T-CWEC 37-2023 著生藻類(lèi)監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范

ICS13.060.10CCSZ06T/CWEC37—2023著生藻類(lèi)監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范Technicalcodeformonitoringofperiphyticalgae2023-01-12發(fā)布2023-02-01實(shí)施中國(guó)水利企業(yè)協(xié)會(huì)發(fā)布Ⅰ中國(guó)水利企業(yè)協(xié)會(huì)關(guān)于發(fā)布《著生藻類(lèi)監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范》《水利信息系統(tǒng)運(yùn)維管理軟件測(cè)評(píng)規(guī)程》等2個(gè)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的公告2023年第1號(hào)根據(jù)中國(guó)水利企業(yè)協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制定計(jì)劃,《著生藻類(lèi)監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范》《水利信息系統(tǒng)運(yùn)維管理軟件測(cè)評(píng)規(guī)程》等2個(gè)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)已完成編制,經(jīng)組織審查,現(xiàn)批準(zhǔn)發(fā)布,自2023年2月1日施行。序號(hào)標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)批準(zhǔn)日期實(shí)施日期1著生藻類(lèi)監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范T/CWEC37—20232023.01.122023.02.012水利信息系統(tǒng)運(yùn)維管理軟件測(cè)評(píng)規(guī)程T/CWEC38—20232023.01.122023.02.01中國(guó)水利企業(yè)協(xié)會(huì)2023年1月12日ⅢT/CWEC37—2023前言 Ⅴ1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14監(jiān)測(cè)準(zhǔn)備 14.1監(jiān)測(cè)人員要求 14.2前期調(diào)研 24.3器具及試劑 24.4監(jiān)測(cè)頻率與采樣時(shí)間 25采樣點(diǎn) 25.1采樣點(diǎn)布設(shè)原則 25.2河流采樣點(diǎn)選擇方法 25.3湖泊(水庫(kù))采樣點(diǎn)選擇方法 36樣品采集與保存 36.1采樣基質(zhì)的選擇 36.2樣品采集 46.3樣品保存及運(yùn)輸 46.4現(xiàn)場(chǎng)信息記錄 47樣品處理 47.1非硅藻樣品處理 47.2硅藻樣品處理 58實(shí)驗(yàn)室分析 58.1種類(lèi)鑒定 58.2葉綠素a分析 68.3無(wú)灰干重分析 68.4密度計(jì)算 69資料整理 710質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 810.1樣品采集 810.2樣品保存及運(yùn)輸 810.3樣品處理及分析 810.4人員比對(duì) 8附錄A(資料性)著生藻類(lèi)采樣記錄表樣 9附錄B(資料性)著生藻類(lèi)定性鑒定結(jié)果表樣 10附錄C(資料性)著生藻類(lèi)定量檢測(cè)結(jié)果表樣 11ⅤT/CWEC37—2023本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本標(biāo)準(zhǔn)的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)水利企業(yè)協(xié)會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中國(guó)水利水電科學(xué)研究院、水利部中國(guó)科學(xué)院水工程生態(tài)研究所、中國(guó)南水北調(diào)集團(tuán)中線有限公司、中國(guó)長(zhǎng)江三峽集團(tuán)有限公司、生態(tài)環(huán)境部珠江流域南海海域生態(tài)環(huán)境監(jiān)督管理局生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)與科學(xué)研究中心、江西省水利科學(xué)院、江西省水文監(jiān)測(cè)中心、南昌工程學(xué)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:余楊、葛金金、馬沛明、渠曉東、黃迎艷、陳威、王樹(shù)磊、張敏、趙汗青、霍煒潔、張海萍、解瑩、付莎莎、鄧燕青、計(jì)勇、楊恒。