體內(nèi)藥物分析分析方法在濫用藥物檢測(cè)中的應(yīng)用

第六章分析措施在濫用藥物檢測(cè)中的應(yīng)用制作人：組員：第六章分析措施在濫用藥物檢測(cè)中的應(yīng)用1.ONE2.TWO濫用藥物及其危害分析措施在濫用藥物檢測(cè)中的應(yīng)用濫用藥物及其危害藥物濫用（drugabuse）指的是與醫(yī)療目的無關(guān)的反復(fù)大量使用某些具有依賴性或稱依賴性潛力的藥物，用藥者采用自身給藥形式，導(dǎo)致精神依賴性和身體依賴性，導(dǎo)致精神混亂和某些異常行為習(xí)慣稱藥物濫用為“吸毒”。第一節(jié)濫用藥物及其危害藥其他類藥物濫用苯并二氮雜類藥物苯丙胺類中樞興奮劑體育比賽中興奮劑的濫用臨床上濫用鴉片等毒品臨床上濫用藥物抗生素的濫用1激素的濫用2中藥及補(bǔ)藥的濫用3抗生素的濫用對(duì)個(gè)人：過敏和多種副作用體內(nèi)菌群失調(diào)引起二次感染可能性增加長(zhǎng)期使用產(chǎn)生抗藥性危害對(duì)社會(huì)：細(xì)菌感染越來越嚴(yán)重造成負(fù)擔(dān)激素的濫用危害掩蓋病情使感染加重盲目給患有嚴(yán)重高血壓病潰瘍病糖尿病及霉菌感染患者應(yīng)用激素會(huì)使病情加重中藥及補(bǔ)藥的濫用中藥中成藥濫用補(bǔ)藥濫用中藥（巴豆、蒼耳子、六神丸、雷公藤、甜瓜蒂、木通、苦楝子等）偶致中毒。長(zhǎng)期服用帶朱砂的中成藥（朱砂安神丸、活絡(luò)丹、天王補(bǔ)心丹）而致汞中毒不在辯證施治的基礎(chǔ)上盲目用藥都會(huì)有一定的毒副作用體育比賽中興奮劑的濫用上世紀(jì)60s此前濫用的“老式興奮劑”有刺激劑麻醉劑，60s后來合成甾體激素為主，重要目的是增強(qiáng)肌肉合成代謝，80s后來內(nèi)源性激素成為重要的濫用對(duì)象，其中比較經(jīng)典的是促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素（EPO）體育比賽中興奮劑的濫用雄激素和雌激素促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素（EPO)腎上腺皮質(zhì)激素β2受體激動(dòng)劑鴉片類毒品的濫用鴉片類毒品種類：海洛因嗎啡6-單乙酰嗎啡3-單乙酰嗎啡可待因等在體內(nèi)的代謝與排泄：水解氧化結(jié)合態(tài)形式進(jìn)行排泄苯丙胺類中樞興奮劑的濫用1996年11月25日，聯(lián)合國(guó)禁毒署在上海召開的國(guó)際興奮劑專家會(huì)議上一致認(rèn)為苯丙胺類藥物將逐漸取代鴉片海洛因大麻等將成為21C全世界范圍內(nèi)最為廣泛的毒品重要品種有：冰毒3,4-亞甲基二氧甲基苯丙胺和3,4-亞甲基二氧基苯丙胺等苯并二氮雜卓類藥物的濫用鎮(zhèn)靜催眠類藥物，屬于國(guó)家控制的第二類精神藥物常被用于麻醉?yè)尳俸椭氯嘶杷筮M(jìn)行犯罪活動(dòng)本類藥物有：地西泮硝西泮氯硝西泮氟硝西泮去甲地西泮三唑侖等其他類氯胺酮麻醉藥濫用致死濫用藥物及其危害對(duì)吸毒者身心健康的嚴(yán)重危害1吸毒對(duì)優(yōu)生優(yōu)育的影響2濫用麻醉品影響家庭和睦3對(duì)社會(huì)的影響消耗財(cái)富4分析措施在濫用藥物檢測(cè)中的應(yīng)用尿液毛發(fā)血液唾液取樣易局限性之處：易造假稀釋引起假陰性取樣易能將濫用藥物與臨床藥物相區(qū)別血樣可以精確定量取樣困難順應(yīng)性差少用樣品預(yù)處理提取及分析措施萃取法分析方法水解方法酸水解酶水解液液萃取法、固相萃取法、固相微萃取法、超臨界流體萃取法（應(yīng)用多）等薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用、液質(zhì)聯(lián)用、高校毛細(xì)管電泳、放射免疫測(cè)定法、酶免疫測(cè)定法等分析措施GC/MSHPLCLC/MS應(yīng)用最多的措施是GC/MS、HPLC、GC免疫應(yīng)用于鴉片類藥物的分析，難揮發(fā)性的要先水解或衍生化處理不需水解和衍生化，對(duì)藥物可直接分析，用于生物樣品中鴉片類藥物檢測(cè)有極性的、難揮發(fā)性的，熱不穩(wěn)定性的藥物，不需水解和衍生化處理不需要前處理，簡(jiǎn)樸、迅速、以便氣相色譜分析法示例

