《透明質(zhì)酸鈉》行業(yè)標準

3QB/TXXXXX—XXXX透明質(zhì)酸鈉本文件規(guī)定了透明質(zhì)酸鈉的術(shù)語和定義、要求、試驗方法、檢驗規(guī)則和標志、包裝、運輸及貯存。本文件適用于以葡萄糖、酵母粉、蛋白胨等為原料，由馬鏈球菌獸疫亞種經(jīng)發(fā)酵生產(chǎn)而成的透明質(zhì)酸鈉的生產(chǎn)、檢驗和銷售。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成文本必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標志GB/T601化學試劑標準滴定溶液的制備GB/T602化學試劑雜質(zhì)測定用標準溶液的制備GB/T603-2002化學試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備GB4789.2食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落菌數(shù)測定GB4789.3-2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗大腸菌群計數(shù)GB4789.15食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數(shù)GB5009.3-2016食品安全國家標準食品中水分的測定GB5009.4-2016食品安全國家標準食品中灰分的測定GB5009.11食品安全國家標準食品中總砷及無機砷的測定GB5009.12食品安全國家標準食品中鉛的測定GB/T6682-2008分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB7718預(yù)包裝食品標簽通則3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。透明質(zhì)酸鈉sodiumhyaluronate由β-D-N-乙酰氨基葡萄糖和β-D-葡萄糖醛酸以β-1,3-糖苷鍵連接而成的雙糖結(jié)構(gòu)單元，再以β-1,4-糖苷鍵連成的一種鏈狀高分子酸性黏多糖透明質(zhì)酸的鈉鹽。4分子式、相對分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)式4QB/TXXXXX—XXXX4.1分子式：(C14H20NNaO11)n。4.2相對分子質(zhì)量：80200-4010000（按2021年國際原子量表）。4.3結(jié)構(gòu)式：5要求5.1.1紅外光譜符合透明質(zhì)酸鈉的紅外光譜特征。紅外光譜圖與透明質(zhì)酸鈉標準紅外光譜圖（圖1）一致。5.1.2鈉的鑒別符合鈉鹽的焰色反應(yīng)特征，即火焰呈鮮黃色。5.2感官要求產(chǎn)品為白色或類白色的粉末或顆粒，無正常視力可見雜質(zhì)。5.3理化指標應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1理化指標透明質(zhì)酸鈉含量（以干基計），g/100g≥5QB/TXXXXX—XXXX5.4安全指標應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2安全指標霉菌和酵母/（CFU/g）≤菌落總數(shù)/（CFU/g）≤大腸菌群/（MPN/g）≤6試驗方法6.1一般要求本文件所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和符合GB/T6682-2008規(guī)定的三級水。試驗中所用標準滴定溶液、雜質(zhì)測定用標準溶液、制劑及制品，在沒有注明其他要求時，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的規(guī)定制備。試驗中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。