高效液相色譜法Thinlayerchromatography課件

高效液相色譜法High-performanceliquidchromatographyThinlayerchromatography廣州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院Iodometry一基本原理高效液相色譜法（HPLC）是以液體作為流動(dòng)相，高效填充劑作固定相的色譜法。具高效、高速、高靈敏度、高自動(dòng)化、應(yīng)用范圍廣、選擇性高等優(yōu)勢(shì)。渦流擴(kuò)散項(xiàng)（A）固定相粒度細(xì)而均勻，具較高柱效，該項(xiàng)影響較小?？v向擴(kuò)散項(xiàng)（B/u）液體的黏度大，柱溫低，該項(xiàng)可忽略傳質(zhì)阻力項(xiàng)（Cu）固定相的顆粒和流動(dòng)相的黏度來決定速率理論Iodometry一基本原理為了獲取最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，HPLC的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)滿足：(1)固定相(2)流動(dòng)相(3)柱溫粒度小而均勻的球形化學(xué)鍵合固定相。低黏度、低流速的流動(dòng)相。適宜的柱溫。Iodometry二、高效液相色譜儀由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)五部分組成。1

輸液系統(tǒng)（高壓輸液泵）2進(jìn)樣系統(tǒng)（進(jìn)樣器）3

分離系統(tǒng)（色譜柱）4檢測(cè)系統(tǒng)（檢測(cè)器）5數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)1、輸液系統(tǒng)Iodometry二、高效液相色譜儀貯液瓶、過濾與脫氣裝置、高壓輸液泵和梯度洗脫裝置組成。其中高壓泵是最重要的組成部件。等度洗脫梯度洗脫洗脫過程中流動(dòng)相組成保持恒定不變，適用于組分少、性質(zhì)差異小的一般組分分析。洗脫過程中可根據(jù)程序設(shè)定進(jìn)行流動(dòng)相組成比例的不斷改變，適用組分多、性質(zhì)差異大的復(fù)雜組分分析2、進(jìn)樣系統(tǒng)Iodometry二、高效液相色譜儀手動(dòng)進(jìn)樣來自泵來自泵充樣位置（load)進(jìn)樣位置(inject)至廢液至廢液至色譜柱至色譜柱自動(dòng)進(jìn)樣：適用于大量樣品分析3、分離系統(tǒng)Iodometry二、高效液相色譜儀色譜柱是HPLC的核心部件，由柱管和固定相組成。柱管：內(nèi)壁高度拋光的直形不銹鋼管固定相：細(xì)小而均勻的填料來進(jìn)行高壓勻漿裝柱使用過程注意避免色譜柱出現(xiàn)堵塞或污染的情況4、檢測(cè)系統(tǒng)Iodometry二、高效液相色譜儀靈敏度、精密度和重現(xiàn)性較好，線性范圍寬的優(yōu)勢(shì)，是HPLC中應(yīng)用最廣泛的一類檢測(cè)器。靈敏度高（檢測(cè)限可達(dá)到pg級(jí)）、選擇性好的特點(diǎn)，適用于痕量分析。通用型檢測(cè)器。但其靈敏度較低，需恒溫檢測(cè)，且不能用于梯度洗脫。紫外-可見光檢測(cè)器（UV-vis）熒光檢測(cè)器（FID）示差折光率檢測(cè)器（RID）5、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)Iodometry二、高效液相色譜儀利用色譜工作站來進(jìn)行色譜數(shù)據(jù)的采集、分析及結(jié)果處理，獲取保留時(shí)間、峰高、峰寬、分離度及拖尾因子等色譜參數(shù)。色譜工作站色譜數(shù)據(jù)采集，處理1.固定相Iodometry非極性鍵合相為十八烷基（C18）、辛烷基（C8）等非極性基團(tuán)，常用于反相鍵合相色譜法中等極性鍵合相鍵合醚基，常用于正相或反相鍵合相色譜法，應(yīng)用較少化學(xué)鍵合相固定相作為HPLC中最常用的固定相?？筛鶕?jù)鍵合基團(tuán)的極性情況分為3類。-CN、-NH2等極性較大的基團(tuán)，常用于正相鍵合色譜法極性鍵合相三、固定相和流動(dòng)相2.流動(dòng)相Iodometry三、固定相和流動(dòng)相(1)脫氣用前需用微孔濾膜過濾并進(jìn)行脫氣操作。(2)物理性質(zhì)(3)匹配檢測(cè)器(4)化學(xué)性質(zhì)選擇黏度低，純度高的流動(dòng)相如甲醇、乙腈。流動(dòng)相必須與所使用的檢測(cè)器相匹配。