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文檔簡介

專題

基因工程利用PCR獲取和擴增目的基因微專突破你將打開PCR新世界的大門

DNA連接酶連接:環(huán)化

C

PCR體系1和PCR體系2必須分開進行的原因是________________________________________________________________________________________。由于引物B和C互補,因此,分別利用引物A和B,引物C和D對目的基因進行PCR,得到的兩種DNA產(chǎn)物解旋后,可以互為引物雜交在一起,在DNA聚合酶的作用下延伸,就能成為一條完整的DNA片段。最后,用引物A和D進行擴增得到含有突變位點的DNA片段。引物B和引物C存在堿基互補配對片段,置于同一反應體系會發(fā)生堿基互補配對導致引物失效

常規(guī)上游引物常規(guī)下游引物突變上游引物PCR1:使用常規(guī)下游引物和突變上游引物PCR1:使用常規(guī)下游引物和突變上游引物PCR2:使用下游大引物和常規(guī)上游引物PCR2:使用下游大引物和常規(guī)上游引物PCR2:使用下游大引物和常規(guī)上游引物思考:大引物PCR過程中兩次PCR能不能放在同一支試管進行?可以,因為模板相同,但是第二次的大引物和突變上游引物有一段是互補的,如何解決?PCR1:使用常規(guī)下游引物和突變上游引物將正常上游引物設(shè)計長一些,提高第二次PCR過程中的復性溫度(第二次引物長一些)

圖1

圖2

翻譯溫度、植株類型

溫度

植株類型

蛋白含量__________________________________________________________

答題攻略(五)

基因工程

Ⅱ.限制酶的選擇原則P135圖a圖b

(2)思維解讀P1362.解碼長句

本塊考查的試題常設(shè)置原因分析、依據(jù)反推和機理分析等問題,頻繁出現(xiàn)的考題形式是給出某一現(xiàn)象或結(jié)果,要求回答出現(xiàn)這些現(xiàn)象(或結(jié)果)的事實或理論支撐。解題思路是在題干中找“現(xiàn)象”(因)和“結(jié)果”(果),然后基于所學的生物學原理向前反推導致該“結(jié)果”的可能原因,關(guān)鍵點是需形成完整的邏輯鏈條,邏輯鏈條不能跳躍。答題時注意下面技巧:(1)選擇一個合理的邏輯構(gòu)架①鏈式邏輯:有邏輯的起點和終點,在起點和終點中間找到關(guān)鍵詞來構(gòu)建完整的一句話。②三段論邏輯:這是邏輯學中最重要的方法,包括以教材為依托的大前提和以題干中的信息為主干的小前提,進而推出相應的結(jié)論。③比較邏輯:實驗中的原因解釋一般通過比較兩種不同實驗變量得到結(jié)論。④反證邏輯:實在找不到邏輯的題目,不能用上述方法來完成邏輯推理,就需要用硬證法固定的語句“只有……才能……”或者用反證法固定的語句“若非……則是……”。(2)使用恰當?shù)年P(guān)鍵詞①教材中的專有名詞;②題目中的專有名詞。(3)答題模板典例分析

6

思維運用1.識圖第一步:審題圖,獲信息結(jié)合題圖分析題意:要通過改變

基因上游序列,來解除對

基因表達的抑制;設(shè)計思路為擴增

基因上游不同長度的片段(

片段),并將這些片段分別插入表達載體中進行轉(zhuǎn)化和熒光檢測,以確定該結(jié)合位點的具體位置第二步:理知識,找邏輯①需要將擴增后的產(chǎn)物定向插入并指導熒光蛋白基因的表達,則含有啟動子的擴增后的產(chǎn)物讀取方向與熒光蛋白基因的讀取方向一致,故擴增后的產(chǎn)物中的

端與熒光蛋白基因中限制酶

Ⅰ識別序列端結(jié)合,才能保證擴增后的產(chǎn)物定向插入并指導熒光蛋白基因的表達②明確載體需要的限制酶:熒光蛋白基因的右側(cè)有三個限制酶切割位點,分別是Ⅰ、Ⅰ和

Ⅰ的切割位點,但因為用Ⅰ會破壞熒光蛋白基因,所以只能用Ⅰ和

Ⅰ續(xù)表第二步:理知識,找邏輯③明確切割調(diào)控序列及啟動子需要的限制酶:由于調(diào)控序列及啟動子中有

Ⅰ限制酶切割位點,因此需尋找切割后的末端能與

Ⅰ限制酶切割后的末端連接且調(diào)控序列及啟動子中無其切割位點的限制酶,Ⅰ符合這一要求,故在

末端添加的序列所對應的限制酶是

Ⅰ;由于調(diào)控序列及啟動子中含有

Ⅰ的切割位點,因此需尋找切割后的末端能與

Ⅰ限制酶切割后的末端連接且調(diào)控序列及啟動子中無其切割位點的限制酶,Ⅰ符合這一要求,故在

末端添加的序列所對應的限制酶是

Ⅰ續(xù)表2.長句(1)邏輯結(jié)構(gòu)

跟蹤訓練

圖甲圖乙(1)

與圖甲中啟動子結(jié)合的酶是____________。除圖甲中標出的結(jié)構(gòu)外,作為載體,質(zhì)粒還需具備的結(jié)構(gòu)有____________________(答出2個結(jié)構(gòu)即可)。

復制原點、標記基因

不是

(1)

上述過程屬于________工程。蛋白質(zhì)

②圖1

圖2

標記基因[解析]

一個完整的基因表達載體應包括啟動子、終止子、標記基因、目的基因、復制原點等,其中的標記基因用于對含目的基因的受體細胞的鑒定和篩選。

篩選導入目的基因的大腸桿菌5.7

逆轉(zhuǎn)錄

磷酸二酯鍵

無擴增產(chǎn)物

教材拾貝

.

