全國藥品微生物檢驗重點實驗室建設(shè)介紹

藥品微生物檢驗重點實驗室

建設(shè)與展望謝元超2021.9山東省藥品檢驗所2/13/20251背景——近3年中檢所無菌應(yīng)急檢驗時間事件結(jié)果2006年5月“齊二藥”亮菌甲素及其全線產(chǎn)品調(diào)查170批產(chǎn)品無菌檢查合格，證明與微生物污染無關(guān)2006年7月“欣弗事件”微生物污染2007年1月“克林霉素磷酸酯”及“阿奇霉素”擴大調(diào)查克林107批7批無菌不合格；阿奇90批3批無菌不格。取締兩個品種的熱力滅菌大體積液體制劑生產(chǎn)。2007年4月注射用甲氨喋呤及時排除微生物污染2008年10月“刺五加事件”及全線產(chǎn)品調(diào)查微生物污染2008年11月“茵梔黃事件”與微生物污染無關(guān)2009年“雙黃連注射液”有無微生物污染？山東省藥品檢驗所2/13/20252藥品微生物檢驗重點實驗室建設(shè)2021年4月23日中檢所會同北京、天津、上海、黑龍江、江蘇、浙江、廣州、四川、總后等九家藥檢所的主管業(yè)務(wù)所長及微生物檢驗部門負責(zé)人在浙江省杭州市首次對藥品檢驗所微生物檢驗重點實驗室的建設(shè)問題開展研討。增強系統(tǒng)能力應(yīng)對應(yīng)急檢驗山東省藥品檢驗所2/13/20253藥品微生物檢驗重點實驗室建設(shè)2021年4月28日，中檢藥函［2021］809號?全國藥檢所微生物檢驗重點實驗室建設(shè)研討會會議紀要?；2021年5月10日，中檢藥函［2021］1302號?全國藥檢所微生物重點實驗室建設(shè)參考原那么〔草案〕?；2021年10月30日，中檢藥函［2021］2028號?微生物重點實驗室工作安排?；2021年11月20日，中檢藥函［2021］2132號?關(guān)于參加藥品微生物實驗室能力驗證的通知?；2021年12月25日，中檢函［2021］2355號?關(guān)于開展協(xié)同檢驗?zāi)M演練的通知?；2021年2月2日，中檢藥函［2021］183號?關(guān)于藥品微生物陽性檢出菌分析能力驗證匯總報告的函?；2021年3月26日，中檢藥函［2021］562號?關(guān)于參加藥品微生物實驗室能力驗證總結(jié)會議的通知?。山東省藥品檢驗所2/13/20254藥品微生物檢驗新理念環(huán)境保證培養(yǎng)基保證無菌性檢查適用性檢查有效的方法方法驗證SOP操作有效的結(jié)果可靠的結(jié)論結(jié)果判斷山東省藥品檢驗所2/13/20255無菌應(yīng)急檢驗的關(guān)鍵問題如何快速完成檢驗？如何準確下結(jié)論？應(yīng)急檢驗體系建設(shè)陽性檢出菌的綜合分析判斷能力建設(shè)山東省藥品檢驗所2/13/20256A、重點實驗室建設(shè)參考原那么〔草案〕一、重點實驗建設(shè)的分階段目標1、2021年內(nèi)完成第一階段目標，保證檢驗結(jié)果的準確性。2、2021年內(nèi)完成第二階段目標，開展分子生物學(xué)工作，具備微生物追蹤溯源能力。山東省藥品檢驗所2/13/20257A、重點實驗室建設(shè)參考原那么〔草案〕二、完成第一階段任務(wù)實驗室條件標準1、人員標準〔1〕、應(yīng)急檢驗組織保障〔2〕、人員要求：一般實驗操作人員，中級實驗人員，高級實驗人員〔3〕、人員培訓(xùn)山東省藥品檢驗所2/13/20258A、重點實驗室建設(shè)參考原那么〔草案〕二、完成第一階段任務(wù)實驗室條件標準2、硬件標準〔1〕、實驗室標準：核心實驗區(qū)，緩沖輔助區(qū)，PII級生物平安區(qū)，一般實驗及準備區(qū)〔2〕、設(shè)備配置要求：