2024-2025學(xué)年高中生物第一部分微生物的利用實(shí)驗(yàn)2分離以尿素為氮源的微生物學(xué)案浙科版選修1

PAGEPAGE1試驗(yàn)2分別以尿素為氮源的微生物[學(xué)考報(bào)告]學(xué)問(wèn)內(nèi)容考試屬性考情解讀分別以尿素為氮源的微生物加試1.進(jìn)行微生物分別。運(yùn)用含有尿素的培育基，采納涂布分別法，分別有脲酶的細(xì)菌。2.運(yùn)用酚紅指示劑檢測(cè)以尿素為氮源的細(xì)菌的存在。3.說(shuō)明分別以尿素為氮源的細(xì)菌的試驗(yàn)原理。4.舉例說(shuō)明本試驗(yàn)分別出來(lái)的細(xì)菌不肯定都是以尿素為氮源的細(xì)菌一、以尿素為氮源的微生物eq\a\vs4\al(1.)尿素又稱脲，是蛋白質(zhì)降解的產(chǎn)物。在人和其他哺乳動(dòng)物如家畜的尿中都含有尿素，植物不能干脆汲取尿素，因此大量尿素的存在將對(duì)環(huán)境造成污染。eq\a\vs4\al(2.)以尿素為氮源的微生物這些細(xì)菌可以尿素為氮源，是因?yàn)槠浜须迕?，通過(guò)降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。其利用尿素的反應(yīng)式為：(NH2)2C＝O＋H2Oeq\o(→,\s\up7(脲酶))2NH3＋CO2。eq\a\vs4\al(3.)分別以尿素為氮源的微生物所依據(jù)的原理在氮源只有尿素時(shí)，這些微生物能利用尿素獲得氮源而存活；而其他微生物卻不能利用尿素，最終因?yàn)槿狈Φ炊劳?。二、從土壤中分別出以尿素為氮源的微生物試驗(yàn)eq\a\vs4\al(1.)試驗(yàn)?zāi)康?1)運(yùn)用以尿素為唯一氮源的培育基分別含有脲酶的細(xì)菌。(2)通過(guò)指示劑顏色的改變檢知酶(脲酶)所催化的化學(xué)反應(yīng)(培育基pH的改變)。(3)統(tǒng)計(jì)被檢測(cè)的土壤中含有的以尿素為氮源的微生物的數(shù)量。eq\a\vs4\al(2.)試驗(yàn)原理(1)用選擇培育基(培育基類型)可分別出以尿素為氮源的微生物。(2)在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶將培育基中的尿素分解成氨，使培育基變堿，pH上升，酚紅指示劑變紅。(3)依據(jù)培育基中的菌落數(shù)，可統(tǒng)計(jì)土壤樣品中含有的這種微生物的數(shù)量。eq\a\vs4\al(3.)試驗(yàn)步驟(1)倒平板：在60℃左右時(shí)，將兩只三角瓶中已滅菌的LB固體培育基和尿素固體培育基，在酒精燈旁分別倒入兩個(gè)培育皿中，在水平的超凈臺(tái)上搖勻，平放至凝固。(2)制備細(xì)菌懸浮液將土樣1g，在無(wú)菌條件下加到有99mL無(wú)菌水的三角瓶中，振蕩10min，制成10－2稀釋液；從該稀釋液中取0.5mL懸液加到4.5mL無(wú)菌水的三角瓶中，經(jīng)振蕩就制成10－3稀釋液；再?gòu)?0－3稀釋液中取0.5mL懸液加到4.5mL無(wú)菌水的三角瓶中，經(jīng)振蕩就制成10－4稀釋液；依此法可依次制備出10－5、10－6……土壤稀釋液。(3)用稀釋涂布分別法分別細(xì)菌取10－4和10－5的土壤稀釋液各0.1mL，分別加到有LB培育基和尿素培育基的培育皿中，再將保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精燈火焰上灼燒，待刮刀上火焰熄滅后，在酒精燈火焰旁打開(kāi)培育皿，將菌液涂布到整個(gè)平面上。(4)培育：將培育皿倒置，在37℃恒溫箱中培育24～48h。(5)視察、計(jì)數(shù)菌落：比較LB培育基與尿素培育基上的菌落數(shù)。培育基細(xì)菌懸浮液稀釋度10－410－5比照組LB全養(yǎng)分固體培育基試驗(yàn)組尿素固體培育基1．為什么要用瓊脂糖代替瓊脂配制固體培育基？提示：瓊脂是未被純化的混合物，內(nèi)含肯定的含氮化合物，用瓊脂糖替代瓊脂后，微生物只能以尿素為唯一氮源，利于對(duì)細(xì)菌的篩選。2．有脲酶的細(xì)菌在生態(tài)穩(wěn)態(tài)上起什么作用？提示：假如土壤中有很多尿素，在自然界較高溫度下會(huì)被水解，水解后的氨使土壤變成堿性，與其他陰離子形成化合物則會(huì)使土壤板結(jié)。有脲酶的細(xì)菌使植物廢棄物和動(dòng)物尸體降解，并利用所形成的氨，有利于自然界的氮循環(huán)。3．有脲酶的細(xì)菌菌落四周為什么有著色的環(huán)帶出現(xiàn)？提示：此細(xì)菌能分解尿素產(chǎn)生氨，氨為堿性，酚紅指示劑在堿性下為紅色，標(biāo)記著存在脲酶水解尿素的作用，紅色區(qū)域大小代表脲酶活性強(qiáng)弱和含量的多少。4．與全養(yǎng)分培育基上的菌落數(shù)比較，為什么尿素培育基上只有少數(shù)菌落？提示：說(shuō)明能利用尿素的細(xì)菌只占少數(shù)。常用的微生物分別純化方法eq\a\vs4\al(1.)稀釋涂布平板法(1)液體稀釋法：將待分別的樣品經(jīng)過(guò)大量稀釋后，取稀釋液勻稱地涂布在培育皿中的培育基表面，培育后就可能得到單個(gè)菌落。該法是將已熔化并冷卻至約60℃(削減冷凝水)的瓊脂培育基，先倒入無(wú)菌培育皿中，制成無(wú)菌平板。待充分冷卻凝固后，將肯定量(約0.1mL)的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平板表面，再用玻璃三角刮刀涂布，使菌液勻稱分散在整個(gè)平板表面，倒置恒溫箱中培育。(2)涂布平板法：可省去含菌樣品懸液的稀釋，干脆吸取經(jīng)振蕩分散的樣品懸浮液1滴加入1號(hào)瓊脂平板上，用一支玻璃刮刀勻稱涂布，用此涂棒再連續(xù)涂布2號(hào)、3號(hào)、4號(hào)平板(連續(xù)涂布起漸漸稀釋作用，涂布平板數(shù)視樣品濃度而定)，翻轉(zhuǎn)此刮刀再涂布5號(hào)、6號(hào)平板，經(jīng)適溫倒置培育后挑取單個(gè)菌落。