尿中嗎啡的氮磷檢測(cè)嗎啡不僅是毒品，還是海洛因和可待因在體內(nèi)的重要代謝物，攝入海洛因和可待因后尿中較難檢出原形而只能檢出嗎啡。尿中嗎啡的分析措施多為GC和GC/MS,提取法重要采用液—液萃取法和固相萃取法。嗎啡分子中具有酚羥基，一般需衍生化后分析。措施與成果方法方法（1）色譜條件色譜柱HP熔融石英毛細(xì)管柱柱溫：120℃（保持1min），以20℃/min升溫至280℃（保持10min）進(jìn)樣口：260℃；不分流進(jìn)樣檢測(cè)器溫度：300℃載氣（高純氮）：2.0ml/min；尾吹氣（高純氮）：10ml/min

檢測(cè)器：NPD（2）提取措施酸水解液-液萃取1酶水解液—液萃取2酸水解固相萃取3酶水解固相萃取4取尿樣1ml，加內(nèi)標(biāo)烯丙嗎啡，加濃鹽酸0.1ml，置沸水浴中水解30min，放冷，用1mol/ml氫氧化鈉溶液調(diào)pH值近于9，加pH8.9緩沖溶液0.5ml，加三氯甲烷—異丙醇（9:1，V/V）5ml，渦旋2min，離心（3000r/min）3min，分取水相，調(diào)pH值近9，加pH8.9緩沖溶液0.5min，加三氯甲烷—異丙醇(9:1，V/V）5min，渦旋2min，離心(3000r/min）3min，分取有機(jī)相（2）提取措施酸水解液—液萃取法酶水解液—液萃?。?）提取措施取尿樣1ml，加內(nèi)標(biāo)烯丙嗎啡，加β—葡萄糖醛酸溶液0.1ml和pH4.8緩沖液50μl，置55℃水浴中水解2h，放冷，用1mol/ml氫氧化鈉溶液調(diào)pH值近于9，加入pH8.9緩沖溶液0.5ml，如下操作按“酸水解液—液萃取”項(xiàng)下進(jìn)行酸水解固相萃取（2）提取措施取尿樣1ml，酸水解液液萃取法法，加內(nèi)標(biāo)、水解、調(diào)pH值，加pH8.9緩沖液0.5ml后加水稀釋至5ml。取0.3mlGDX403樹脂，加0.3ml甲醇活化，倒入處理的尿樣中，振搖5min，過濾搜集樹脂于小層析柱中，用pH8.9的水溶液淋洗，用三氯甲烷洗脫，搜集洗脫液5ml。酶水解固相萃取（2）提取措施取尿樣1ml，同酶水解液—液萃取法，加內(nèi)標(biāo)、水解、調(diào)pH值，加pH8.9緩沖液0.5ml后加水稀釋至5ml，同酸水解固相萃取法，萃?。?）衍生化將提取液置具1ml刻度尾管的20ml雞心瓶中，于氮?dú)饬飨?0℃吹干，加乙酸乙酯50μl和BSA2μl，尾管插入60℃

