尿液標(biāo)本臨床微生物實驗室檢驗操作指南

檢驗科WS/T489—2024代替WS/T489—2016尿液標(biāo)本臨床微生物實驗室檢驗操作指南目錄CONTENTS定義1標(biāo)本采集原則2實驗室檢查3結(jié)果報告4操作流程5定義第一節(jié)由各種病原體入侵泌尿系統(tǒng)引起的疾病。根據(jù)感染部位可分為上尿路感染（和下尿路感染；根據(jù)有無尿路異常分為復(fù)雜性和非復(fù)雜性尿路感染。尿路感染新鮮未離心尿液中白細(xì)胞計數(shù)≥10個/mm3；或尿沉渣鏡檢白細(xì)胞計數(shù)≥5個/高倍鏡視野。膿尿指患者尿液中有一種或多種細(xì)菌生長，定量培養(yǎng)菌落計數(shù)≥105CFU/mL，但是患者不存在尿路感染的癥狀或體征（不論是否存在膿尿）。無癥狀菌尿定義

尿路感染患者常出現(xiàn)尿頻、尿急、尿痛等膀胱刺激征，可有肉眼膿尿或血尿、恥骨上區(qū)不適和腰骶部疼痛等表現(xiàn)。對于出現(xiàn)上述癥狀或尿液檢驗結(jié)果提示尿路感染，如白細(xì)胞酯酶異常、亞硝酸鹽陽性等，或不明原因發(fā)熱、留置導(dǎo)尿管患者出現(xiàn)發(fā)熱等情況，建議采集尿液標(biāo)本送檢尿培養(yǎng)。送檢尿培養(yǎng)同時需進(jìn)行尿液常規(guī)檢驗，考慮合并系統(tǒng)感染時宜同時采集血培養(yǎng)。標(biāo)本采集指征標(biāo)本采集原則第二節(jié)宜采集晨尿，囑患者睡前少喝水或不喝水，尿液在膀胱內(nèi)盡量潴留4h以上，可降低假陰性率。使用無菌廣口容器采集，容器直徑大于1cm。女性可疑無癥狀菌尿患者應(yīng)在2周內(nèi)采集2次清晨清潔中段尿送檢。減少采樣污染是保證尿液標(biāo)本質(zhì)量的關(guān)鍵。標(biāo)本采集總則

清晨起床后用肥皂水或清水清洗會陰部，女性應(yīng)分開大陰唇，男性應(yīng)上翻包皮，仔細(xì)清洗，再用清水沖洗尿道口周圍。棄去前段尿液，不中斷尿流，留取中段尿液約10mL至無菌容器中，立即送檢。清潔中段尿是臨床最易獲得的尿液標(biāo)本，但中段尿液標(biāo)本不能進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)。尿流不暢、包皮過長或衛(wèi)生條件不良的患者易造成尿液標(biāo)本污染。女性患者應(yīng)避免在月經(jīng)期間采集尿標(biāo)本。

女性可疑無癥狀菌尿患者應(yīng)在2周內(nèi)采集2次清晨清潔中段尿送檢。若尿液用于分枝桿菌培養(yǎng)，則連續(xù)3天分別采集清晨首次中段尿送檢，每次宜采集至少40mL尿液。清潔中段尿采集

恥骨上穿刺尿液可避免尿液標(biāo)本被尿道或會陰部細(xì)菌污染。消毒臍部至尿道皮膚，對穿刺部位皮膚進(jìn)行局麻；在恥骨聯(lián)合和臍部中線部位將針頭插入充盈的膀胱，從膀胱吸取約20mL尿液；無菌操作將尿液注入無菌螺口杯，送至實驗室。懷疑尿路厭氧菌感染患者、兒童患者、脊柱損傷患者和沒有獲得明確培養(yǎng)結(jié)果的患者可采用該方法。恥骨上膀胱穿刺尿液采集

先消毒導(dǎo)尿管采集部位，按無菌操作方法用注射器穿刺導(dǎo)尿管吸取尿液5mL～10mL；如果需要，將導(dǎo)管夾閉10min～20min后在管中采集尿標(biāo)本。尿液標(biāo)本不能通過收集袋引流管口流出的方式采集。長期留置導(dǎo)尿管的患者，需在更換新的導(dǎo)尿管后留取尿標(biāo)本。膀胱導(dǎo)尿采集

局部消毒后，嚴(yán)格采用無菌技術(shù)使用導(dǎo)尿管經(jīng)尿道插入膀胱收集尿液，棄去最開始導(dǎo)出的15mL~30mL尿液后再收集尿液送檢。注意避免將下尿道細(xì)菌經(jīng)導(dǎo)管引入膀胱，導(dǎo)致繼發(fā)性感染。留置導(dǎo)尿管尿液采集