eq\a\vs4\al(2.)平板劃線分別法將已經(jīng)熔化的培育基倒入培育皿中制成平板，用接種環(huán)蘸取少量待分別的菌液，在培育基表面平行或分區(qū)劃線如下圖，然后將培育皿放入恒溫箱里培育。在線的起先部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延長(zhǎng)，菌數(shù)漸漸削減，最終可能形成純種的單個(gè)菌落。幾種劃線方法如圖：(1)倒平板時(shí)，按稀釋涂布平板法倒平板，并用記號(hào)筆標(biāo)明培育基名稱、編號(hào)和試驗(yàn)日期。(2)劃線時(shí)在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取上述的土壤懸液一環(huán)在平板上劃線。劃線的方法很多，但無(wú)論采納哪種方法，其目的都是通過(guò)劃線將樣品在平板上進(jìn)行稀釋，使之形成單個(gè)菌落。eq\a\vs4\al(3.)利用選擇培育基進(jìn)行分別不同的微生物對(duì)不同的試劑、染料、抗生素等具有不同的反抗實(shí)力，利用這些特點(diǎn)可配制出適合某種微生物生長(zhǎng)而限制其他微生物生長(zhǎng)的選擇培育基。用這種培育基來(lái)培育微生物就可以達(dá)到純種分別的目的。此試驗(yàn)用到的選擇培育基必需含有碳源、尿素、無(wú)機(jī)鹽、水、酚紅。(1)推斷培育基制備是否合格的方法是將接種的培育基和未接種的培育基同時(shí)放入37℃恒溫箱中培育24～48h，視察未接種的培育基上是否有菌落生長(zhǎng)。假如未接種的培育基上無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培育基的制備是勝利的，否則須要重新制備。(2)推斷選擇培育基是否起選擇作用，可將LB全養(yǎng)分培育基和選擇培育基分別接種，同時(shí)放入37℃恒溫箱中培育24～48h，視察兩種培育基上菌落數(shù)目的多少。假如選擇培育基上的菌落數(shù)遠(yuǎn)少于LB全養(yǎng)分培育基上的菌落數(shù)，則證明選擇培育基的確起到了選擇作用。eq\a\vs4\al(4.)菌絲尖端切割菌絲尖端切割適于絲狀真菌。用無(wú)菌的解剖刀切取位于菌落邊緣的菌絲的尖端，將它們移到合適的培育基上培育后，就能得到新菌落。1．苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，探討人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．圖中②培育目的菌株的選擇培育基中應(yīng)加入苯酚作為碳源B．假如要測(cè)定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采納稀釋涂布平板法C．若圖中④為比照試驗(yàn)，則其中應(yīng)以苯酚作為唯一碳源D．運(yùn)用平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落答案：C2．微生物與人類關(guān)系親密。雖然有些微生物能使動(dòng)植物患病，但多數(shù)微生物對(duì)人類是有益的。請(qǐng)回答有關(guān)微生物及其應(yīng)用的問(wèn)題：(1)培育微生物的培育基配方中一般含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽。從土壤中分別分解尿素的細(xì)菌時(shí)，培育基中加的唯一氮源為_(kāi)_______，這種培育基稱為_(kāi)_______培育基。(2)在制備固體培育基的倒平板操作時(shí)，平板冷凝后，為什么要將平板倒置？________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)分別微生物的方法很多，最常用的是平板劃線法和________法。解析：分別微生物的培育基稱為選擇培育基，在培育基中添加尿素為唯一氮源可分別分解尿素的細(xì)菌；制作固體培育基的倒平板操作時(shí)，平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝聚水珠，凝固后的培育基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培育基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基，造成污染；分別微生物最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。為保證無(wú)菌操作，整個(gè)操作過(guò)程要在酒精燈的火焰旁進(jìn)行。答案：(1)尿素選擇(2)皿蓋上會(huì)凝有水珠，防止水珠落入培育皿造成污染，還可使培育基表面的水分更好揮發(fā)(3)稀釋涂布平板從土壤中分別出以尿素為氮源的微生物試驗(yàn)的相關(guān)分析eq\a\vs4\al(1.)從合適的土壤中采集微生物(1)沒(méi)硬化，腐殖質(zhì)豐富的土壤含有較多的以尿素為氮源的微生物。(2)采土樣最好的土層是5～25cm。(3)采土樣地點(diǎn)選好后，用小鏟子去除5cm表土，取離地面5～15cm處的土樣10～25克，盛于預(yù)先滅菌的牛皮紙袋中扎緊，并標(biāo)明時(shí)間、地點(diǎn)和環(huán)境等狀況，以備查看。eq\a\vs4\al(2.)試驗(yàn)原理尿素eq\o(→,\s\up7(細(xì)菌))NH3中性堿性酚紅顏色：黃色紅色酚紅在酸性環(huán)境中呈黃色，在堿性環(huán)境中為紅色，變色范圍是pH為6.4～8.2。eq\a\vs4\al(3.)