本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。1T/CWEC37—2023著生藻類(lèi)監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了內(nèi)陸水域著生藻類(lèi)的樣品采集、保存、處理、分析和質(zhì)量控制的技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于江河、湖泊和水庫(kù)等內(nèi)陸水域著生藻類(lèi)的監(jiān)測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本標(biāo)準(zhǔn)必不可少的條款。其中,注明日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn);不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本標(biāo)準(zhǔn)。SL88水質(zhì)葉綠素的測(cè)定分光光度法SL219水環(huán)境監(jiān)測(cè)規(guī)范3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1著生藻類(lèi)periphyticalgae附著生長(zhǎng)在浸沒(méi)于水中的各種基質(zhì)表面的藻類(lèi)。3.2著生藻類(lèi)密度densityofperiphyticalgae單位面積基質(zhì)表面著生藻類(lèi)的數(shù)量,以單位面積內(nèi)細(xì)胞數(shù)表示。3.3優(yōu)勢(shì)種dominantspeciesofperiphyticalgae群落中數(shù)量或生物量占優(yōu)勢(shì)地位,且優(yōu)勢(shì)度指數(shù)大于0.02的物種。3.4基質(zhì)substratum浸沒(méi)在水中具有一定表面積可供生物附著生長(zhǎng)的物體。注:基質(zhì)一般分為天然基質(zhì)(如石頭、植物等)和人工基質(zhì)兩類(lèi)。3.5硅藻diatom一類(lèi)具有硅質(zhì)化細(xì)胞壁(硅質(zhì)殼)的真核藻類(lèi),細(xì)胞單生或由多個(gè)細(xì)胞連成形態(tài)多樣的群體。3.6殼面valve單個(gè)硅藻細(xì)胞壁包含上、下兩個(gè)套合的半片,半片中被殼套包圍的部分為殼面。3.7無(wú)灰干重ashfreedryweight(AFDW)即干有機(jī)質(zhì),其值為干重減去灰分。4監(jiān)測(cè)準(zhǔn)備4.1監(jiān)測(cè)人員要求監(jiān)測(cè)人員要求如下:2T/CWEC37—2023a)采樣人員應(yīng)提前熟悉監(jiān)測(cè)區(qū)域著生藻類(lèi)生長(zhǎng)和時(shí)空分布狀況,便于樣品采集。b)實(shí)驗(yàn)室分析人員應(yīng)經(jīng)過(guò)系統(tǒng)學(xué)習(xí)與培訓(xùn),具備著生藻類(lèi)分類(lèi)鑒定能力。4.2前期調(diào)研可通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)踏勘、文獻(xiàn)檢索、資料查詢(xún)和專(zhuān)家咨詢(xún)等方法,掌握監(jiān)測(cè)區(qū)域下列信息:a)地理信息:GIS圖件、水系圖、地形地貌數(shù)據(jù)。b)水文信息:水位、水量、流速、流向、換水周期(湖庫(kù))及歷史水情變化。c)氣象信息:光照、氣溫、水溫、降水量、蒸發(fā)量等。d)水質(zhì)信息:水質(zhì)監(jiān)測(cè)斷面分布、歷史水質(zhì)狀況、主要污染物等。e)生境信息:水域沿岸帶土地利用類(lèi)型、人類(lèi)活動(dòng)干擾特征等。f)工程信息:涉水工程分布、調(diào)度運(yùn)行方式等。4.3器具及試劑4.3.1防護(hù)工具:救生衣、防水靴、手套、探桿以及創(chuàng)可貼等。