油浴中反應(yīng)30min，氮?dú)饬飨?0℃吹干，加甲苯100μl溶解反應(yīng)物，吸取1μl進(jìn)樣分析（4）原則曲線和檢測(cè)限另取空白尿1ml，不加嗎啡，其他同左處理，以此樣品和添加0.02μg嗎啡樣品的色譜圖按照S/N=3計(jì)算檢測(cè)限為2.8ng/ml取空白尿1ml8份，分別加入嗎啡0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0μg，并各加烯丙嗎啡內(nèi)標(biāo)1.0μg，進(jìn)行水解，提取和衍生化并進(jìn)樣分析，以峰面積(Y)對(duì)嗎啡濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得方程為：Y=0.758X+0.040，r=0.999嗎啡濃度在20~ng/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系萃取率回收率專屬性取空白尿1ml，加入嗎啡1μg，進(jìn)行水解，提取液中加內(nèi)標(biāo)烯丙嗎啡1μg，揮干，衍生化，進(jìn)行分析。計(jì)算嗎啡與內(nèi)標(biāo)色譜峰面積比值。另取嗎啡和內(nèi)標(biāo)各1μg混合，衍生化處理并進(jìn)行分析，計(jì)算萃取率為61%取空白尿1ml，加入嗎啡0.5μg和烯丙嗎啡1μg，進(jìn)行水解、萃取、衍生化、進(jìn)樣分析，計(jì)算平均回收率為98.1%，RSD為7%從空白尿及原則添加尿經(jīng)萃取分析后所得色譜圖，可見雜質(zhì)色譜峰對(duì)嗎啡和內(nèi)標(biāo)色譜峰不干擾。構(gòu)造相似的可待因、狄奧寧均不干擾測(cè)定(8)實(shí)際吸毒者尿液分析一名疑為海洛因致死者的血、尿進(jìn)行嗎啡檢查。取尿樣分離后按第四法檢查，檢出嗎啡濃度為3420ng/ml尿中嗎啡以游離和葡萄糖醛酸綴合物兩種形成存在。經(jīng)水解后所得的嗎啡用溶劑提取，用四種提取措施提取分析均得滿意的線性關(guān)系。檢測(cè)限、精確度和精密度，均適合于實(shí)際案件中尿樣的檢查。措施與成果高效毛細(xì)管電泳法示例毒品濫用人員尿液中嗎啡的含量檢測(cè)對(duì)象：隨機(jī)選擇蘭州市戒毒所7名初期戒毒病人，平均年齡24.5歲。電泳條件：緩沖液：100mmol/L磷酸鹽緩沖液（PH3.2）,含15mmol/Lβ-環(huán)糊精。電壓：20kv。溫度：25℃。檢測(cè)：紫外，205nm壓力進(jìn)樣：0.5psi，5s。每次運(yùn)行前毛細(xì)管用0.1mol/LNaOH溶液沖洗5min,水洗5min,運(yùn)行緩沖液沖洗5min。從電泳分離圖可見吸毒人員中嗎啡出峰時(shí)間為7.2min,與嗎啡對(duì)照品出峰時(shí)間一致。措施與成果高效毛細(xì)管電泳法示例毒品濫用人員尿液中嗎啡的含量樣品儲(chǔ)備液的制備：取尿液樣本10ml于25ml試管中，加入1ml濃鹽酸，于沸水浴中水解30min。冷卻后以40%NaOH溶液調(diào)整PH值至9左右，加入5ml碳酸鹽緩沖液（PH9），混合均勻。用乙酸乙酯25ml分三次萃取，合并萃取液，于45℃水浴以氮?dú)獯蹈伞埩粑镉?ml水溶解。經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過后，作為樣品溶液措施與成果高效毛細(xì)管電泳法示例毒品濫用人員尿液中嗎啡的含量原則曲線：精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液（200μg/ml）0.5、1.0、2.0、4.0、6.08.0、10.0ml分別置10ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，每一原則液進(jìn)樣2次。測(cè)定峰面積，取平均值。以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)Y,對(duì)應(yīng)對(duì)照品的濃度（μg/ml）X,計(jì)算得回歸方程為：Y=43.0712X89+89.8364,r=0.9982。成果表明嗎啡在10～200μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。最低檢測(cè)限按（S/N=3）計(jì)算為0.05μg/ml1精密度：吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋重復(fù)進(jìn)樣5次測(cè)定峰面積得RSD為2.08%2

重復(fù)性：取同一個(gè)尿樣5份處理后測(cè)得RSD2.61%，表明本法重現(xiàn)性良好。3回收率：分別用正常人尿配制需要的嗎啡樣品提取檢測(cè)計(jì)算結(jié)果回收率在97.1%～104.6%（n=6）

實(shí)際應(yīng)用31.0