酚紅指示劑鑒定尿素分解菌的原理尿素分解菌向胞外分泌脲酶，產(chǎn)生的脲酶向四周擴(kuò)散，使培育基中的尿素水解，尿素分解后產(chǎn)生氨，氨為堿性，使培育基變堿，酚紅在酸性環(huán)境中為黃色，在堿性環(huán)境里變?yōu)榧t色，于是酚紅由黃變紅。培育基中的酸堿指示劑產(chǎn)生顏色改變，標(biāo)記著存在脲酶水解尿素的作用，從而證明這一菌株可以以尿素為氮源。隨著培育時(shí)間的延長(zhǎng)，紅色區(qū)域的面積越來(lái)越大。紅色環(huán)狀區(qū)域的大小代表脲酶活性的強(qiáng)弱和含量的多少。紅色區(qū)域越大，表明菌株利用尿素的實(shí)力越強(qiáng)。由此，依據(jù)培育基紅色的深淺，可推斷不同土壤中選擇出的微生物對(duì)尿素分解實(shí)力的凹凸。eq\a\vs4\al(4.)所用培育基的特點(diǎn)(1)瓊脂在制作固體培育基時(shí)起凝固劑的作用，但它卻是一種未被純化的混合物，里面有肯定量的含氮化合物。在本試驗(yàn)中所運(yùn)用的尿素培育基要求供應(yīng)氮元素的物質(zhì)只有尿素，用這種培育基才能分別得到含脲酶的細(xì)菌。所以要將瓊脂純化，去除那些含氮化合物，這樣經(jīng)純化得到的瓊脂糖就可以代替瓊脂做凝固劑且不會(huì)帶來(lái)含氮化合物對(duì)本試驗(yàn)的干擾。(2)本試驗(yàn)的微生物分別與大腸桿菌的分別的區(qū)分試驗(yàn)名稱分別方法分別的內(nèi)容分別結(jié)果大腸桿菌培育和分別劃線分離法從同種菌種中分別得到同種菌的單菌落在劃線的末端出現(xiàn)大腸桿菌單菌落分別以尿素為氮源的微生物涂布分離法從土壤浸出液里所存在的各種細(xì)菌中只將含有脲酶的細(xì)菌分別出來(lái)只出現(xiàn)含有脲酶的細(xì)菌菌落(3)全養(yǎng)分培育基與尿素培育基上的菌落在數(shù)量和類型上的區(qū)分全養(yǎng)分培育基屬于基礎(chǔ)培育基，而尿素培育基屬于選擇培育基。全養(yǎng)分培育基上的菌落數(shù)量和種類都明顯多于尿素培育基上的。因?yàn)槿B(yǎng)分培育基中的氮源是蛋白胨，很多細(xì)菌都能利用它，而尿素培育基中的氮源只有尿素，只有含脲酶的細(xì)菌才能利用它。eq\a\vs4\al(5.)統(tǒng)計(jì)微生物數(shù)量的方法測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法很多，主要有稀釋涂布平板法(又稱平板菌落計(jì)數(shù)法)、顯微鏡干脆計(jì)數(shù)法、光電比濁法、最大可能數(shù)(MPN)法、膜過(guò)濾法等。常規(guī)的計(jì)數(shù)方法是稀釋涂布平板法和顯微鏡干脆計(jì)數(shù)法。(1)稀釋涂布平板法①過(guò)程：將待測(cè)含菌樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋，使其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，然后取肯定量的稀釋樣品液，接種到平板上。②計(jì)數(shù)：經(jīng)過(guò)肯定時(shí)間培育后，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的單菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)活菌，最終統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，依據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣量，換算出單位樣品中所含的活菌數(shù)。③優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)是可以獲得活菌數(shù)的信息。缺點(diǎn)是該計(jì)數(shù)法操作過(guò)程較繁，須要培育肯定時(shí)間才有結(jié)果，且測(cè)定結(jié)果易受多種因素的影響。④留意事項(xiàng)：a.用此法計(jì)數(shù)時(shí)，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板計(jì)數(shù)，同時(shí)做一系列濃度梯度試驗(yàn)，探究合適的稀釋度。對(duì)分解尿素的微生物計(jì)數(shù)時(shí)，一般制備成10－2、10－3、10－4、10－5土壤稀釋液。b.事實(shí)上，由于待測(cè)樣品不易完全分散成單個(gè)細(xì)胞，故所形成的菌落并非都是單菌落，有一部分是由2個(gè)以上的細(xì)胞長(zhǎng)成的，因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果會(huì)比實(shí)際值偏低?，F(xiàn)在已采納菌落形成單位(cfu)來(lái)表示樣品的活菌含量。(2)顯微鏡干脆計(jì)數(shù)法①方法：測(cè)定酵母細(xì)胞數(shù)或霉菌孢子數(shù)常采納在顯微鏡下干脆進(jìn)行計(jì)數(shù)的方法，該計(jì)數(shù)方法被廣泛應(yīng)用于酒精、啤酒和白酒等的工業(yè)化生產(chǎn)中。該法是將酵母菌或霉菌孢子懸液，放在血球計(jì)數(shù)器載玻片與蓋玻片之間的計(jì)數(shù)室中，在顯微鏡下干脆進(jìn)行計(jì)數(shù)，是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法。②缺點(diǎn)：a.不能區(qū)分死菌與活菌；b.不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌計(jì)數(shù)；c.須要相對(duì)高的細(xì)菌濃度；d.