由于嬰幼兒不能自主控制膀胱收縮，需要用采集袋。此法很難避免會陰部正常菌群的污染，易出現(xiàn)假陽性，因此該方法采集的尿液培養(yǎng)結(jié)果陰性更有意義。如培養(yǎng)結(jié)果陽性，必要時可用膀胱導(dǎo)尿或恥骨上膀胱穿刺法采集尿液標(biāo)本進(jìn)一步確證有無尿路感染。其他采集方法其他不常用的尿液采集方法還包括回腸導(dǎo)管導(dǎo)尿采集、間歇性導(dǎo)尿管采集、腎盂造瘺術(shù)、輸尿管造口術(shù)、膀胱鏡檢查術(shù)采集等。嬰幼兒尿液采集袋采集檢驗前流程標(biāo)本標(biāo)識應(yīng)注明患者的基本信息，宜說明采集方法、采集時間、臨床初步診斷及抗菌藥物使用情況等。標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)尿液標(biāo)本宜在采集后室溫2h內(nèi)送檢。若不能及時送達(dá)，應(yīng)2℃~8℃冷藏或使用含防腐劑的轉(zhuǎn)運(yùn)管，但均不可超過24h。標(biāo)本接收收集尿液容器為廣口的無菌防漏容器，收到尿液標(biāo)本后應(yīng)立即接種。冷藏的標(biāo)本不可用于淋病奈瑟菌培養(yǎng)。010203標(biāo)本標(biāo)識與申請單不符，標(biāo)識錯誤或沒有標(biāo)識未提供采集時間及采集方法標(biāo)本采集時間超過2h而未在2℃~8℃冷藏或未使用含防腐劑的轉(zhuǎn)運(yùn)管保存2℃~8℃冷藏或添加防腐劑但已超過24h連續(xù)收集24h的尿液標(biāo)本0102030405導(dǎo)尿管尖端培養(yǎng)標(biāo)本送檢時容器有滲漏標(biāo)本取自導(dǎo)尿患者尿袋除恥骨上膀胱穿刺法外，采用其他方法采集標(biāo)本申請做厭氧菌培養(yǎng)尿培養(yǎng)采集尿量少于1mL0607080910標(biāo)本拒收收到不合格標(biāo)本，建議與臨床醫(yī)師聯(lián)系，注明拒收的原因并退回，可要求重新留取標(biāo)本，并做記錄。若不合格標(biāo)本無法重新留取但臨床要求培養(yǎng)時，應(yīng)在報告中注明，并強(qiáng)調(diào)該培養(yǎng)結(jié)果僅供參考。實驗室檢查尿路感染診斷、輔助診斷、療效觀察和預(yù)后評估的主要方法第三節(jié)實驗室檢查抗微生物藥物敏感試驗?zāi)蛞焊苫瘜W(xué)分析與尿路感染相關(guān)指標(biāo)尿液有形成分分析與尿路感染相關(guān)指標(biāo)尿培養(yǎng)革蘭染色鏡檢篩查菌尿抗酸染色鏡檢尿路分枝桿菌感染用于診斷尿路感染，可提供感染病原菌的鑒定結(jié)果及菌落計數(shù)檢測致病菌對抗生素藥物敏感性尿液干化學(xué)分析（與尿路感染相關(guān)指標(biāo)）白細(xì)胞酯酶：在中性粒細(xì)胞被破壞或形態(tài)改變時，尿液中仍能夠檢測到白細(xì)胞酯酶，可補(bǔ)充顯微鏡檢查的不足。亞硝酸鹽：陽性常見于大腸埃希菌等革蘭陰性桿菌引起的尿路感染。尿蛋白：參考值為陰性，尿路感染時可為陽性。尿液有形成分分析（與尿路感染相關(guān)指標(biāo)）儀器檢測顯微鏡檢查實驗室檢查革蘭染色鏡檢篩查菌尿的簡便方法，適用于菌落計數(shù)較高的患者。觀察有無菌體、多形核白細(xì)胞和扁平上皮細(xì)胞。抗酸染色鏡檢簡便快速檢測尿路分枝桿菌感染的方法；敏感性低，需多次送檢，建議使用無菌帶蓋試管3000×g離心15min，取沉渣進(jìn)行抗酸染色鏡檢。實驗室檢查接種方法一般尿培養(yǎng)接種方法：對于非侵入性操作采集的尿液標(biāo)本（如清潔中段尿），推薦1μL接種；侵入性操作采集的尿液標(biāo)本（如恥骨上膀胱穿刺尿）或接受抗菌藥物治療的患者留取的尿液，推薦10μL接種。