6.2鑒別6.2.1紅外吸收光譜采用溴化鉀壓片法，取經(jīng)105℃烘箱烘干2h后樣品，使用壓片裝置，在常壓或真空條件下加壓成型制成透明狀片劑，利用紅外光譜儀進行掃描，掃描范圍4000cm-1~400cm-1。對比樣品的紅外吸收光譜圖與標準品紅外吸收光譜圖。6.3.2焰色反應(yīng)用鹽酸潤濕鉑絲，在火焰上燃燒至無色，再蘸取少許0.1g/mL透明質(zhì)酸鈉溶液在火焰上燃燒，觀察火焰顏色。6.3感官取適量樣品，在自然光線下，用肉眼觀察樣品的顏色和形態(tài)。6.4透明質(zhì)酸鈉含量（以干基計）按附錄A或附錄B進行測定。6.5水分按GB5009.3-2016規(guī)定的第一法“直接干燥法”進行測定，溫度為103℃±2℃,干燥時間為4h。6.6灰分按GB5009.4-2016規(guī)定的第一法“總灰分”進行測定。6.7pH6QB/TXXXXX—XXXX6.7.1試劑和溶液6.7.1.1無二氧化碳水：按GB/T603-2002中4.1.1.1規(guī)定制備。6.7.2儀器和設(shè)備6.7.2.1pH計：精度為0.01。6.7.3測定步驟稱取0.5g透明質(zhì)酸鈉樣品（精確至0.01g）加入100mL無二氧化碳蒸餾水，磁力攪拌或40℃水浴加熱等方式溶解，用pH計測定溶液的pH。結(jié)果保留一位小數(shù)。6.8鉛（以Pb計）按GB5009.12規(guī)定的方法進行測定。6.9砷（以As計）按GB5009.11規(guī)定的方法進行測定。6.10霉菌和酵母按GB4789.15規(guī)定的方法進行測定。6.11菌落總數(shù)按GB4789.2規(guī)定的方法進行測定。6.12大腸菌群按GB4789.3-2016中規(guī)定的MPN法進行測定。7檢驗規(guī)則7.1一般要求產(chǎn)品按本文件規(guī)定進行檢驗，合格的產(chǎn)品附有生產(chǎn)廠質(zhì)量檢測部門簽發(fā)的質(zhì)量合格證明，方可出廠。7.2組批以同一次投料生產(chǎn)、同一規(guī)格、同一品種的均一質(zhì)量的產(chǎn)品為一批。7.3抽樣與留樣從整批產(chǎn)品中抽取樣品時，應(yīng)先從整批中抽取若干包裝單位，然后再從抽出的包裝單位中抽取均勻試樣。取樣數(shù)量按照表3產(chǎn)品抽樣表執(zhí)行。批量范圍（最小外包裝單位）100（含）~500（含）抽取樣本數(shù)（最小外包裝單位）24每個樣本抽取單位包裝數(shù)a（瓶、袋）117QB/TXXXXX—XXXXa單位包裝數(shù)指大包裝中的小包裝單位7.3.2取樣方法取樣時，用清潔、干燥的取樣工具插入包裝袋的三分之二。每袋取樣100g，將抽取的樣品迅速混勻，用四分法縮分，然后分裝于兩個清潔干燥的取樣袋中，密封。貼上標簽，一份用于檢測，另一份密封儲存?zhèn)洳椤?.4出廠檢驗出廠檢驗項目為感官、透明質(zhì)酸鈉含量、pH、水分、菌落總數(shù)、霉菌和酵母和大腸菌群。7.5型式檢驗型式檢驗項目為本文件要求中規(guī)定的全部項目。一般情況下，型式檢驗每6個月進行1次。有下列情況之一時，亦應(yīng)進行型式檢驗：a)原輔材料有較大變化時；b)更改關(guān)鍵工藝或設(shè)備時；c)新試制的產(chǎn)品或正常生產(chǎn)的產(chǎn)品停產(chǎn)3個月后，重新恢復(fù)生產(chǎn)時；d)出廠檢驗與上次型式檢驗結(jié)果有較大差異時；e)國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗機構(gòu)按有關(guān)規(guī)定需要抽檢時。7.6判定規(guī)則檢驗結(jié)果若發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品有一項不符合本文件要求時，應(yīng)重新從兩倍量包裝中抽取樣品進行復(fù)驗，以復(fù)檢結(jié)果為準。如仍有一項不合格，則判該批產(chǎn)品為不合格品。檢驗結(jié)果若發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品有兩項及以上不符合本文件要求時，則判該批產(chǎn)品為不合格品。