個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以視察。(3)光電比濁計(jì)數(shù)法光電比濁計(jì)數(shù)法是采納光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，測(cè)定菌懸液的光密度或透光度，其優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便快速，可以連續(xù)測(cè)定，適合于自動(dòng)限制。但該法除了受菌體濃度影響外，還受細(xì)胞形態(tài)、大小、培育液成分及所采納光波長(zhǎng)等因素的影響。eq\a\vs4\al(6.)快速檢測(cè)微生物的方法(1)原理：依據(jù)微生物特別的生理特性或利用某些代謝產(chǎn)物的生化反應(yīng)來(lái)設(shè)計(jì)特別的分別培育基，通過(guò)視察微生物在選擇性培育基上的生長(zhǎng)狀況或生化反應(yīng)如透亮圈、變色圈、抑菌圈等進(jìn)行分別。(2)變色圈法：在平板中加入指示劑或顯色劑，使所需微生物能被快速鑒別出來(lái)。產(chǎn)生有機(jī)酸或胺等堿性物質(zhì)的微生物，通常采納pH值指示劑可檢測(cè)出來(lái)。1．下面是分別分解尿素的細(xì)菌所用的培育基配方：KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂糖15.0g自來(lái)水定容至1000mL請(qǐng)依據(jù)以上配方，回答下列問(wèn)題：(1)該培育基含有微生物所須要的________類養(yǎng)分物質(zhì)。其中最主要的碳源是________，氮源是________。(2)該培育基按物理性質(zhì)劃分是________培育基；按培育基的作用劃分是選擇培育基，該培育基具有選擇作用的緣由是_______________________________________________________________________________________________________________________。(3)在該培育基中，可通過(guò)檢測(cè)pH的改變來(lái)推斷尿素是否被分解，依據(jù)的原理________________________________________________________________________。(4)若用該培育基來(lái)鑒定某種細(xì)菌是否能夠分解尿素，可在培育基中加入________指示劑，尿素被分解后指示劑變紅色。解析：該培育基含有碳源(葡萄糖)、氮源(尿素)、水、無(wú)機(jī)鹽4類養(yǎng)分物質(zhì)；該培育基以尿素為唯一氮源，屬于選擇培育基，選擇培育分解尿素的菌；由于培育基中含有瓊脂糖，又屬于固體培育基；在細(xì)菌分解尿素的過(guò)程中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培育基的堿性增加，pH上升，培育基中加入的酚紅指示劑在堿性環(huán)境中變紅。答案：(1)4葡萄糖尿素(2)固體該培育基中，唯一的氮源是尿素，只有能分解尿素的微生物才能在該培育基上生長(zhǎng)和繁殖(3)在細(xì)菌分解尿素的過(guò)程中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培育基的堿性增加，pH上升(4)酚紅2．現(xiàn)從土壤中分別以尿素為氮源的細(xì)菌，試驗(yàn)過(guò)程如下圖所示：eq\x(土樣)→eq\x(土壤浸出液)→eq\x(稀釋)→eq\x(接種)→eq\x(培育、視察)請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)欲從土壤中分別出能分解尿素的細(xì)菌，將土壤用________進(jìn)行一系列的梯度稀釋，同一濃度的土壤稀釋液應(yīng)至少涂布________個(gè)平板，通常以每個(gè)培育皿中有________個(gè)以內(nèi)的單菌落的那一組稀釋倍數(shù)為最合適。(2)接種后的培育皿________于37℃的恒溫箱中培育。若培育基中存在含脲酶的細(xì)菌，其菌落四周會(huì)出現(xiàn)________，這是由于尿素被分解產(chǎn)生氨氣，與該培育基中的________________________產(chǎn)生的顏色改變，從而證明這一菌株能以尿素為氮源。(3)分別能利用尿素的細(xì)菌時(shí)所用的培育基成分上最主要的特點(diǎn)是_________________________________________________________________________________________。(4)下列操作須要在酒精燈火焰旁進(jìn)行的是(多選)()A．稱取葡萄糖、瓊脂糖等培育基成分B．倒平板C．涂布平板D．微生物的培育(5)與LB全養(yǎng)分培育基上的菌落數(shù)相比，尿素培育基上只有少數(shù)菌落的緣由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)涂布分別法必需先用無(wú)菌水對(duì)土樣進(jìn)行一系列的梯度稀釋，通常以每個(gè)培育皿中有20個(gè)以內(nèi)的單菌落的那一組稀釋倍數(shù)為最合適。(2)接種后需倒置培育皿恒溫培育。含有脲酶的細(xì)菌能夠?qū)⒛蛩胤纸?，產(chǎn)生的氨氣使培育基呈堿性，導(dǎo)致培育基中的酚紅指示劑呈紅色。(3)分別能利用尿素的細(xì)菌時(shí)所用的培育基應(yīng)以尿素為唯一氮源的固體培育基。(4)進(jìn)行微生物培育和分別時(shí)，倒平板、涂布平板均須要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，以防雜菌污染。(5)尿素培育基只以尿素為氮源，在尿素培育基上生長(zhǎng)繁殖的只能是少數(shù)能夠合成脲酶可利用尿素的細(xì)菌。