直線回歸分析，建議采用加權(quán)最小二乘回歸等分析方法，提供散點圖、線性回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)（r）及線性偏差，判斷結(jié)果是否滿足可接受標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)驗證試劑的線性區(qū)間時，需配制覆蓋整個線性區(qū)間的至少5-7個不同濃度的樣本，每個樣本至少重復(fù)檢測2次。5.8.2測量區(qū)間測量區(qū)間，也稱分析測量區(qū)間，在該區(qū)間內(nèi)，臨床樣本在未經(jīng)稀釋、濃縮，或非常規(guī)測量程序步驟中的其他前處理情況下，檢測結(jié)果的線性偏差、不精密度和偏倚均在可接受范圍內(nèi)。測量區(qū)間下限為定量限，線性區(qū)間包含測量區(qū)間。如對超出測量區(qū)間濃度的樣本可進行稀釋后檢測，應(yīng)研究合適的稀釋液和稀釋倍數(shù)，從而確定試劑的可報告區(qū)間。6.穩(wěn)定性研究一般應(yīng)包含研究方案、報告和數(shù)據(jù)三部分內(nèi)容。6.1實時穩(wěn)定性提交至少三批申報產(chǎn)品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的實時穩(wěn)定性研究資料。明確儲存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。6.2使用穩(wěn)定性提交申報產(chǎn)品實際使用期間穩(wěn)定性的研究資料，應(yīng)包括所有組成成分的開瓶穩(wěn)定性。適用時提交復(fù)溶穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)研究資料等。如產(chǎn)品中包含校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，還應(yīng)提交校準(zhǔn)、質(zhì)控頻率或校準(zhǔn)、質(zhì)控穩(wěn)定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。6.3運輸穩(wěn)定性提交申報產(chǎn)品可在特定或者預(yù)期的條件下運輸?shù)难芯抠Y料，應(yīng)說明產(chǎn)品正確運輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機械保護等）。同時說明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運輸條件。運輸穩(wěn)定性研究可結(jié)合于實時穩(wěn)定性研究中。試劑的穩(wěn)定性研究應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進行研究。試劑穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】中進行詳細描述。7.參考區(qū)間申報產(chǎn)品可以建立自己的參考區(qū)間或驗證參考區(qū)間，但都要確保參考區(qū)間的可溯源性，記錄確定參考區(qū)間的所有步驟，包括參考個體的選擇、分析前因素、樣本檢測以及統(tǒng)計分析方法等。如參考已發(fā)布實施的臨床檢測參考區(qū)間標(biāo)準(zhǔn)等驗證參考區(qū)間，應(yīng)依據(jù)《體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊審查指導(dǎo)原則》中“（二）參考區(qū)間的驗證”章節(jié)相關(guān)條件進行驗證，如驗證通過，可直接采用經(jīng)驗證的參考區(qū)間；如驗證不通過，應(yīng)建立參考區(qū)間。參考區(qū)間的建立應(yīng)參考《體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊審查指導(dǎo)原則》中“（一）參考區(qū)間的建立”章節(jié)相關(guān)要求，提交建立參考區(qū)間所采用樣本來源及詳細的試驗資料。參考樣本應(yīng)明確納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，樣本選擇應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的預(yù)期用途，考慮不同年齡、性別、地域等因素的影響，納入的樣本應(yīng)具有代表性。乳酸脫氫酶不同年齡階段（嬰兒、兒童及成人）濃度水平相差較大，申請人可根據(jù)實際情況進行分組研究，例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。8.其他資料8.1反應(yīng)體系（如需提供）反應(yīng)體系研究資料包括樣本的制備方式（采集和處理）、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法（如有）、質(zhì)控方法等。8.2主要原材料研究資料和生產(chǎn)工藝研究資料（如需提供）主要研究資料包括主要原材料的資料。如涉及企業(yè)參考品，還應(yīng)提交企業(yè)參考品生產(chǎn)工藝的研究資料主要為生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)8.3三批產(chǎn)品的生產(chǎn)及自檢記錄。提供三批產(chǎn)品生產(chǎn)及自檢記錄的復(fù)印件。如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品和（或）質(zhì)控品，還應(yīng)提供校準(zhǔn)品的賦值記錄和質(zhì)控品的定值記錄。8.4證明產(chǎn)品安全性、有效性的其他非臨床研究資料。（四）臨床評價資料根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關(guān)要求，該項目已列入《免于臨床試驗體外診斷試劑目錄》，申請人可按照《免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術(shù)指導(dǎo)原則》要求進行臨床評價。申請人也可通過臨床試驗的方式進行臨床評價；如申請人無法按要求進行臨床評價或預(yù)期用途超出豁免目錄中的描述，應(yīng)進行臨床試驗；臨床試驗的倫理、方案的制定以及報告的撰寫等臨床試驗資料均應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》對臨床評價資料的規(guī)定，相關(guān)資料簽章應(yīng)符合《醫(yī)療器械臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽的格式應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》、《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標(biāo)注，并單獨列明參考文獻的相關(guān)信息。