中藥制劑的含量測(cè)定技術(shù)-薄層掃描法

薄層掃描法

一、儀器工作原理（一）薄層色譜掃描法的基本原理薄層色譜掃描法的測(cè)定原理是用長(zhǎng)寬可以調(diào)整的一束波長(zhǎng)、強(qiáng)度固定的光，對(duì)薄層板上的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，通過測(cè)量斑點(diǎn)或被斑點(diǎn)反射的光束的強(qiáng)度變化，求出待測(cè)組分含量。薄層掃描法可分為吸收薄層掃描法和薄層熒光掃描法。吸收薄層掃描測(cè)定法

是用可見-紫外光的單色光對(duì)薄層板上色譜斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，根據(jù)掃描獲得的吸光度隨展開距離變化的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行定量的方法。根據(jù)測(cè)光的方式不同，吸收掃描測(cè)定法又分為透射法和反射法兩種。透射法是測(cè)定光透過供試品斑點(diǎn)后的吸收情況進(jìn)行的定量方法。L-光源MC-單色器P-薄層板S-斑點(diǎn)

PD-檢測(cè)器透射法掃描

1.定義

薄層掃描法是供試品經(jīng)薄層分離后,用一束波長(zhǎng)、強(qiáng)度一定的紫外線或可見光對(duì)薄層板進(jìn)行掃描，通過測(cè)定薄層板上的斑點(diǎn)對(duì)光的吸收強(qiáng)度或斑點(diǎn)經(jīng)激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度,將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行定量的方法。

2.特點(diǎn)

設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、分離快速、靈敏度及分辨率高、顯色劑選擇范圍廣、適用于多組分及微量組分定量等。L-光源MC-單色器P-薄層板S-斑點(diǎn)

PD-檢測(cè)器反射法掃描

反射法是測(cè)定供試品斑點(diǎn)對(duì)光的反射情況進(jìn)行的定量方法。薄層熒光掃描法是通過儀器對(duì)供試品吸收可見-紫外光后發(fā)射的熒光強(qiáng)度掃描得到的吸收光譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)，求出供試品含量的方法。熒光反射法掃描L-光源MC-單色器P-薄層板S-斑點(diǎn)

PD-檢測(cè)器當(dāng)樣品量很少時(shí)，斑點(diǎn)中組分的濃度與熒光強(qiáng)度呈線性關(guān)系，可按公式計(jì)算：F=2.3K/IoECL或F=KC式F=2.3K/IoECL中：F為熒光強(qiáng)度；Io為入射光強(qiáng)度；C為濃度；E為吸收系數(shù)；K為常數(shù)（與熒光效率有關(guān)）；L為薄層厚度。

式F=KC中：C為濃度；K為2.3K/IoEL之積。在薄層熒光掃描法中，常用斑點(diǎn)熒光強(qiáng)度的積分值（色譜峰面積）代替公式中的F，斑點(diǎn)中組份的含量代替公式中的C進(jìn)行計(jì)算。（二）薄層掃描儀的構(gòu)造薄層掃描儀主要由主機(jī)（光源、單色器、供試品室、薄層板臺(tái)架、檢測(cè)器）及工作站組成。

1.光源

光源室能提供穩(wěn)定的、具有一定強(qiáng)度的所需波長(zhǎng)范圍內(nèi)的連續(xù)光源。包括紫外光源氘燈（200nm～370nm）；可見光源鎢燈（370nm～700nm）；熒光光源氙燈或汞燈（200nm～700nm），其中汞燈為線光源，可提供特征輻射光譜。2.單色光器

單色光器可以將光源發(fā)出的連續(xù)光分解為單色光。其主要由入射狹縫、出射狹縫、色散元件、平行光裝置（準(zhǔn)直鏡）等部分構(gòu)成。薄層掃描儀多采用光柵為色散元件。3.薄層板臺(tái)

包括薄層板臺(tái)架及驅(qū)動(dòng)裝置。4.檢測(cè)器

檢測(cè)器是用來檢測(cè)和放大由供試品斑點(diǎn)透射、反射或發(fā)出熒光強(qiáng)度的裝置。5.工作站

具有設(shè)定儀器參數(shù)、控制儀器工作條件和信號(hào)采集、處理計(jì)算和打印輸出等功能的裝置。二、含量測(cè)定1.原理

薄層掃描法含量測(cè)定有外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法兩種方法，《中國(guó)藥典》僅采用外標(biāo)法。2.類型

根據(jù)對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線性質(zhì)的不同，外標(biāo)法又分為外標(biāo)一點(diǎn)法和外標(biāo)兩點(diǎn)法。選擇檢測(cè)方法

含量計(jì)算薄層掃描發(fā)含量測(cè)定操作步驟溶液的制備薄層板點(diǎn)樣展開掃描掃描波長(zhǎng)對(duì)照品系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

測(cè)定方式

掃描方式

供試品三、含量計(jì)算

（1）外標(biāo)一點(diǎn)法：標(biāo)準(zhǔn)曲線通過原點(diǎn)。計(jì)算公式：C=F1·A

（2）外標(biāo)兩點(diǎn)法(隨行標(biāo)準(zhǔn)法)：標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過原點(diǎn)。計(jì)算公式：C=F1·A+F2

由C1=F1·A1+F2C2=F1·A2+F2得結(jié)果判斷

將測(cè)定結(jié)果與藥品標(biāo)準(zhǔn)中的各品種項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比，符合標(biāo)準(zhǔn)即為合格。注意事項(xiàng)

或四、案例

（一）靈寶護(hù)心丹的含量測(cè)定供試品溶液的制備對(duì)照品溶液的制備薄層掃描含量計(jì)算本品每1g含牛黃以膽酸（C24H40O5）計(jì)，不得少于2.5mg。靈寶護(hù)心丹的膽酸含量測(cè)定采用的是何種方法？供試品溶液是如何制備的？課堂互動(dòng)（二）六味地黃膠囊中酒萸肉的含量測(cè)定供試品溶液的制備對(duì)照品溶液的制備薄層掃描含量計(jì)算本品每粒含酒萸肉以熊果酸（