答案：(1)無(wú)菌水320(2)倒置紅色環(huán)帶酚紅指示劑(3)以尿素作為唯一氮源的(固體)培育基(4)BC(5)土壤中能利用尿素的細(xì)菌在土壤菌群中只占極少數(shù)量一、選擇題eq\a\vs4\al(1.)土壤中有些微生物能利用尿素是因?yàn)?)A．其體內(nèi)含有脲酶B．其體內(nèi)含有氨(NH3)酶C．它能將CO2合成為有機(jī)物D．它們不須要氮源解析：選A。能利用尿素的微生物就是因?yàn)轶w內(nèi)含有脲酶，可降解尿素為其生長(zhǎng)繁殖供應(yīng)氮源。eq\a\vs4\al(2.)從土壤中分別以尿素為氮源的微生物時(shí)，所用的LB培育基由以下哪一組成分構(gòu)成()A．蛋白胨、NaCl、水、酵母提取物、瓊脂B．蛋白胨、NaCl、水、瓊脂糖C．蛋白胨、NaCl、水、酵母提取物、瓊脂糖D．葡萄糖、NaCl、水、酵母提取物、瓊脂解析：選C。LB培育基必需含五大養(yǎng)分元素：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子。由于是固體培育基還必需有凝固劑，為與尿素培育基作對(duì)比，所用凝固劑不能帶來(lái)氮源干擾，因此只能選擇相對(duì)更為純凈的瓊脂糖了。eq\a\vs4\al(3.)用10－4稀釋度的細(xì)菌懸液分別涂布于LB、尿素培育基上，培育后的結(jié)果，以下敘述正確的是()A．LB培育基上未出現(xiàn)任何菌落B．尿素培育基上出現(xiàn)的菌落數(shù)量和種類都多于LB培育基上的C．尿素培育基上出現(xiàn)的菌落數(shù)量和種類都少于LB培育基上的D．尿素培育基上是不行能出現(xiàn)菌落的解析：選C。LB培育基為完全培育基，會(huì)出現(xiàn)大量菌落。尿素培育基上只有能以尿素做氮源的微生物能存活，因此其上的菌落數(shù)量和種類都將會(huì)削減。尿素培育基上出現(xiàn)的菌落就是能利用尿素的那些微生物菌落。eq\a\vs4\al(4.)在做分別分解尿素的細(xì)菌試驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培育基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。A同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生緣由可能有()①由于土樣不同②由于培育基污染③由于操作失誤④沒(méi)有設(shè)置比照A．①②③ B．②③④C．①③④ D．①②④解析：選A。該同學(xué)可能取的土樣不同，可取其他同學(xué)的土樣進(jìn)行培育，同時(shí)將未接種的培育基同時(shí)培育，假如結(jié)果不是大約50個(gè)菌落，可能是培育基污染或操作有誤；假如結(jié)果和其他同學(xué)數(shù)據(jù)相同，且未接種的培育基沒(méi)有菌落生成，說(shuō)明是土樣不同。eq\a\vs4\al(5.)能合成脲酶的微生物所需的碳源和氮源分別是()A．二氧化碳和氮?dú)?B．葡萄糖和氨C．二氧化碳和尿素 D．葡萄糖和尿素解析：選D。能合成脲酶的微生物主要是分解尿素的細(xì)菌，其碳源為葡萄糖，氮源為尿素。eq\a\vs4\al(6.)某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培育基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL)()A．2.34×108 B．2.34×109C．234 D．23.4解析：選B。每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M＝(234÷0.1)×106＝2.34×109。eq\a\vs4\al(7.)可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是()A．以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑B．以尿素為唯一氮源的培育基中加入二苯胺試劑C．以尿素為唯一氮源的培育基中加入蘇丹Ⅲ試劑D．以尿素為唯一氮源的培育基中加入雙縮脲試劑解析：選A。酚紅指示劑是靈敏性高的堿性指示劑，分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，使pH上升，使酚紅指示劑變紅。eq\a\vs4\al(8.)進(jìn)行系列稀釋時(shí)，按怎樣的依次進(jìn)行()A．稀釋倍數(shù)遞增 B．稀釋倍數(shù)遞減C．不論稀釋度大小 D．A、B兩者都可解析：選A。將菌液進(jìn)行系列梯度稀釋，在稀釋倍數(shù)足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培育基表面形成單個(gè)菌落。eq\a\vs4\al(9.)有關(guān)倒平板的操作錯(cuò)誤的是()A．將滅過(guò)菌的培育皿放在火焰旁的桌面上B．使打開(kāi)的錐形瓶瓶口快速通過(guò)火焰C．將培育皿打開(kāi)，培育皿蓋倒放在桌子上D．等待平板冷卻凝固后須要倒過(guò)來(lái)放置解析：選C。在倒平板時(shí)，左手將皿蓋打開(kāi)一條縫隙，不能將培育皿完全打開(kāi)，以免雜菌污染。eq\a\vs4\al(10.)將接種后的培育基和一個(gè)未接種的培育基都放入37℃恒溫箱的目的是()A．對(duì)比視察培育基有沒(méi)有被微生物利用B．對(duì)比分析培育基上是否生有雜菌C．沒(méi)必要放入未接種的培育基D．為了下次接種時(shí)再運(yùn)用解析：選B。將接種后的培育基和一個(gè)未接種的培育基都放入37℃恒溫箱的目的是檢測(cè)培育基是否被雜菌污染，即制備是否合格。eq\a\vs4\al(11.)