8標志、包裝、運輸、貯存8.1包裝及標志8.1.1外包裝標志應(yīng)符合GB/T191的規(guī)定。預(yù)包裝產(chǎn)品標簽應(yīng)符合GB7718的規(guī)定。對有特殊要求的包裝及標志，按需方要求進行包裝及標志。8.1.2應(yīng)采用符合相應(yīng)行業(yè)產(chǎn)品包裝要求的包裝材料，經(jīng)檢驗合格后方可使用。嚴格密封，以防產(chǎn)品吸潮和漏出。8.2運輸運輸工具應(yīng)清潔；禁止與有毒、有害、有腐蝕性和含有異味的物品混裝、混運，應(yīng)避免受潮、受壓、暴曬；裝卸時應(yīng)輕搬、輕放。8.3貯存產(chǎn)品應(yīng)貯存在干燥、通風的常溫倉庫內(nèi)，嚴禁與有毒有污染的物品或其他雜物混存。8QB/TXXXXX—XXXX（規(guī)范性）透明質(zhì)酸鈉含量分光光度計法透明質(zhì)酸中含有等量摩爾比的N-乙酰氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸，用硼砂作催化劑對透明質(zhì)酸鈉用硫酸進行酸解，可將葡萄糖醛酸分離出來。葡萄糖醛酸與咔唑反應(yīng)形成有機絡(luò)合物，該絡(luò)合物顯示特有的紫色，其吸光度和葡萄糖醛酸的濃度成正比。通過葡萄糖醛酸的含量可以確定透明質(zhì)酸鈉的含量。A.2試劑和溶液A.2.1標準品：D-葡萄糖醛酸，CAS6556-12-3，純度≥98%。A.2.2濃硫酸：優(yōu)級純。A.2.3咔唑。A.2.4硼砂。A.2.5無水乙醇。A.2.6咔唑乙醇溶液（0.1%vol）：稱取0.125g咔唑（精確至0.001g）溶于100mL無水乙醇中，置于棕色瓶中。4℃~8℃防爆冰箱保存，有效期2個月；或室溫下避光保存，有效期A.2.7D-葡萄糖醛酸標準溶液（0.2mg/mL精確稱取20mgD-葡萄糖醛酸標準品（需按實際純度折算，精確至0.0001g置100mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻備用。A.2.8硼砂-硫酸溶液（0.025mol/L）：稱取4.77g硼砂（精確至0.001g）溶于500mL濃硫酸中，保存于密封的玻璃細口瓶中備用。A.3儀器和設(shè)備A.3.1旋渦混合器。A.3.2分光光度計，可測定530nm波長下的吸光度。A.4標準曲線的繪制分別量取葡萄醛酸標準溶液（A.2.7）0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL，置于濃度的標準品溶液。取6只具塞刻度試管分別加入不同濃度的標準品溶液各1.0mL，之后分別加入硼砂硫酸液5.0mL，置冰浴中冷卻15min。先輕輕振搖，再用旋渦混合器充分混勻。將試管置沸水中加熱10min，取出再置于冰水浴或流水中冷卻至室溫。分別加入咔唑溶液(A.2.6）0.2mL于冷卻后的試管中，混勻，沸水浴中再加熱15min后，冷卻至室溫。用10mm比色皿于530nm處測定吸光值，以吸光值為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。A.5分析步驟A.5.1稱取透明質(zhì)酸鈉樣品約0.1g（精確至0.0001g）于具塞錐形瓶中，加水至100g（w1，精確至0.01g磁力攪拌至充分溶解。再稱取上述溶液約4.0g（w2，精確至0.01g）置50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。9QB/TXXXXX—XXXXA.5.2吸取lmL樣品溶液，加入5mL硼砂硫酸液，置冰浴中冷卻15min。先輕輕振搖，再用旋渦混合器充分混勻。將試管置沸水中加熱10min，再置于冰水浴或流水中冷卻至室溫。分別加入0.2mL咔唑試液，混勻，沸水浴中再加熱15min，之后冷卻至室溫。以lcm比色皿用分光光度計于530nm處測定吸光度。A.6計算透明質(zhì)酸鈉含量（以干基計）按公式（1）計算。X2=..................................................