DB2301T 212-2024 越桔組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20CCSB61

2301黑龍江省哈爾濱市地方標準DB2301/T212—2024越桔組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程2024-12-30發(fā)布 2025-02-05實施哈爾濱市市場監(jiān)督管理局??發(fā)布DB2301/T212DB2301/T212—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語和定義 1外植體的采集與消毒 1外植體采集 1外植體的消毒 1培養(yǎng)基制備 1培養(yǎng)基配比 1培養(yǎng)基滅菌 2培養(yǎng)基保存 2培養(yǎng)程序 2初代培養(yǎng) 2繼代培養(yǎng) 2生根培養(yǎng) 2煉苗與移栽 3煉苗 3移栽 3出圃 3生產(chǎn)檔案 3前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由哈爾濱市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。本文件主要起草人：趙文博、段亞東、孫嬡麗、李靖彤、張鹍、宋鵬慧、周春薇、周雙、毛俊瑩、劉爭、侯帥、溫智鈞、梁海婷、許志偉、肖珩、呂德寶、郝淑榮、張?zhí)鹛?。DB2301/T212DB2301/T212—2024PAGEPAGE1越桔組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了越桔組織培養(yǎng)育苗技術(shù)的外植體的采集與消毒、培養(yǎng)基制備、培養(yǎng)程序、煉苗與移栽、出圃和生產(chǎn)檔案等。本文件適用于越桔的組織培養(yǎng)育苗。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合理使用準則LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。外植體的采集與消毒外植體采集4月～71mm～2mm葉柄作為外植體。外植體的消毒110min～20min。757530s，無菌330s。1010min330s。用無菌濾紙吸干外植體表面的水分備用。GB/T8321NY/T1276培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基配比基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基為WPM，基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制方法按LY/T1882中4.2.1規(guī)定執(zhí)行。初代培養(yǎng)基初代培養(yǎng)基按WPM1LZT2.0mg～4.0mg30g7g進行配置，pH5.2～5.4。繼代培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)基按WPM1LIBA0.1mg～0.2mgZT2.0mg～4.0mg30g7g進行配置，pH5.2～5.4。生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基按WPM1LIBA3.0mg～4.0mgNAA0.4mg60g14g進行配置，pH培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)基在壓力0.105MPa、溫度12120min。滅菌物應(yīng)不超過滅菌鍋容積的3/4。培養(yǎng)基保存滅菌后的培養(yǎng)基放入接種室，應(yīng)避免陽光直射，在18～227d。培養(yǎng)程序初代培養(yǎng)在超凈工作臺上將已消毒的外植體莖段垂直插入初代培養(yǎng)基，每個培養(yǎng)瓶接種3～5s～2s，迅速蓋好瓶蓋，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件白天252157d后，轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)。相對空氣濕度70～80Lux～3000Lux，光照時間為12h/d～16h/d。待嫩芽長出后，進行繼代培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)將初代培養(yǎng)后長出的嫩莖剪成1cm左右的莖段，插入新鮮的增殖培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)。培養(yǎng)條件白天2521570～802000Lux～3000Lux，光照時間為12h/d～16h/d。生根培養(yǎng)選取由繼代培養(yǎng)獲得的生長健壯、高度大于2cm的無菌不定芽接入生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)條件繼續(xù)按6.2.2的要求培養(yǎng)。待生根后2周～3周，選取根長1.5cm～2.5cm、須根不少于3條的瓶苗，將其放置溫室進行煉苗。煉苗與移栽煉苗20～303d2d，煉苗期間避免強光直射和高溫灼傷瓶苗。移栽基質(zhì)配置1:1GB/T8321和NY/T1276的規(guī)定。移栽方法將組培苗從瓶中取出，用流水沖洗掉粘