檢驗操作設(shè)備，監(jiān)控設(shè)備，培養(yǎng)設(shè)備，鑒定分析設(shè)備，低溫保存設(shè)備〔3〕、消耗性實驗器材保障：常用器皿，消毒劑及隔離器材，一次性實驗器材，培養(yǎng)基山東省藥品檢驗所2/13/20259A、重點實驗室建設(shè)參考原那么〔草案〕二、完成第一階段任務(wù)實驗室條件標準3、軟件標準〔1〕、應(yīng)急檢驗方案〔2〕、實驗室平安保障措施〔3〕、實驗室管理SOP〔4〕、設(shè)備操作SOP〔5〕、檢驗程序SOP山東省藥品檢驗所2/13/202510微生物實驗室質(zhì)量管理手冊編寫說明及批準頁1實驗室概況1.1實驗室簡介1.2實驗室通訊資料1.3實驗室認可工程/參數(shù)表1.4實驗室平面圖及功能區(qū)域1.5儀器設(shè)備總覽1.6常備試劑耗材一覽表1.7實驗室開展目標山東省藥品檢驗所2/13/202511微生物實驗室質(zhì)量管理手冊2管理標準2.1平安管理2.2業(yè)務(wù)流程2.3人員管理2.4樣品管理3標準操作規(guī)程3.1檢驗工作SOP3.2儀器操作SOP3.3實驗記錄SOP4實驗室保障4.1實驗室設(shè)施、設(shè)備及消耗品供給商確定原那么4.2實驗室設(shè)施效勞商4.3實驗設(shè)備供給商4.4實驗室消耗品供給商2/13/202512A、重點實驗室建設(shè)參考原那么〔草案〕三、完成第二階段任務(wù)實驗室條件標準完成第二階段任務(wù)實驗室條件主要是在第一階段實驗條件的根底上增強對疑難微生物的鑒定能力，重點是建立分子生物學(xué)實驗室。1、人員2、硬件3、軟件

山東省藥品檢驗所2/13/202513B、無菌檢查應(yīng)急演練應(yīng)急檢驗體系建設(shè)2021年12月25日，中檢函［2021］2355號?關(guān)于開展協(xié)同檢驗?zāi)M演練的通知?中檢所于2007年8月建立了微生物應(yīng)急檢驗方案〔NICPBP-JY-SOP-ACWSW-001藥品微生物檢查應(yīng)急檢驗規(guī)程〕山東省藥品檢驗所2/13/202514藥品微生物檢查應(yīng)急檢驗規(guī)程要點1、組織保障設(shè)立專門的藥品微生物檢查應(yīng)急處理小組，負責(zé)組織實施藥品微生物檢查應(yīng)急事件。2、應(yīng)急準備保證微生物檢查中所需的各種實驗條件時時處于有效、合格的狀態(tài)，做到樣品隨到隨檢，是加快應(yīng)急事件反響速度的關(guān)鍵。無菌室及設(shè)施運行正常；建立實驗室日常監(jiān)測菌株庫；無菌室小型設(shè)備、實驗器材、培養(yǎng)基、沖洗液等齊備，24小時隨時處于可應(yīng)用狀態(tài)；兩個雙人實驗小組，在不同實驗區(qū)域平行同步實驗。山東省藥品檢驗所2/13/202515應(yīng)急檢驗專用滅菌氣密包裝應(yīng)急檢驗用一次性薄膜過濾培養(yǎng)器原位輻射劑量化學(xué)指示劑內(nèi)含式生物指示劑山東省藥品檢驗所2/13/202516對照培養(yǎng)基理化分析〔參考化學(xué)對照品建立的某些原那么〕生物學(xué)評價〔MPN、回收率、生長曲線、生態(tài)學(xué)〕硫乙醇酸鹽流體對照培養(yǎng)基改進馬丁對照培養(yǎng)基山東省藥品檢驗所2/13/202517藥品微生物檢查應(yīng)急檢驗規(guī)程要點3、樣品確認按程序確認樣品的來源、信息和完整性，收集背景資料。4、方法確定合理的檢驗方法是結(jié)果判斷的保證。