2024-2025學(xué)年高中生物第1章無菌操作技術(shù)實(shí)踐素能提升課學(xué)案蘇教版選修1

PAGE4-無菌操作技術(shù)實(shí)踐素能提升課一、微生物的分別與鑒定微生物的分別方法有許多種，本專題中常用的是平板劃線法、涂布平板法、微生物的選擇培育等。針對不同微生物的特點(diǎn)選擇不同的方法，對目的微生物進(jìn)行篩選。以下是尿素分解菌和纖維素分解菌的分別與鑒定比較。項(xiàng)目尿素分解菌的分別與鑒定纖維素分解菌的分別與鑒定分別選擇條件利用尿素為唯一氮源利用纖維素為唯一碳源鑒定方法培育基中加入酚紅指示劑，變紅色在以纖維素為唯一碳源的培育基上，利用剛果紅染色法，出現(xiàn)透亮圈鑒定原理細(xì)菌等微生物合成脲酶，將尿素分解產(chǎn)生NH3，使pH上升，加入酚紅變紅色分解纖維素的微生物產(chǎn)生纖維素酶，將纖維素分解為纖維二糖或葡萄糖，使纖維素—剛果紅復(fù)合物降解而出現(xiàn)透亮圈步驟土壤取樣→制備培育基→樣品梯度稀釋→涂布平板→培育視察→進(jìn)一步鑒定土壤取樣→制備培育基→選擇培育→富集培育→梯度稀釋→涂布培育→剛果紅染色法→挑取菌落→進(jìn)一步鑒定二、純化細(xì)菌的方法1．倒平板與涂布平板法的操作(1)倒平板操作(2)涂布平板操作①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中②取少量菌懸液不超過0.1mL）滴加到培育基表面③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，④用涂布器將菌懸液勻稱地涂布在待酒精燃盡后，冷卻8～10s培育基表面，涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動培育皿使涂布勻稱2．兩種純化細(xì)菌的方法比較項(xiàng)目優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)適用范圍平板劃線法可以視察菌落特征，對混合菌進(jìn)行分別不能計(jì)數(shù)適用于好氧菌稀釋涂布平板法可以計(jì)數(shù)，可以視察菌落特征汲取量較少，較麻煩，平板不干燥，效果不好，簡單擴(kuò)散適用于厭氧菌和兼性厭氧菌三、影響植物組織培育過程的幾種主要因素1．培育材料不同的植物組織，培育的難易程度差別很大，簡單進(jìn)行無性繁殖的植物也簡單進(jìn)行組織培育。同一種植物材料，材料的年齡、保存時(shí)間的長短對培育也有影響。幼齡、保存時(shí)間短的植物材料簡單培育勝利。菊花的組織培育，一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝。2．無菌條件培育基上有細(xì)菌等微生物存在時(shí)，它們比植物細(xì)胞生長、繁殖得更快，而且它們會產(chǎn)生毒素，使培育的植物細(xì)胞很快中毒死亡。因此在培育過程中要求進(jìn)行一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。3．植物激素在配制好的MS培育基中，經(jīng)常須要添加植物激素。其中生長素和細(xì)胞分裂素是啟動細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。植物激素的濃度、運(yùn)用的先后依次以及用量的比例等，都會影響試驗(yàn)結(jié)果。1．在進(jìn)行分別分解尿素的細(xì)菌的試驗(yàn)時(shí)，甲同學(xué)從培育基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只篩選出大約50個(gè)菌落。某同學(xué)的試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的緣由可能有()①土樣不同②培育基污染③操作失誤④沒有設(shè)置比照A．①②③ B．②③④C．①②④ D．①③④A[某同學(xué)從培育基上篩選出的菌落較多，存在多種緣由，如土樣不同、培育基可能被雜菌污染或操作過程失誤混入雜菌造成污染等。]2．下列有關(guān)平板劃線操作的說法正確的是()A．運(yùn)用已滅菌的接種環(huán)、培育皿，操作過程中不再滅菌B．打開含菌種的試管需通過火焰滅菌，取出菌種后需立刻塞上棉塞C．將沾有菌種的接種環(huán)快速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可D．最終將平板倒置，放入培育箱中培育D[在培育基上接種時(shí)，肯定要做到無菌操作，以防止雜菌污染影響試驗(yàn)或探討的結(jié)果。在酒精燈火焰旁邊約10cm的四周為無菌區(qū)，因而含菌種試管和待接種試管管口不能離開火焰旁邊，接種環(huán)、棉塞也不能離開火焰旁邊。接種完畢之后為了防止菌體污染，保證平安，要用火焰灼燒管口和接種環(huán)，馬上蓋上皿蓋。為防止皿蓋上的水珠落入培育基造成污染，應(yīng)將平板倒置。]3．菊花的組織培育須要嚴(yán)格的無菌操作，下列說法不正確的是()A．培育基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B．幼苗要先移植到消過毒的蛭石或者珍寶巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間C．用于植物組織培育的培育基同樣適合于某些微生物的生長，一旦感染雜菌則前功盡棄D．將菊花莖段插入時(shí)應(yīng)留意方向，不應(yīng)倒插，是為了防止雜菌污染D[植物的組織培育須要嚴(yán)格的無菌操作，將菊花莖段插入時(shí)，不應(yīng)倒插是因?yàn)榈共宓那o段不能形成愈傷組織，而不是為了防止雜菌污染。]4．美國科學(xué)家斯圖爾德應(yīng)用植物組織培育技術(shù)，將二倍體胡蘿卜韌皮部的一些細(xì)胞進(jìn)行離體培育，最終發(fā)育成完整的新植株(如圖)。關(guān)于這一科學(xué)事實(shí)，下列敘述中錯誤的是()A．該試驗(yàn)證明白植物細(xì)胞具有全能性B．在此過程必需確保無菌操作C．韌皮部細(xì)胞通過減數(shù)分裂增加數(shù)目D．此種生殖產(chǎn)生的后代能保持親本的性狀C[該試驗(yàn)是利用胡蘿卜的體細(xì)胞發(fā)育成完整的植株，因此體現(xiàn)了植物細(xì)胞的全能性；植物組織培育技術(shù)是一種無性繁殖方式，因此后代能保持親本的性狀；韌皮部細(xì)胞屬于體細(xì)胞，體細(xì)胞依靠有絲分裂增加細(xì)胞的數(shù)目。]5．某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A。探討人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培育基，勝利篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。試驗(yàn)的主要步驟如圖所示，請分析回答下列問題：(1)培育基中加入化合物A的目的是________，這種培育基屬于________培育基。(2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培育基中的________。試驗(yàn)須要振蕩培育，由此推想“目的菌”的代謝類型是________。(3)在上述試驗(yàn)操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是________________________________________________________________。(4)轉(zhuǎn)為固體培育基時(shí)，常采納平板劃線法進(jìn)行接種，此過程中所用的接種工具是__________，操作時(shí)采納________滅菌的方法。(5)如何確認(rèn)培育基是否合格？_________________________________________________________________________________________________________________________________。[解析]欲篩選可降解有機(jī)物A的微生物，需配制只以有機(jī)物A為唯一碳源的選擇培育基，以保障目的菌的生長，抑制非目的菌的生長繁殖；若需