如圖為“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別和計(jì)數(shù)”試驗(yàn)中樣品稀釋示意圖。據(jù)圖分析正確的是()A．3號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為103倍B．4號(hào)試管中稀釋液進(jìn)行平板培育得到的菌落平均數(shù)恰好為5號(hào)試管的10倍C．5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7×109個(gè)D．該試驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要高答案：Ceq\a\vs4\al(12.)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法是()①涂布平板法②重量法③干脆計(jì)數(shù)法④比濁法⑤生理指標(biāo)法⑥膜過(guò)濾法A．①②③⑥ B．③④⑤⑥C．②③④⑥ D．①③④⑥解析：選D。微生物計(jì)數(shù)法主要有顯微鏡干脆計(jì)數(shù)法、平板菌落計(jì)數(shù)法、光電比濁法、最大可能數(shù)(MPN)法、膜過(guò)濾法等。eq\a\vs4\al(13.)分別以尿素為氮源的細(xì)菌和分別大腸桿菌都運(yùn)用了LB培育基，其成分()A．前者含瓊脂，后者不含瓊脂和瓊脂糖B．兩者都含有瓊脂C．前者含有瓊脂糖，后者不含瓊脂糖但含瓊脂D．兩者都不含瓊脂和瓊脂糖解析：選C。瓊脂和瓊脂糖都起凝固劑的作用，用于制備固體培育基。但瓊脂為混合物，含少量含氮化合物，瓊脂加以純化，去除含氮化合物就成為瓊脂糖。分別大腸桿菌和含脲酶的細(xì)菌用的都是固體培育基，因此都必需含有凝固劑：瓊脂或瓊脂糖。但是，由于瓊脂為混合物，其中含肯定量的含氮化合物，因此不能用于分別以尿素為氮源的細(xì)菌。瓊脂糖為瓊脂的純化物，不含含氮化合物，可用于分別以尿素為氮源的細(xì)菌。eq\a\vs4\al(14.)下列說(shuō)法不正確的是()A．科學(xué)家從70～80℃熱泉中分別得到耐高溫的TaqDNA聚合酶B．統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的5個(gè)平板的菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、M4、M5，以M3作為該樣品菌落數(shù)的估計(jì)值C．設(shè)置比照試驗(yàn)的主要目的是解除試驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，提高試驗(yàn)結(jié)果的可信度D．同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量最大，種類最多解析：選B。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)應(yīng)留意選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，且至少涂布3個(gè)平板作為重復(fù)組，重復(fù)組的結(jié)果不能相差太多，然后取平均值進(jìn)行計(jì)算。eq\a\vs4\al(15.)通過(guò)選擇培育基可以從混雜的微生物群體中分別出所需的微生物。在缺乏氮源的培育基上大部分微生物無(wú)法生長(zhǎng)；在培育基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌；在培育基中加入10%的酚類可以抑制細(xì)菌和霉菌。利用上述方法不能從混雜的微生物群體中分別出()A．大腸桿菌 B．霉菌C．放線菌 D．固氮細(xì)菌解析：選A。缺乏氮源的培育基可以選擇出固氮細(xì)菌；在培育基中加入青霉素，可以選擇出霉菌；在培育基中加入10%的酚類可以選擇出放線菌。eq\a\vs4\al(16.)在農(nóng)田土壤的表層自生固氮菌較多。將用表層土制成的稀泥漿接種到特制的培育基上培育，可將自生固氮菌與其他細(xì)菌分開(kāi)，對(duì)培育基的要求是()①加抗生素②不加抗生素③加氮素④不加氮素⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦37℃恒溫箱中培育⑧28～30℃溫度下培育A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧C．②④⑤⑧ D．①④⑥⑦解析：選C。自生固氮菌生長(zhǎng)繁殖的相宜溫度是28～30℃，能夠?qū)o(wú)機(jī)氮源合成有機(jī)氮，不須要加氮源。細(xì)菌對(duì)抗生素敏感。固氮菌是異養(yǎng)生物，須要加葡萄糖。eq\a\vs4\al(17.)能夠測(cè)定樣品活菌數(shù)的方法是()A．稀釋涂布平板法 B．干脆計(jì)數(shù)法C．重量法 D．比濁法解析：選A。利用稀釋涂布平板法能夠在不影響生活的狀況下將細(xì)菌個(gè)體從固體培育基上分別出來(lái)，并可以繁殖形成菌落，可依據(jù)菌落數(shù)測(cè)定出樣品活菌數(shù)。eq\a\vs4\al(18.)在做土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)試驗(yàn)時(shí)，甲組試驗(yàn)用氮源只含尿素的培育基，乙組試驗(yàn)用氮源除尿素外還含硝酸鹽的培育基，其他成分都相同，在相同條件下操作，培育與視察，則乙組試驗(yàn)屬于()A．空白比照 B．標(biāo)準(zhǔn)比照C．相互比照 D．條件比照解析：選D。乙組和甲組試驗(yàn)僅是培育條件不同，所以為條件比照。eq\a\vs4\al(19.)