百合鱗片組織培養(yǎng)生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程（征求意見稿）

ICS65.020.20CCSB0521Technicalregulationfortheproductionoflilyscaletissueculture2025.012025-XX-XX發(fā)布IDB21/TXXXX—2025本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心。本文件主要起草人：楊迎東，胡新穎，宋國柱，賈慧群，周俐宏，李雪艷，白一光，王麗靜，李偉，王偉東，張睿琪，李世娟，程海龍，張玉明，董巖。本文件發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，我們將及時答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實際情況依法進行評估及復(fù)審。歸口管理部門聯(lián)系方式：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號聯(lián)系電話文件起草單位聯(lián)系方式：遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院（沈陽市東陵路84號），聯(lián)系電話1DB21/TXXXX—2025百合鱗片組織培養(yǎng)生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了以百合鱗片為外植體進行組織培養(yǎng)過程中的外植體選擇、消毒、接種方式，基本培養(yǎng)基選擇，初代誘導(dǎo)培養(yǎng)、結(jié)球培養(yǎng)、增殖擴繁、生根培養(yǎng)中添加植物生長調(diào)節(jié)劑種類與濃度，培養(yǎng)條件，出庫變溫處理及煉苗移栽等技術(shù)內(nèi)容。本文件適用于以百合鱗片為外植體進行離體培養(yǎng)與擴繁的組培小鱗莖工廠化生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1植物組織培養(yǎng)planttissueculure在無菌條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，人為控制培養(yǎng)條件，使其生長、分化、增殖，發(fā)育成完整植株或生產(chǎn)次生代謝物質(zhì)的過程和技術(shù)。3.2外植體explant用于離體培養(yǎng)的細(xì)胞、組織或器官（莖、葉、花器官等）統(tǒng)稱為外植體。3.3培養(yǎng)基culturemedium提供植物生長發(fā)育所需各種養(yǎng)分的介質(zhì)，主要包括水、無機鹽、有機物、凝固劑以及植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)等組成。3.4初代誘導(dǎo)培養(yǎng)primaryculture外植體初次接種到培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)分化出不定芽、愈傷組織、不定根、小鱗莖等的培養(yǎng)過程。3.5結(jié)球培養(yǎng)bulbletexpandculture2DB21/TXXXX—2025初代培養(yǎng)獲得的小鱗莖轉(zhuǎn)接到添加特定物質(zhì)的培養(yǎng)基中，促進小鱗莖膨大生長，形成大規(guī)格鱗莖的過程。3.6增殖擴繁multiplicationandpropagation將試管小鱗莖轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，促進試管苗數(shù)量擴增，加速繁殖的過程。3.7生根培養(yǎng)rootingculture培養(yǎng)材料達(dá)到一定數(shù)量，大小符合移栽規(guī)格要求時，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)生根苗的過程。3.8變溫處理poikilothermictreatment生根的試管小鱗莖移栽前，需經(jīng)過常溫-低溫-常溫的變溫處理過程，使其打破休眠和更好的適應(yīng)外界環(huán)境變化。3.9煉苗移栽acclimatizationandtransplant在條件可控的保護設(shè)施中，采取逐步通風(fēng)、控溫、遮光、保濕等措施，使幼苗逐步適應(yīng)外界環(huán)境，將小鱗莖從瓶中取出，經(jīng)過清洗、消毒、瀝干水份等操作栽植于培養(yǎng)基質(zhì)中的過程。