《游離DNA保存采血管》

ICS

CCS

團體標(biāo)準(zhǔn)

T/FJASXXX—XXXX

游離DNA保存采血管

CellFreeDNAPreservativeTubes

（征求意見稿）

2023-xx-xx發(fā)布2023-xx-xx實施

福建省標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會發(fā)布

游離DNA保存采血管

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了游離DNA保存采血管的產(chǎn)品總體要求、試驗方法、檢驗規(guī)則及色標(biāo)、生產(chǎn)

商提供的信息、生產(chǎn)條件、運輸及貯存、有效期等要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適應(yīng)于游離DNA保存采血管制造商、開展游離DNA生物學(xué)功能及臨床應(yīng)用研究的

科研院所、開展游離DNA檢測（如NIPT、腫瘤液體活檢、病原微生物宏基因組檢測等）的

醫(yī)學(xué)檢驗實驗室等。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本條款的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其

隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修改版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，凡是不注日期的引用

文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

WS/T224-2018真空采血管的性能驗證

YY/T0314-2021一次性使用人體靜脈血樣采集容器

GB15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.1

游離DNAcell-freeDNA

存在于外周血中、游離于細胞外的機體內(nèi)源性DNA。

3.2

游離DNA保存液cellfreeDNApreservationsolution

為了進行預(yù)定的檢驗，放置在采血管內(nèi)的便于血樣中游離DNA保存的物質(zhì)（不包括用于

內(nèi)表面處理的不能清除掉的物質(zhì)）。

3.3

保存容器container

采血管上除去附加物和丁基膠塞、安全帽用于裝血樣的部分。

3.4

丁基膠塞butylrubberclosures

1

用丁基橡膠制成用于密閉保存容器的組件。

3.5

安全帽protectivecap

避免手指或機械裝置觸及到丁基膠塞與血樣接觸的部分，以免造成污染所設(shè)計的屏障，

一般為塑料注塑件。

3.6

保水性water-retainingproperty

容器保存液體和防止液體流失、揮發(fā)方面的性能。

3.7

無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測NIPTNoninvasiveprenataltesting

通過抽取孕婦外周血，提取血漿中的游離DNA，采用高通量測序技術(shù)，結(jié)合生物信息分

析方法，評估胎兒患21三體綜合征、18三體綜合征和13三體綜合征疾病風(fēng)險的臨床檢驗

方法。

3.8

腫瘤液體活檢LiquidBiopsy

通過檢測或分析外周血等體液中腫瘤細胞來源的游離DNA的相關(guān)信息，實現(xiàn)對腫瘤的早

篩、診斷、預(yù)后評估和治療指導(dǎo)等。

3.9

病原微生物宏基因組檢測mNGSMetagenomicsNextGenerationSequencing

對感染樣本（包括血液樣本）中微生物的核酸(DNA/RNA)進行高通量測序，將獲得的序

列與微生物數(shù)據(jù)庫進行比對，從而確定樣本中存在的病原體，為臨床疑似感染病例的診斷提

供病原學(xué)證據(jù)。

3.10

YY/T0314-2021中確定的術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

4總體要求

4.1材料及結(jié)構(gòu)

4.1.1丁基膠塞和安全帽，應(yīng)光亮潔凈無銳邊；保存容器外觀應(yīng)無雜質(zhì)，沒有會導(dǎo)致使用者

的皮膚或手套受到意外劃傷、刺破或磨傷的銳邊、毛刺或粗糙表面。

4.1.2保存容器與丁基膠塞配合不應(yīng)松動，安全帽應(yīng)完全蓋住丁基膠塞，塞子與保存容器

2

緊密結(jié)合；應(yīng)能經(jīng)受至少4次取下和裝上塞子，不出現(xiàn)泄漏。

4.1.3需要對保存容器、丁基膠塞的材料和預(yù)期的適用性進行確認，充分考慮其材料的可承

受離心力、耐壓、防摔、抗凍、耐輻照等性能。按規(guī)定的方法進行試驗時，采血管縱軸方向

應(yīng)能承受最小3000g的離心加速度，且無斷裂、坍塌、裂縫或其他可見缺陷。

注：無菌管采用輻射（輻照）的滅菌方法，要求其材料滿足耐輻照的能力，輻照應(yīng)是一個確

認的過程。

4.2游離DNA保存液

4.2.1應(yīng)為清亮透明液體，不得有沉淀、顆粒或絮狀物及體積變少等現(xiàn)象。

4.2.2應(yīng)充分考慮保存液的穩(wěn)定性，pH值、光照、貯存溫度和時間等因素對其影響，PH值

5.5±10%。

4.2.3保存液的體積應(yīng)在規(guī)定體積的90%-110%之間。

4.3非無菌、無菌和無DNA管

4.3.1非無菌管

4.3.1.1采血管內(nèi)部的細菌菌落數(shù)≤10cfu/mL。

4.3.1.2采血管內(nèi)部不得檢測出大腸菌群。

4.3.1.3采血管內(nèi)部不得檢測出致病性化膿菌（綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌與溶血性鏈球