(1)式中：X2——樣品中透明質(zhì)酸鈉含量（以干基計），單位為克每百克（g/100g）；c——根據(jù)樣品的吸光度，從標準曲線上查出相應(yīng)的葡萄醛酸濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；w1——樣品溶液的質(zhì)量，單位為克（g10-6——微克和克的轉(zhuǎn)換系數(shù)；V——樣品定容的體積，單位為毫升(mL)；100——克和百克的轉(zhuǎn)換系數(shù)；401.3——透明質(zhì)酸鈉雙糖結(jié)構(gòu)單元的分子量；w2——移取樣品溶液的質(zhì)量，單位為克（gm——樣品質(zhì)量，單位為克(g)；w3——樣品的水分，單位為克每百克（g/100g194.1——D-葡萄糖醛酸的分子量。結(jié)果保留至1位小數(shù)。A.7精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的2%。QB/TXXXXX—XXXX（規(guī)范性）透明質(zhì)酸鈉含量高效液相色譜法透明質(zhì)酸酶可作用于透明質(zhì)酸鈉的β-1,4-糖苷鍵，使透明質(zhì)酸鈉水解產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖-葡萄糖醛酸雙糖，利用高效液相色譜法測定N-乙酰氨基葡萄糖-葡萄糖醛酸雙糖產(chǎn)物的含量。以透明質(zhì)酸鈉的濃度為橫坐標，透明質(zhì)酸鈉水解生成的N-乙酰氨基葡萄糖-葡萄醛酸雙糖峰面積為縱坐標繪制標準曲線。通過水解生成的N-乙酰氨基葡萄糖-葡萄醛酸雙糖峰面積可計算樣品中透明質(zhì)酸鈉的含量。B.2試劑和耗材B.2.1透明質(zhì)酸鈉對照品（CAS：9067-32-7，純度≥99%）B.2.2透明質(zhì)酸酶（酶活≥4000IU/mL）B.2.3二水合磷酸二氫鈉NaH2PO4?2H2OB.2.4十二水合磷酸氫二鈉Na2HPO4?12H2OB.2.5磷酸H3PO4B.2.6磷酸鹽緩沖溶液（0.2mol/L，pH6.0稱取27.4g二水合磷酸二氫鈉（B.2.3）和8.8g十二水合磷酸氫二鈉（B.2.4）于1000mL燒杯中，用水溶解后轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶中，用1mol/L磷酸溶液或1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為6.0，加水定容，并搖勻。B.2.7透明質(zhì)酸鈉對照品溶液（1.0mg/mL稱取50mg透明質(zhì)酸鈉對照品（需按實際純度折算，精確至0.1mg）于容量瓶中，加入40mL磷酸鹽緩沖溶液溶解，超聲至充分溶解后，磷酸鹽緩沖溶液定容并搖勻。B.2.8透明質(zhì)酸酶溶液（1000IU/mL）：移取適量透明質(zhì)酸酶（B.2.2）于10mL容量瓶中，磷酸鹽緩沖液溶解并定容。現(xiàn)用現(xiàn)配。B.2.9流動相（1%磷酸溶液）：移取10.0mL磷酸（B.2.5）于800mL水中，混勻后轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶中，加水定容并混勻。B.3儀器與設(shè)備B.3.1高效液相色譜，配有紫外檢測器。QB/TXXXXX—XXXXB.3.2色譜柱：磺化交聯(lián)苯乙烯二乙烯基苯共聚物強陽離子交換色譜柱（300mm×8mm），或其他等效色譜柱。B.3.3參考色譜條件：流速：0.6mL/min；進樣量：20μL；柱溫：40℃;檢測波長：232nm。B.4分析步驟B.4.1標準曲線的繪制分別移取透明質(zhì)酸鈉對照品溶液0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL于15mL具塞刻度試管中，加入磷酸鹽緩沖溶液（B.2.6）至9mL，然后加入1mL透明質(zhì)酸酶（B.2.8混勻，37℃~42℃水浴中酶解1h。沸水浴2min，終止反應(yīng)。冷卻至室溫后，用0.22μm濾膜過濾，按B.3.3所述色譜條件進行分析，記錄峰面積。對照品溶液濃度分別為0.005mg/mL、0.010mg/mL、0.020mg/mL、0.050mg/mL、0.100mg/m