4外植體的選擇與消毒4.1外植體的選擇國外進口經(jīng)病毒檢測無毒的百合種球，種球周徑大于12cm，選取健康、無機械損傷和病蟲害鱗莖的中、外層鱗片為外植體。4.2外植體消毒洗凈鱗片表面泥土等污物，洗衣粉水浸泡20min~30min，流水沖洗至少30min，將鱗片放入無菌培養(yǎng)瓶中蓋嚴(yán)蓋子，放置到超凈工作臺上。取無菌燒杯，用酒精燈灼燒杯口和瓶身消毒，將鱗片倒入燒杯中，加入75%酒精，沒過鱗片，勻速晃動消毒30s~45s（時間根據(jù)鱗片大小確定）。倒掉酒精，加入2%次氯酸鈉，沒過鱗片，勻速晃動消毒15min~20min（時間根據(jù)鱗片大小確定倒掉次氯酸鈉溶液，加入無菌水，沒過鱗片，勻速晃動清洗3min，倒掉廢液，反復(fù)清洗3次~6次。5基本培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件5.1基本培養(yǎng)基3DB21/TXXXX—2025以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，pH值5.8，121℃高壓滅菌20min。5.2培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度（25±1）℃,24h全黑暗閉光培養(yǎng)。6外植體接種接種前將鑷子、接種刀在酒精燈上灼燒消毒，晾涼備用。將鱗片置于接種盤上，周邊組織切去0.2cm，切成1.0cm×1.0cm的小塊。打開培養(yǎng)瓶前先用酒精燈燒烤瓶蓋3s~5s，打開瓶蓋，灼燒瓶口3s~5s，然后將鱗片切塊用消毒過的鑷子夾取放入培養(yǎng)基中，凹面向上放置，切塊與培養(yǎng)基充分接觸。7初代誘導(dǎo)培養(yǎng)以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加不同種類和濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑，直接誘導(dǎo)小鱗莖。根據(jù)百合不同品種，培養(yǎng)基內(nèi)添加的NAA、BA、2,4-D、KT等植物生長調(diào)節(jié)劑種類和濃度有所不同。8結(jié)球培養(yǎng)誘導(dǎo)形成的小鱗莖長至直徑約0.3cm~0.5cm時，轉(zhuǎn)接到結(jié)球培養(yǎng)基中培養(yǎng)，200ml的果醬瓶每瓶放6個小鱗莖為宜。結(jié)球培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加90g·L-1蔗糖，其他培養(yǎng)條件不變。以60d~90d為一個培養(yǎng)周期，繼代培養(yǎng)2次~3次，小鱗莖直徑達(dá)到1cm進入增殖擴繁培養(yǎng)。9增殖擴繁將結(jié)球培養(yǎng)得到的大鱗莖中外層鱗片剝下3-4片，凹面向上，接種到初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶3-5片，待誘導(dǎo)形成小鱗莖后同樣重復(fù)結(jié)球培養(yǎng)、增殖擴繁操作，實現(xiàn)組培小鱗莖工廠化周年繁育。10生根培養(yǎng)小鱗莖周徑達(dá)到1cm，數(shù)量滿足生產(chǎn)需求時開始生根培養(yǎng)階段。生根培養(yǎng)基以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，根據(jù)百合不同品種，添加IBA、NAA等植物生長調(diào)節(jié)劑的種類和濃度有所不同。將小鱗莖老根切去，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，其他培養(yǎng)條件不變，轉(zhuǎn)接20d后新根長到1.5cm~2.0cm即可出庫進行變溫處理。11變溫處理4DB21/TXXXX—2025將生根的小鱗莖瓶苗由培養(yǎng)室轉(zhuǎn)移到15℃條件下1w，再轉(zhuǎn)移到2℃~5℃低溫條件下2個~3個月打破休眠，定植前7d將瓶蓋打開，在15℃條件下煉苗。12煉苗移栽15℃條件下煉苗7天后，將小鱗莖從瓶中取出，洗凈根部附著的瓊脂，在50%咪鮮銨錳鹽1000倍液+1%申嗪霉素1000倍液中浸泡30min，栽植于草炭+蛭石+珍珠巖（體積比為6:2:1）的混合基質(zhì)中，定植容器內(nèi)先裝入基質(zhì)15cm，然后將小鱗莖均勻擺放在基質(zhì)上，上面覆蓋基質(zhì)5cm~8cm，用木板將表面壓平，種植箱置于連棟溫室或日光溫室內(nèi)的育苗床上，澆透水。13數(shù)據(jù)記錄從外植體接種到小鱗莖移栽再到田間定植，每一步操作都需詳細(xì)記錄相關(guān)信息，形成《百合組培小鱗莖培養(yǎng)記錄表》（表A.1）和百合組培小鱗莖出庫煉苗移栽記錄表（表A.2），建立組培小鱗莖溯源管理體系，負(fù)責(zé)人定期收回