菌）。

4.3.1.4采血管內(nèi)部的真菌菌落數(shù)≤10cfu/mL。

4.3.2無菌管

用輻照滅菌方式實現(xiàn)，在產(chǎn)品有效期內(nèi)應(yīng)是無菌的。

注：對于無菌管，通常采用輻射（輻照）的滅菌方法，具體的滅菌過程確認和常規(guī)控制，參

見GB18280（ISO11137）

4.3.3無DNA管

采血管內(nèi)部不得檢測出DNA殘留。

4.4抽吸體積

抽吸體積加上游離DNA保存液的體積應(yīng)在公稱容量的90%-110%以內(nèi)。

4.5保存有效期

游離DNA保存液應(yīng)能在常溫（6℃-37℃）靜置條件下保存人體靜脈血樣本中游離DNA

至少7天，常溫（6℃-37℃）運輸條件下保存人體靜脈血樣本中游離DNA至少4天。

4.6凝血和溶血要求

3

4.6.1按照正確的采血步驟使用采血管采血后，充分混勻的樣本在保存有效期內(nèi)在采血管中

不應(yīng)出現(xiàn)凝塊。

4.6.2按照正確的采血步驟使用采血管采血后，充分混勻的樣本在保存有效期內(nèi)進行離心，

血漿不應(yīng)出現(xiàn)溶血現(xiàn)象（臨床原因除外）。

4.7游離DNA保存效果

4.7.1使用采血管收集靜脈血并離心獲得血漿，提取血漿游離DNA，每1mL血漿中獲得的游

離DNA應(yīng)不少于10ng（除提取因素外）。

4.7.2對提取的游離DNA進行片段大小檢測，主峰應(yīng)在166bp左右，且無大片段污染。

4.7.3臨床檢測項目可根據(jù)該項目的行業(yè)或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)來判定是否滿足臨床檢測需求。

5試驗方法

5.1材料及結(jié)構(gòu)

5.1.1在平均照度為300lx～750lx范圍內(nèi)且無放大條件下，以目力和手感檢測的方法進

行檢驗。

5.1.2保存容器與丁基膠塞配合采用拉拔試驗進行測試；安全帽是否完全蓋住丁基膠塞以目

測的方法進行；熒光泄漏試驗方法參考YY/T0314-2021附錄C。

5.1.3管體強度檢測方法參考WS/T224—20184.3。

5.2游離DNA保存液

5.2.1保存液外觀用目力檢測的方法進行。

5.2.2在溫度25℃條件下，用經(jīng)校準(zhǔn)的pH計對保存液進行pH值檢測。

5.2.3保存液體積測量方法

5.2.3.1儀器

經(jīng)校準(zhǔn)的電子天平，精確至小數(shù)點后三位，即0.001g。

架子，在稱重期間保持采血管直立且處于正確方位。

移液槍、離心機。

5.2.3.2試驗步驟

5.2.3.2.1將采血管置于天平上，稱皮重（置零），記錄下數(shù)據(jù)A。

5.2.3.2.2將稱重后的采血管置于離心機中，3000g離心1mim，取下采血管。

5.2.3.2.3輕輕打開采血管的安全帽，使用移液槍緩慢吸取游離DNA保存液，直至完全吸盡

為止后蓋上安全帽。

4

5.2.3.2.4將無游離DNA保存液的空采血管置于電子天平上，稱重（置零），記錄下數(shù)據(jù)B。

5.2.3.2.5數(shù)據(jù)A-B即為游離DNA保存液質(zhì)量，再用V=M/ρ換算成體積。

5.3非無菌、無菌和無DNA管

5.3.1非無菌管

5.3.1.1采血管內(nèi)部的細菌菌落總數(shù)