..

..

..

.

.

.

.

..

..

..

.考點一

基因工程的工具及基本操作程序突破

核心整合易錯判斷

×

×

√7.

受體細胞為真核細胞,尤其是動植物細胞時,抗生素很多時候不能殺死未標記的細胞,無法起到篩選的效果,此時標記基因通常選擇熒光基因等。(

)√(4)

與秸稈焚燒相比,利用高效降解纖維素的細菌處理秸稈的優(yōu)點是____________________________________________________________________(答出2點即可)。

減少環(huán)境(空氣)污染,提高能量利用率,便于秸稈還田,增加土壤肥力等[解析]

秸稈焚燒一方面易造成大氣、粉塵污染,同時秸稈中的能量迅速以熱能形式散失。用纖維素分解菌處理秸稈則可避免環(huán)境污染現(xiàn)象,且如果利用該微生物降解秸稈還可以將秸稈中的能量轉(zhuǎn)化為人類可利用的能量,從而提高能量利用率,或者將秸稈和纖維素分解菌置于農(nóng)田土壤中作用,使秸稈還田,提高土壤肥力等。高考

經(jīng)典再研

反應管加人的單鏈DNA①_____________________________________________________________________________②_____________________________________________________________________________③______________________________________________________________________________④______________________________________________________________________________A.

①②

B.

②③

C.

①④

D.

③④√

由圖分析可知,D正確。

思維誤區(qū)解題時若沒有考慮目的基因會反接,可能會錯答為A;用

Ⅰ酶切后,

未被破壞,空質(zhì)粒與新構(gòu)建的含有目的基因的質(zhì)粒都能在含

的培養(yǎng)基中存活,若沒有考慮周全,可能會錯答為B解題關(guān)鍵解答本題的關(guān)鍵是正確提取圖示信息:圖中質(zhì)粒內(nèi),氨芐青霉素抗性基因內(nèi)含有Ⅰ和

Ⅰ的酶切位點,四環(huán)素抗性基因內(nèi)含有Ⅲ、Ⅰ和

Ⅰ的酶切位點

堿基缺失

3

1(兩空可顛倒)

部分個體基因型棕櫚酸(填“有”或“無”)

羥基棕櫚酸(填“有”或“無”)穎殼蠟質(zhì)(填“有”或“無”)

有①____無

有有②____

有有

引領(lǐng)

命題趨勢

C

限制酶

Ⅰ識別序列和切割位點

√√

限制酶

Ⅰ識別位點及切割位點

磷酸二酯①⑤

相反

(3)

過程③應選用_____________切割質(zhì)粒,利用所選限制酶進行操作的優(yōu)勢是__________________________________________________________________________(答兩點),切割后需要用______________(寫具體名稱)進行連接才能獲得重組質(zhì)粒。

考點二

基因工程的應用和蛋白質(zhì)工程突破

核心整合高考

經(jīng)典再研引領(lǐng)

命題趨勢突破

核心整合易錯判斷1.

乳腺反應器就是把藥用蛋白基因?qū)雱游锏娜橄偌毎小?/p>

(

)×5.

通過改造玉米中天冬氨酸激酶和二氫吡啶二羧酸合成酶相關(guān)基因,可以大幅度提高玉米中賴氨酸的含量。(

)√6.

由大腸桿菌工程菌獲得人的干擾素后可直接應用。(

√高考

經(jīng)典再研

檢測。通過該方法測序某疾病患者及對照個體的一段序列,結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是(

)

√√

例2

(2022·湖南卷·22,15分)水蛭是我國的傳統(tǒng)中藥材,主要藥理成分水蛭素為水蛭蛋白中重要成分之一,具有良好的抗凝血作用。擬通過蛋白質(zhì)工程改造水蛭素結(jié)構(gòu),提高其抗凝血活性?;卮鹣铝袉栴}:

氨基酸序列多肽鏈

密碼子的簡并性

從基因文庫中獲取目的基因

(3)

將提取的水蛭蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后,分析水解產(chǎn)物中的肽含量及其抗凝血活性,結(jié)果如圖所示。推測兩種處理后酶解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與肽的______(填“種類”或“含量”)有關(guān),導致其活性不同的原因是__________________________________________________________________________________。種類

提取的水蛭蛋白的酶解時間和處理的酶的種類不同,導致水蛭蛋白空間結(jié)構(gòu)有不同程度破壞[解析]

由圖可知,兩種酶處理后,肽含量差別不大,但抗凝血活性差別較大,說明兩種處理后酶解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與肽的種類有關(guān),導致其活性不同的原因見答案。(4)

若要比較蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解產(chǎn)物和天然水蛭素的抗凝血活性差異,簡要寫出實驗設(shè)計思路_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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