境外試劑應(yīng)當(dāng)提交產(chǎn)品原文說明書，中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達習(xí)慣。以下內(nèi)容僅對乳酸脫氫酶測定試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，說明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》要求進行編寫。1.【產(chǎn)品名稱】通用名稱，試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：乳酸脫氫酶測定試劑盒（乳酸底物法）。2.【包裝規(guī)格】注（1）包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙試劑類型；（2）包裝規(guī)格應(yīng)明確裝量（如××mL；××人份）；（3）帶有校準(zhǔn)品或質(zhì)控品應(yīng)明確標(biāo)識；（4）與產(chǎn)品技術(shù)要求中所列的包裝規(guī)格一致；（5）如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機型，應(yīng)同時明確適用機型。3.【預(yù)期用途】內(nèi)容共分為兩段：第一段說明試劑用于體外定量測定人樣本（血清或血漿）中乳酸脫氫酶的活性。第二段應(yīng)明確與目的測定物相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。4.【檢驗原理】根據(jù)產(chǎn)品采用的方法學(xué)說明檢驗的原理，測定原理的描述應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要組成成分、被測物和產(chǎn)物的關(guān)系進行描述，必要時可結(jié)合圖示方法描述。如：在堿性條件下，乳酸脫氫酶催化L-乳酸生成丙酮酸，同時將NAD+還原為NADH，因此在37℃、340nm波長下監(jiān)測吸光度上升速率，可得出乳酸脫氫酶的活性。反應(yīng)式如下：L-乳酸+NAD+丙酮酸+NADH+H+5.【主要組成成分】應(yīng)明確以下內(nèi)容：5.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度信息。對于多組分產(chǎn)品，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。5.2產(chǎn)品如包含校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，應(yīng)明確具體基質(zhì)成分，此外，校準(zhǔn)品應(yīng)明確定值及其溯源性，質(zhì)控品應(yīng)注明靶值和靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。5.3試劑盒中不包含但對該項檢測必需的組分，應(yīng)列明檢測所需但未包含在本試劑盒中的試劑名稱。如該試劑已取得注冊證號/備案號，需注明“注冊證號/備案號及貨號”；如該試劑正處于注冊/備案階段，需注明“貨號及注冊證號:（留空）/備案號:（留空）”。6.【儲存條件及有效期】對試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、使用穩(wěn)定性、在機穩(wěn)定性等信息做詳細介紹，包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。如注冊單元含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品且其形態(tài)為干粉（包含試劑為凍干粉狀態(tài)），則應(yīng)對復(fù)溶后的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細介紹。保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位。如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對各組分的儲存條件和有效期分別進行描述。對于可以冷凍的試劑應(yīng)注明凍融次數(shù)限制。注明“生產(chǎn)日期、使用期限或者失效日期見標(biāo)簽”的字樣。7.【適用儀器】明確所適用的儀器類型，應(yīng)細化到具體廠家、型號。如需要可提供與儀器有關(guān)的信息以便指導(dǎo)用戶操作。如適用儀器為非通用的儀器則需寫明其具體型號，避免“系列”。8.【樣本要求】建議明確以下內(nèi)容：8.1樣本的類型：明確適用的樣本類型，如有抗凝血應(yīng)明確抗凝劑。8.2當(dāng)樣本為血漿時，其處理過程可能會使血小板和紅細胞中大量的LDH釋放，導(dǎo)致LDH水平異常升高，得到錯誤的檢測結(jié)果。樣本為血清時，因紅細胞中LDH含量比血清高100倍以上，不宜用溶血血清為測定標(biāo)本。為避免干擾，采血后應(yīng)立即分離血清、血漿。8.3為保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確，血清和血漿樣本應(yīng)不含纖維蛋白、紅細胞和其他顆粒物質(zhì)。從接受抗凝劑或溶栓劑治療的患者身上獲得的血清樣本可能因凝固不完全而含有纖維蛋白，這可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果錯誤。8.4樣本的穩(wěn)定性：明確樣本采集后和處理后的保存條件和期限等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需恢復(fù)至室溫、凍融次數(shù)的要求。以上內(nèi)容應(yīng)與樣本穩(wěn)定性的研究結(jié)果一致。9.【檢驗方法】應(yīng)詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：9.1試劑使用方法：各試劑組分的稀釋、混合及其他必要的程序、注意事項等。9.2試驗條件：時間、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向（如有）、反應(yīng)時間（如有）等以及試驗過程中的注意事項試驗環(huán)境的溫度、濕度等注意事項，檢驗試劑及樣本復(fù)溫、試劑孵育溫度等要求。9.3校準(zhǔn)程序：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、校準(zhǔn)曲線的繪制。校準(zhǔn)有效期及需要重新校準(zhǔn)的情況。推薦的校準(zhǔn)周期。9.4質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。9.5試驗結(jié)果的計算或讀取，包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。如果可能，應(yīng)舉例說明。10.【參考區(qū)間】分別說明常用樣本類型的參考區(qū)間，并簡要說明參考區(qū)間的確定方法。應(yīng)包含參考區(qū)間確定的基本信息，包括：樣本量、參考人群特