按照GB15979-2002附錄B2方法進行檢驗。

5.3.1.2采血管內(nèi)部的大腸菌群

按照GB15979-2002附錄B3方法進行檢驗。

5.3.1.3采血管內(nèi)部的致病性化膿菌

5.3.1.3.1綠膿桿菌

按照GB15979-2002附錄B4方法進行檢驗。

5.3.1.3.2金黃色葡萄球菌

按照GB15979-2002附錄B5方法進行檢驗。

5.3.1.3.3溶血性鏈球菌

按照GB15979-2002附錄B6方法進行檢驗。

5.3.1.4采血管內(nèi)部的真菌菌落數(shù)

按照GB15979-2002附錄B7方法進行檢驗。

5.3.2無菌管

無菌及驗證方法按WS/T224-2018中4.7條規(guī)定的方法進行檢驗。

5.3.3無DNA管

任意抽取需檢測的無DNA采血管3支，用10mL0.9%無菌氯化鈉溶液進行振蕩溶解，

作為供試液備用。取2mL供試液提取供試DNA樣本。取2mL0.9%無菌氯化鈉溶液作為陰性

對照。取人細胞或大腸埃希菌DNA作為陽性對照。用SYBRGreen熒光PCR法分別檢測供試

DNA樣本、陰性對照和陽性對照（引物參見附錄A）。供試品管和陰性對照熒光PCR法檢測

結(jié)果Ct值≥40或無Ct值，且陽性對照結(jié)果﹤30時，供試品管為合格。供試品管Ct值﹤40，

陰性對照Ct值≥40或無Ct值，陽性對照Ct值﹤30時，供試品管為不合格。陰性對照Ct

值﹤40或陽性對照Ct值≥30或無Ct值時，實驗無效。

5.4抽吸體積

抽吸體積的驗證按WS/T224—2018中4.2條規(guī)定的方法進行檢驗。

5.5保存有效期

5

對抽取人體靜脈血樣本的采血管常溫（6℃-37℃）靜置貯存7天或常溫（6℃-37℃）運

輸4天后，通過5.7游離DNA保存效果試驗進行判斷。

5.6凝血和溶血要求

5.6.1按照正確的采血步驟進行采血后，充分混勻血液樣本，在樣本保存有效期內(nèi)任意一天，

在顯微鏡下觀察血液樣本應(yīng)無凝塊。

5.6.2按照正確的采血步驟進行采血后，充分混勻血液樣本，在樣本保存有效期內(nèi)任意一天，

對血液樣本進行離心，目力檢測上層血漿，不應(yīng)出現(xiàn)溶血現(xiàn)象（臨床原因除外）。

5.7游離DNA保存效果

5.7.1采血管對游離DNA的保存效果受到采血后樣本保存的時間、環(huán)境（溫濕度等）、采血

管批次等方面的影響，需要對采血管的性能進行充分驗證：

a)模擬臨床樣本的采集、運輸及試驗過程，比較在預(yù)定的條件和采集樣本后立即檢測兩種

情況下，通過對比實驗參數(shù)判斷采血管在預(yù)定的條件下是否滿足要求。

b)模擬臨床樣本的采集、運輸及試驗過程，通過比較考察管與比對管的差異，進行采血管

的性能驗證，必要時可建立新的樣本采集、運輸及保存的方式。

5.7.2檢測方法

5.7.2.1儀器

低溫離心機、核酸定量熒光計、毛細管電泳核酸分析儀。

5.7.2.2試劑

游離DNA提取試劑、熒光計配套的熒光染料法核酸檢測試劑、毛細管電泳核酸分析儀配套耗

材和試劑。

5.7.2.3檢測步驟

5.7.2.3.1采集3例以上血液樣本。

5.7.2.3.2將采血管在4℃條件下1600g離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中，注意不

要吸取到中間層白細胞；將所得上清在4℃條件下16000g離心10分鐘，將血漿轉(zhuǎn)移到一個

新的離心管中備用。

5.7.2.3.3使用游離DNA提取試劑從4mL血漿中的提取游離DNA。

5.7.2.3.4使用熒光染料法核酸檢測試劑和核酸定量熒光計檢測游離DNA的濃度，結(jié)果應(yīng)符

合4.7.1的要求。

5.7.2.3.5使用毛細管電泳核酸分析儀進行游離DNA片段大小檢測，結(jié)果應(yīng)符合4.7.2的要

求。

6

6檢驗規(guī)則

6.1檢驗要求

有下列情況時都應(yīng)進行檢驗：

a)在新產(chǎn)品投產(chǎn)前或準(zhǔn)備用于臨床之前、轉(zhuǎn)廠生產(chǎn)，應(yīng)對要求中的所有指標(biāo)進行充分檢驗。