下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”試驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是()A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培育基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上C．將試驗(yàn)組和比照組平板倒置，37℃恒溫培育24～48小時(shí)D．確定比照組無(wú)菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的試驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)解析：選D。選擇菌落數(shù)在30～300的一組平板為代表進(jìn)行計(jì)數(shù)，所以D不對(duì)。eq\a\vs4\al(20.)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培育基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是()A．涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、240和250，取平均值163D．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250，取平均值233解析：選D。在設(shè)計(jì)試驗(yàn)時(shí)，肯定要涂布至少3個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增加試驗(yàn)的勸服力與精確性，所以A、B不正確。C項(xiàng)雖涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)潔地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值。二、非選擇題eq\a\vs4\al(21.)某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物汲取和利用?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，緣由是前者能產(chǎn)生__________________。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，緣由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。但可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是________________________________________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。(2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培育基時(shí)，應(yīng)選擇________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的緣由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培育基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________________________________________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。解析：(1)土壤中的某些細(xì)菌之所以能夠分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡墚a(chǎn)生脲酶。尿素分解菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物，必需利用現(xiàn)成的有機(jī)物(如葡萄糖)作為碳源；葡萄糖通過(guò)呼吸作用被分解時(shí)，能為細(xì)胞生命活動(dòng)供應(yīng)能量，同時(shí)，葡萄糖還可以轉(zhuǎn)化成脂肪、某些氨基酸等物質(zhì)，所以進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖能為其他有機(jī)物的合成供應(yīng)原料。(2)選擇培育基是只允許特定種類的微生物(目的微生物)生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻擋其他種類微生物生長(zhǎng)的培育基。本試驗(yàn)的目的菌是可分解尿素的細(xì)菌，因此，配制的培育基應(yīng)只允許尿素分解菌生長(zhǎng)，NH4NO3可以作為全部細(xì)菌的氮源，培育基中如含有NH4NO3，將不能起到篩選作用。(3)KH2PO4和Na2HPO4能為細(xì)菌生長(zhǎng)供應(yīng)鉀鹽、鈉鹽和磷酸鹽，而H2POeq\o\al(－,4)/HPOeq\o\al(2－,4)可以使培育基中pH保持相對(duì)穩(wěn)定。答案：(1)脲酶分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物為細(xì)胞生命活動(dòng)供應(yīng)能量，為其他有機(jī)物的合成供應(yīng)原料(2)尿素其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用(3)為細(xì)菌生長(zhǎng)供應(yīng)無(wú)機(jī)養(yǎng)分，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定eq\a\vs4\al(22.)