在處理緊急任務(wù)時，可以通過下面3個方式快速確定檢驗方法，加快檢驗進程：〔1〕、聯(lián)系其他先期介入該緊急事件的單位和人員，或者從本實驗室的檔案中尋找成熟的檢驗方法，以陽性對照的方式驗證，快速開展檢驗工作；〔2〕、采用預(yù)實驗快速確立檢驗方法：以金黃色葡萄球菌和白色念珠菌進行測試，假設(shè)24小時后金黃色葡萄球菌管長菌、48小時候后白色念珠菌管長菌，說明方法可行。〔3〕、采用薄膜過濾法去除抑菌活性，無菌檢查按500ml/膜沖洗，在開展檢驗的同時進行陽性對照實驗。具體實施根據(jù)方式〔1〕、〔2〕、〔3〕的順序啟動。山東省藥品檢驗所2/13/202518藥品微生物檢查應(yīng)急檢驗規(guī)程要點5、實驗要點〔1〕、確定無菌檢查實驗方法；〔2〕、清潔無菌室，并對無菌室中的浮游菌、外表菌進行監(jiān)測；〔3〕、按無菌操作規(guī)程著裝、進場、消毒，監(jiān)控手部所帶入的微生物；〔4〕、樣品外外表消毒，監(jiān)控樣品取樣口可能污染的微生物；〔5〕、實驗用到的器材、培養(yǎng)基、沖洗液等分別進行陰性對照實驗；〔6〕、如果樣品量允許，設(shè)置對應(yīng)的陽性對照組；〔7〕、結(jié)果觀察：自培養(yǎng)開始，應(yīng)逐日觀察諸培養(yǎng)管的渾濁情況，如發(fā)現(xiàn)任何一管的培養(yǎng)物變渾濁，1〕立即轉(zhuǎn)接2ml該培養(yǎng)物至相同的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)；2〕取5支凍存管，每管分裝1ml渾濁培養(yǎng)物，-80℃保存；3〕取渾濁培養(yǎng)物在TSA平板上劃線，別離污染微生物；4〕如果發(fā)現(xiàn)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)管變渾濁，還應(yīng)增加血平板劃線，并在厭氧條件下培養(yǎng)別離厭氧菌。由平板別離到的菌落應(yīng)進一步鑒定分析，并逐一保藏。山東省藥品檢驗所2/13/202519藥品微生物檢查應(yīng)急檢驗規(guī)程要點6、結(jié)果判斷與報告〔1〕、如果陽性對照管48小時仍無細菌生長，提示樣品具有較強調(diào)抑菌作用，應(yīng)立即重新實驗，并改進去除樣品抑菌活性的方法；〔2〕、如果所有陰性對照均無菌生長，陽性對照生長正常，供試品管培養(yǎng)14天后不發(fā)生渾濁，可判無菌檢查合格；〔3〕、如果個別陰性對照管有菌生長，陽性對照管生長正常，供試品管培養(yǎng)14天后不發(fā)生渾濁，可判無菌檢查合格，但應(yīng)對陰性對照管中的細菌進行別離鑒定，查找污染原因；〔4〕、任何情況下供試品管長菌，并經(jīng)別離、鑒定，確定該菌株與實驗室及實驗過程監(jiān)控各環(huán)節(jié)檢測到的細菌沒有相似性，可判無菌檢查不符合規(guī)定；〔5〕、如果出現(xiàn)供試品管長菌，但從該培養(yǎng)物中別離出的菌株經(jīng)鑒定與實驗室或?qū)嶒炦^程監(jiān)控各環(huán)節(jié)檢測到的細菌有一定的相似性，或回憶實驗過程發(fā)現(xiàn)實驗存在明顯疏漏，樣品在實驗中存在的污染可能，那么判此次無菌檢查實驗無效，應(yīng)按藥典規(guī)定盡快重新實驗?！?〕、無菌檢查重試實驗結(jié)果判斷同上述〔1〕～〔5〕。山東省藥品檢驗所2/13/202520無菌應(yīng)急檢驗的關(guān)鍵問題如何快速完成檢驗？如何準確下結(jié)論？應(yīng)急檢驗體系建設(shè)陽性檢出菌的綜合分析判斷能力建設(shè)山東省藥品檢驗所2/13/202521C、藥品微生物實驗室能力驗證以國內(nèi)某微生物檢驗實驗室近期的一次實驗室污染實例，該實驗室在對不同產(chǎn)地的兩個品種進行無菌檢查時，短期內(nèi)屢次出現(xiàn)無菌陽性結(jié)果，對這些陽性培養(yǎng)結(jié)果進行別離，得到18株藥品檢出陽性菌。