b)產(chǎn)品正常生產(chǎn)時，每年應(yīng)至少對要求中的所有指標(biāo)進行檢驗一次。

c)原料、工藝、配方有重大改變時，應(yīng)對可能影響的指標(biāo)進行檢驗。

d）停產(chǎn)一年后恢復(fù)生產(chǎn)時。

e)新的批次在出廠和使用前應(yīng)進行抽檢。

f）省級以上藥品監(jiān)督管理部門對產(chǎn)品質(zhì)量進行監(jiān)督抽查時。

6.2判定規(guī)則

檢驗有一項不合格，可加倍抽樣檢驗，經(jīng)復(fù)驗合格該批產(chǎn)品檢驗合格，若復(fù)驗仍有一項

不合格，則該批產(chǎn)品檢驗不合格。

7色標(biāo)、生產(chǎn)商提供的信息、生產(chǎn)條件、運輸及貯存、有效期

7.1色標(biāo)

游離DNA保存采血管應(yīng)與其他真空采血管區(qū)分，安全帽及標(biāo)簽色彩部分使用紫色PANTONE

236C。

注1：色號參考國際標(biāo)準(zhǔn)色號：PANTONEColor（潘通色卡）。

注2：標(biāo)簽的色標(biāo)不是指整個標(biāo)簽的顏色，而是指其色彩部分。

注3：安全帽顏色是指安全帽的外觀顏色，不包括安全帽內(nèi)部的塞子顏色。

注4：本標(biāo)準(zhǔn)中的色標(biāo)為推薦色標(biāo)。

7.2生產(chǎn)商提供的信息

7.2.1采血管應(yīng)附有便于使用者能夠快速識別產(chǎn)品的信息，將產(chǎn)品的正確使用方法、功能、

要求方面的信息傳遞給使用者。這些信息應(yīng)標(biāo)注在采血管的標(biāo)簽上和（或）一個采血管或多

個采血管的包裝上（內(nèi)）。

7.2.2采血管的標(biāo)簽不應(yīng)將采血管全部環(huán)繞。標(biāo)簽內(nèi)容正確，清晰易辨識，粘貼平整，無皺

褶翹邊、劃破、污漬。

7.2.3最小銷售單元標(biāo)簽應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管

理總局令第6號）要求，標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)明必要信息，包含但不限于以下內(nèi)容：

a)制造商名稱或商標(biāo)和地址；

b)保存液的識別或用途；

c)相應(yīng)的“無菌”標(biāo)識，表明特定微生物狀態(tài)或潔凈程度說明；

7

d)避免二次使用標(biāo)識；

e)生產(chǎn)許可證編號、產(chǎn)品技術(shù)要求編號及注冊證編號；

f)批號，以批（LOT）開頭或系列號；

g)采血管或其部件能安全有效使用的陳述，即有效期，以年月日（CCYYMMDD）表示；

h)公稱液體容量；

i)充裝線；

j)特殊存儲條件和（或）處置條件；

k)如必要可有相應(yīng)的警示及其他特殊信息。

7.2.4應(yīng)在采血管標(biāo)簽上給出內(nèi)裝添加劑保存液及用途的說明，并用顏色進行標(biāo)識。

注：標(biāo)簽上顏色部分應(yīng)與安全帽色標(biāo)一致。

7.3生產(chǎn)條件

游離DNA保存采血管生產(chǎn)應(yīng)嚴格按照《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求進行生產(chǎn)，生

產(chǎn)車間應(yīng)符合GB50073-2013《潔凈廠房設(shè)計規(guī)范》和YY/T0033-2000《無菌醫(yī)療器具生產(chǎn)

管理規(guī)范》中十萬級（100000級）的相關(guān)規(guī)定，實驗室區(qū)域應(yīng)符合萬級（10000級）的規(guī)定，

其他檢驗設(shè)施設(shè)備應(yīng)符合相應(yīng)要求。

7.4運輸及貯存

7.4.1未使用過的采血管應(yīng)在制造商規(guī)定的溫度下（一般為常溫6℃-37℃）避光運輸和貯存。

7.4.2采血后，可在6℃-37℃保存和運輸，溫度保持恒定。

7.5有效期

游離DNA保存采血管保質(zhì)期為1年。

8

附錄

（資料性附錄）

熒光PCR引物

物種序列名稱序列

正向引物5'-GTACACACCGCCCGTC-3'

18SrRNA

反向引物5'-TGATCCTTCTGCAGGTTCACCTAC-3'

正向引物5'-CCTAYGGGRBGCASCAG-3'

16SrRNA

反向引物5'-TTACCGCGGCTGCTGGCAC-3'

9

參考文獻

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