血液等體液標本的細菌學檢驗鮑曼不動桿菌

血液等體液標本的細菌學檢驗鮑曼不動桿菌二、實驗器材和試劑器材:酒精燈、火柴、取菌環(huán)、載玻片、普通光學顯微鏡、血平板試劑:3%過氧化氫、氧化酶試劑、革蘭染色液、生理鹽水、生化管藥敏紙片:哌拉西林/她唑巴坦PIP/TA、替卡西林+克拉維酸TIC/CA、頭孢她啶CAZ、頭孢吡肟FEP、頭孢噻肟CTX、頭孢曲松CRO、阿米卡星AN、妥布霉素TM、美羅培南MPN、環(huán)丙沙星CIP三、實驗內(nèi)容(一)菌落觀察(二)革蘭染色法(三)氧化酶試驗(四)接種生化管(五)菌種得綜合判斷四、實驗步驟1、標本采集菌血癥患者病原菌就是周期性出現(xiàn)在血液中,盡管臨床癥狀可能很嚴重,但患者血液中病原菌濃度水平相當?shù)?因此要求臨床多次采血液標本進行肉湯增菌培養(yǎng),但24小時內(nèi)一般不超過3次。懷疑為菌血癥得患者,原則上應在抗菌藥物使用前采取,對已開始抗菌藥物治療得患者可在下次給藥前采取,標本大多由肘靜脈采取,多部位采集血液標本也可增加陽性率。標本采集注意事項:

采血部位得皮膚消毒采用三步消毒法:即先用70%酒精擦拭皮膚,再用碘酒消毒,然后用70%酒精脫碘。采集得血液標本應分別注入硫酸鎂葡萄糖肉湯(需氧培養(yǎng))和硫乙醇酸鈉肉湯(厭氧培養(yǎng))培養(yǎng)瓶中。硫酸鎂葡萄糖肉湯中和多種抗生素,硫乙醇酸鈉肉湯含有硫乙醇酸鈉、葡萄糖等還原劑吸收其中得氧,為厭氧菌提供較低得氧化還原電位。血液與培養(yǎng)基得比例應為1:5—1:10兒童嬰幼兒一般1-5ml成人一般10ml3、常見致病菌檢驗及報告方式(1)將血液細菌培養(yǎng)瓶置35度孵育,每日觀察一次,連續(xù)觀察至第七天。注意觀察血液細菌培養(yǎng)瓶得變化。(2)如懷疑血液細菌培養(yǎng)瓶中有細菌生長,用無菌技術取瓶內(nèi)液體進行涂片,革蘭染色檢查。如發(fā)現(xiàn)細菌,根據(jù)細菌得染色性及形態(tài)特征發(fā)出初步報告(電話通知主管醫(yī)生)。(3)根據(jù)涂片結果選擇相應得抗菌藥物,直接從血培養(yǎng)瓶抽取適量液體做初步藥敏試驗,并于18—24小時后報告初步藥敏結果。(4)如有發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液渾濁、溶血、綠色色素、表面菌膜生長、膠凍狀凝固或細胞層顆粒狀生長,均為細菌生長現(xiàn)象。用無菌技術取瓶內(nèi)液體接種固體培養(yǎng)基。包括需氧培養(yǎng)、真菌培養(yǎng)及厭氧培養(yǎng)。(5)對細菌菌落涂片、革蘭染色,觀察細菌形態(tài)及染色性。革蘭陰性桿菌:進行氧化酶試驗并接種KIA培養(yǎng)基、O/F試驗、生化鑒定、血清學鑒定、藥敏試驗。革蘭陽性球菌:葡萄串樣或散在存在,觸酶試驗陽性,初步判斷為葡萄球菌;觸酶陰性鏈狀或散在排列初步判斷為鏈球菌屬或腸球菌屬,作生化鑒定、血清學鑒定、藥敏試驗。血液標本中常見得細菌革蘭陽性球菌:金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、A群、B群鏈球菌、草綠色鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌、厭氧鏈球菌、革蘭陽性桿菌:產(chǎn)單核李斯特菌、炭疽芽胞桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌。革蘭陰性球菌:腦膜炎奈瑟菌、卡她布蘭漢菌。革蘭陰性桿菌:大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、氣單胞菌等。(6)報告方式在增菌過程中培養(yǎng)瓶中懷疑有細菌生長,經(jīng)涂片、革蘭染色證實,可報告“疑有XX細菌生長”;經(jīng)分離培養(yǎng)、生化試驗及血清學鑒定后,可報告“血液細菌培養(yǎng)X天,有XX細菌生長”,并同時報告體外抗菌藥物敏感試驗結果;如果增菌培養(yǎng)至七天,培養(yǎng)瓶中仍無細菌生跡象,經(jīng)盲目傳代證實無細菌生長,可報告“血液細菌培養(yǎng)七天,無細菌生長”。注意事項1、一般應在抗菌藥物使用前采集血液標本,如果患者已用過抗菌藥物或情況不明時,應使用硫酸鎂肉湯增菌液。2、對疑為波浪熱、亞急性細菌性心內(nèi)膜炎得患者,培養(yǎng)瓶應孵育至第四周,盲目接種后無菌生長,方可報告陰性。12大家應該也有點累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流注意事項3、為了盡快發(fā)現(xiàn)病原菌,在7天得孵育期內(nèi)應至少盲目接種兩次,第一次在標本孵育12—18小時后。在以后得孵育期中應每天觀察瓶內(nèi)得變化,如有細菌生長現(xiàn)象,需及時接種和涂片染色觀察報告。7天孵育后仍無細菌生長跡象,進行盲目接種。每次接種羊血平板和巧克力瓊脂平板,分別進行需氧和厭氧培養(yǎng)。革蘭染色提示真菌生長,應移種至沙氏平板,L型菌須轉種高滲平板。注意事項4、血液細菌學培養(yǎng)就是診斷菌血癥和敗血癥得病原學依據(jù),但血液標本在采集、接種、運送過程存在潛在污染得可能,尤其在靜脈穿刺術中,因此皮膚消毒應嚴格按規(guī)程操作。5、一般菌血癥由一種細菌引起,但約5%-10%得菌血癥患者就是多菌性菌血癥。自動血培養(yǎng)儀原理:自動血培養(yǎng)檢測系統(tǒng)就是檢測細菌和真菌生長時所釋放得二氧化碳來作為血液中有無細菌得指標。檢測技術有放射標記、顏色變化(CO2感受器)、熒光技術和壓力檢測等。自動血培養(yǎng)儀集培養(yǎng)、震蕩和檢測一體化。接種血液標本后,血培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)、震蕩得同時,由檢測系統(tǒng)自動連續(xù)監(jiān)測瓶中CO2得產(chǎn)生情況,所測得信號傳送至電腦分析,繪制出每個瓶中微生物得生長曲線。一旦出現(xiàn)陽性結果,電腦自動報警,指示陽性瓶得位置。血培養(yǎng)瓶厭氧瓶成人需氧瓶小兒需氧瓶全自動血培養(yǎng)儀自動血培養(yǎng)儀特點自動血培養(yǎng)儀除了適用血培養(yǎng)外,還可以用于其她無菌部位標本如腦脊液、胸腹水、和關節(jié)液等得細菌和真菌培養(yǎng)得檢測。自動血培養(yǎng)儀與手工系統(tǒng)相比,提高了陽性檢出率,靈敏度高,操作簡單,能節(jié)省人力,縮短檢驗周期,一般培養(yǎng)5天。但儀器、設備和消耗品得成本較高。鮑曼不動桿菌鮑曼不動桿菌(Acinetobacterbaumannii)為非發(fā)