山東省藥品檢驗所2/13/202522C、藥品微生物實驗室能力驗證2021年4月2日，在上海召開了藥品微生物實驗室能力驗證總結(jié)會議。山東省藥品檢驗所2/13/202523藥品微生物檢驗重點實驗室建設(shè)對于藥品微生物檢驗重點實驗的建設(shè)工作，一年來重點促進了三項工作的開展：1、實驗室裝備水平大力提高；2、應(yīng)急檢驗?zāi)芰瓣栃詸z出結(jié)果的分析意識和能力加強；3、重點微生物實驗室建設(shè)理念逐漸深入人心山東省藥品檢驗所2/13/2025241、實驗室裝備水平大力提高在重點實驗室建設(shè)之初，各所微生物檢驗設(shè)備整體較差缺乏大型的、較為先進的設(shè)備，2021年4月調(diào)查各所的主要設(shè)備說明，僅有上海、廣州、天津所的條件稍好一些。山東省藥品檢驗所2/13/2025252021年4月調(diào)查各所的主要設(shè)備生物安全柜超凈工作臺百級層流無菌隔離器培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)系統(tǒng)CO2培養(yǎng)箱其他黑龍江1///61/自動臺式滅菌器北京37/115/1酶標儀上海108//16121、無菌操作手套箱2、梅里埃鑒定系統(tǒng)3、酶標儀（無菌室）江蘇19浙江113/141//四川4/7/1總后/6//7//廣州11/1、API鑒定系統(tǒng)2、2臺微粒監(jiān)測儀天津14///厭氧袋/1、API鑒定系統(tǒng)2、塵埃粒子計數(shù)儀山東省藥品檢驗所2/13/2025261、實驗室裝備水平大力提高山東省藥品檢驗所2/13/202527單位形態(tài)分析生化鑒定相似性分析分子生物學(xué)技術(shù)上海所顯微數(shù)碼成像API實驗條、梅里埃VITEK2BrukerTensor2716sRNA、杜邦Riboprinter天津所顯微數(shù)碼成像API實驗條、梅里埃VITEK2BrukerTensor27杜邦Riboprinter（外包）浙江所顯微數(shù)碼成像梅里埃VITEK2BrukerTensor27分子生物學(xué)（外包）江蘇所顯微數(shù)碼成像梅里埃VITEK2杜邦Riboprinter，MicroseqID廣州所顯微數(shù)碼成像API實驗條、梅里埃VITEK2杜邦Riboprinter（外包）黑龍江顯微數(shù)碼成像梅里埃VITEK2（外包）BrukerTensor27北京所顯微數(shù)碼成像API實驗條BrukerTensor27總后所顯微數(shù)碼成像API實驗條BrukerTensor27四川所顯微數(shù)碼成像API實驗條梅里埃VITEK2（外包）山東所顯微數(shù)碼成像API實驗條山東省藥品檢驗所2/13/2025282、應(yīng)急檢驗?zāi)芰瓣栃詸z出結(jié)果分析意識和能力加強根本具備應(yīng)急檢驗?zāi)芰?。很多單位逐漸形成了對陽性結(jié)果別離菌株進行形態(tài)觀察、生化鑒定、遺傳信息分析〔16sRNA測序、DNA脈沖場電泳分析等〕、FTIR相似性分析等多層次的比較分析程序，結(jié)合實驗監(jiān)控菌庫和過程監(jiān)控菌株進行實驗室排查分析，必要時結(jié)合臨床數(shù)據(jù)、現(xiàn)場調(diào)查數(shù)據(jù)和樣品與別離菌的關(guān)聯(lián)實驗等綜合分析，最終對檢驗結(jié)果下一個可靠的結(jié)論。山東省藥品檢驗所2/13/2025293、重點實驗室建設(shè)理念深入人心

〔1〕、通過藥品微生物檢驗重點實