一般尿培養(yǎng)菌落計數(shù)接種方法包括以下幾種：定量接種環(huán)接種法移液器接種法自動化接種法尿培養(yǎng)接種方法分枝桿菌培養(yǎng)接種方法：尿液標(biāo)本通常需要離心后取沉淀部分，前處理去污染處理后，接種至分枝桿菌培養(yǎng)專用固體或液體培養(yǎng)基進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)；侵入性操作獲取的尿液標(biāo)本可不進(jìn)行去污染處理。真菌培養(yǎng)接種方法：可采用標(biāo)本離心后真菌培養(yǎng)方法；留取晨尿離心后接種，取沉淀接種到適當(dāng)培養(yǎng)基上。需注意此種接種方法不能進(jìn)行菌落計數(shù)。尿培養(yǎng)培養(yǎng)要求一般尿培養(yǎng)：35℃～37℃需氧培養(yǎng)，盡量在5％CO2環(huán)境中孵育平板；一般培養(yǎng)18h～24h，當(dāng)存在特殊情況時，應(yīng)延長培養(yǎng)至48h。分枝桿菌培養(yǎng)：35℃～37℃孵育6周～8周。真菌培養(yǎng)：通常28℃±2℃培養(yǎng)7d，每日觀察生長情況；如懷疑雙相真菌或慢生長真菌感染，應(yīng)延長培養(yǎng)6周～8周，每周觀察一次生長情況。尿培養(yǎng)尿培養(yǎng)結(jié)果解釋尿液標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果解釋的總體要求如下：a)實驗室尿培養(yǎng)結(jié)果分析應(yīng)結(jié)合尿液標(biāo)本類型、尿液檢查中的尿白細(xì)胞數(shù)量和白細(xì)胞酯酶、培養(yǎng)菌種和定量結(jié)果等，分析檢出的細(xì)菌/真菌為致病菌或是定植菌。b)通常尿白細(xì)胞數(shù)量升高或白細(xì)胞酯酶陽性的標(biāo)本，培養(yǎng)檢出的細(xì)菌/真菌考慮致病菌可能大。但需注意，對于留置導(dǎo)尿者，不存在感染時尿液中白細(xì)胞數(shù)量也可升高；粒細(xì)胞缺乏者，存在感染時尿液中的白細(xì)胞可不升高。c)尿定量培養(yǎng)菌落計數(shù)對于念珠菌尿路感染的診斷價值不明確，尤其是留置導(dǎo)尿管患者，需要結(jié)合臨床表現(xiàn)和影像學(xué)檢查綜合分析判斷。不同類型尿液標(biāo)本定量培養(yǎng)結(jié)果解釋及處理不同類型尿液標(biāo)本定量培養(yǎng)結(jié)果解釋及處理不同類型尿液標(biāo)本定量培養(yǎng)結(jié)果解釋及處理尿培養(yǎng)分離不同菌種的結(jié)果解釋標(biāo)準(zhǔn)抗微生物藥物敏感試驗：對菌落計數(shù)結(jié)果有意義的臨床分離菌株，鑒定到種水平并進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)抗微生物藥物敏感試驗，可采用微量肉湯稀釋法、紙片擴(kuò)散法、濃度梯度法或自動化藥敏分析儀等。直接抗微生物藥物敏感試驗：直接抗微生物藥物敏感試驗缺乏標(biāo)準(zhǔn)化程序，不建議作為常規(guī)藥敏試驗方法，僅適用于細(xì)菌計數(shù)≥105CFU/mL的分離單一菌種的尿標(biāo)本，由微生物實驗室自行解釋藥敏試驗結(jié)果。0102抗微生物藥物敏感試驗結(jié)果報告第四節(jié)尿液標(biāo)本染色結(jié)果0102a)

陰性：抗酸染色陰性；b)陽性：抗酸染色陽性，可疑分枝桿菌。抗酸染色a)陰性：革蘭染色，未見菌體；見/未見細(xì)胞；b)陽性：革蘭染色，查見菌體；見/未見細(xì)胞。革蘭染色尿液標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果陽性陰性0201一般尿培養(yǎng)結(jié)果

培養(yǎng)XXX天無菌生長，應(yīng)報告“接種1μL尿液，培養(yǎng)XXX天無菌生長”或“接種10μL尿液，培養(yǎng)XXX天無菌生長”；注：