某化工廠的污水池中，含有一種有害的、難于降解的有機(jī)化合物A。探討人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培育基，勝利地篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。試驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問(wèn)題：(1)培育基中加入化合物A的目的是篩選________，這種培育基屬于________培育基。(2)“目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源是來(lái)自培育基中的________，試驗(yàn)須要振蕩培育，由此推想“目的菌”的代謝類型是________。(3)培育若干天后，應(yīng)選擇培育瓶中化合物A含量________的培育液，接入新的培育液中連續(xù)培育，使“目的菌”的數(shù)量________。(4)轉(zhuǎn)為固體培育時(shí)，常采納________的方法接種，獲得單菌落后接著篩選。(5)若探討“目的菌”的生長(zhǎng)規(guī)律，將單個(gè)菌落進(jìn)行液體培育，可采納________的方法進(jìn)行計(jì)數(shù)，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，以________為縱坐標(biāo)，繪制生長(zhǎng)曲線。(6)試驗(yàn)結(jié)束后，運(yùn)用過(guò)的培育基應(yīng)當(dāng)進(jìn)行________處理后，才能倒掉。解析：加入化合物A的培育基屬于選擇培育基，選擇培育目的菌。由于化合物A為有機(jī)物，且要振蕩，說(shuō)明目的菌為異養(yǎng)需氧型?！澳康木鄙L(zhǎng)繁殖過(guò)程中要不斷消耗養(yǎng)分物質(zhì)，培育若干天后，應(yīng)選擇培育瓶中化合物A含量削減的培育液，接入新的培育液中連續(xù)培育，使“目的菌”的數(shù)量增加。轉(zhuǎn)為固體培育時(shí)，常采納劃線的方法接種，獲得單菌落后接著篩選。若探討“目的菌”的生長(zhǎng)規(guī)律，將單個(gè)菌落進(jìn)行液體培育，可采納定期取樣的方法進(jìn)行計(jì)數(shù)，繪制生長(zhǎng)曲線應(yīng)以時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)束后要對(duì)培育基進(jìn)行滅菌，以免污染環(huán)境。答案：(1)目的菌選擇(2)化合物A異養(yǎng)需氧型(3)削減增加(4)劃線(5)定期取樣細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)(6)滅菌eq\a\vs4\al(23.)土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，同學(xué)們?cè)噲D探究土壤中微生物對(duì)尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下試驗(yàn)，并勝利篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌(目的菌)。培育基成分如表所示，試驗(yàn)步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答：KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10g尿素1g瓊脂糖15g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL(1)培育基中加入尿素的目的是篩選________，這種培育基屬于________培育基。(2)“目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源分別來(lái)自培育基中的________和________，試驗(yàn)須要振蕩培育，緣由是_____________________________________________________。(3)圖中將細(xì)菌轉(zhuǎn)到固體培育基上時(shí)，常采納________的方法接種，獲得單菌落后接著篩選。(4)下列材料或用具：①培育細(xì)菌用的培育基與培育皿，②玻棒、試管、錐形瓶和吸管，③試驗(yàn)操作者的雙手。其中須要滅菌的是：________；須要消毒的是：________。(填序號(hào))解析：培育基中添加尿素為氮源，目的是篩選分解尿素的微生物，這種培育基從功能上來(lái)說(shuō)，屬于選擇培育基；該培育基的氮源為尿素，碳源為葡萄糖。培育過(guò)程中震蕩的目的是增加培育液中的氧氣，說(shuō)明尿素分解菌為需氧型微生物；將菌液接種到固體培育基上培育，一般要采納稀釋涂布平板法或平板劃線法；培育細(xì)菌用的培育基與培育皿要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，玻棒、試管、錐形瓶和吸管要用干熱滅菌，試驗(yàn)操作者的雙手用酒精消毒。答案：(1)目的菌選擇(2)尿素葡萄糖為目的菌供應(yīng)氧氣(3)涂布平板(劃線)(4)①②③eq\a\vs4\al(24.)幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分別培育。試驗(yàn)基本步驟如下：eq\x(配制培育基)→eq\x(滅菌、倒平板)→eq\x(X)→eq\x(培育)→eq\x(視察)請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)在配制培育基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示