4.3.2測(cè)量?jī)x器:溫度計(jì)、酸度計(jì)、溶解氧測(cè)定儀、GPS、測(cè)距儀以及透明度盤(pán)等。4.3.3樣品收集及固定工具:剪刀、手術(shù)刀、毛刷、長(zhǎng)柄刮刀(附帶篩絹網(wǎng)兜)、水桶、鑷子、鋼卷尺、米尺、樣品瓶、固定液、洗瓶等;硅藻計(jì)、聚酯薄膜采樣器(規(guī)格:4cm×40cm,一端打孔,拴繩)。4.3.4照相器具:照相機(jī)、攝像機(jī)等。4.3.5記錄工具:記錄紙、防水筆等。4.3.6前處理設(shè)備:微波消解儀、干燥器、烘箱、馬弗爐及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室常用材料。4.3.7分析器具:光學(xué)生物顯微鏡(配備10×、20×、40×、100×物鏡及10×、15×目鏡,建議配備DIC微分干涉顯微鏡)、電子顯微鏡(掃描電子顯微鏡或透射電子顯微鏡)、生物計(jì)數(shù)框(0.1mL)、紫外分光光度計(jì)、水浴鍋。4.3.8主要試劑:魯哥氏液(60g碘化鉀溶于少量水中,待完全溶解后,加入40g碘,搖動(dòng)至碘完全溶解,加蒸餾水定容到1000mL,貯存于磨口棕色試劑瓶中)、甲醛溶液(濃度為37%~40%)、濃硫酸(濃度為98%)、濃硝酸(濃度為65%~68%)、過(guò)氧化氫溶液(濃度為30%)、重鉻酸鉀飽和溶液、鹽酸溶液(濃度為37%)、無(wú)水乙醇溶液、Naphrax樹(shù)膠。4.4監(jiān)測(cè)頻率與采樣時(shí)間4.4.1著生藻類(lèi)常規(guī)監(jiān)測(cè)頻次宜每年4次,分別在春季、夏季、秋季、冬季監(jiān)測(cè),時(shí)間間隔宜保持一致;水溫季節(jié)變化不顯著的河流可減少監(jiān)測(cè)頻次,每年應(yīng)不少于2次,宜選擇在春季和秋季監(jiān)測(cè)。4.4.2著生藻類(lèi)的監(jiān)測(cè)采樣宜與水質(zhì)監(jiān)測(cè)采樣同步進(jìn)行。4.4.3應(yīng)避免在洪水期采樣,豐水期開(kāi)展監(jiān)測(cè)時(shí),應(yīng)在水位至少穩(wěn)定15天后采樣。4.4.4應(yīng)急監(jiān)測(cè)宜在突發(fā)環(huán)境事件發(fā)生至少14天后采樣。5采樣點(diǎn)5.1采樣點(diǎn)布設(shè)原則5.1.1應(yīng)與現(xiàn)有的水質(zhì)、水文和水生生物監(jiān)測(cè)點(diǎn)結(jié)合。5.1.2布設(shè)范圍和密度應(yīng)根據(jù)各監(jiān)測(cè)水體類(lèi)型及監(jiān)測(cè)目的確定。5.1.3應(yīng)選擇監(jiān)測(cè)水域水質(zhì)、生境和人類(lèi)活動(dòng)等方面具有代表性的點(diǎn)位。5.2河流采樣點(diǎn)選擇方法5.2.1應(yīng)根據(jù)監(jiān)測(cè)目的,結(jié)合河流特點(diǎn)選擇有代表性的采樣點(diǎn)。常規(guī)例行監(jiān)測(cè)的采樣點(diǎn)應(yīng)覆蓋整個(gè)3T/CWEC37—2023監(jiān)測(cè)水域范圍內(nèi)水文、地貌、生境、水質(zhì)和生物群落等特征差異明顯的各個(gè)河段,其采樣點(diǎn)位置和數(shù)量的選擇應(yīng)依據(jù)SL219的相關(guān)要求確定。評(píng)估人類(lèi)活動(dòng)或者污染事故影響的監(jiān)測(cè),應(yīng)在干擾發(fā)生區(qū)域的上游設(shè)置對(duì)照區(qū),在干擾發(fā)生區(qū)域及干擾可能影響的下游區(qū)域,依據(jù)其水域特征及污染特征布設(shè)若干采樣點(diǎn)。5.2.2對(duì)溪流(可涉水河流)的監(jiān)測(cè),以采樣點(diǎn)為中心,其上、下游各100m的范圍內(nèi)為采樣區(qū)域;對(duì)不可涉水河流的監(jiān)測(cè),以采樣點(diǎn)為中心,其上、下游各500m或者上、下游各20倍河寬的范圍設(shè)為采樣區(qū)域,并對(duì)區(qū)域內(nèi)左、右岸分別進(jìn)行采樣。5.2.3在采樣區(qū)域內(nèi)應(yīng)選擇滿(mǎn)足下列條件的微生境進(jìn)行采樣:a)光照條件良好,避免重、陰影區(qū)域。如無(wú)法避免,應(yīng)記錄說(shuō)明。b)水深50cm以?xún)?nèi)的河濱帶區(qū)域。c)流速大于20cm/s,避免基質(zhì)上覆蓋淤泥和其他碎屑。5.3湖泊(水庫(kù))采樣點(diǎn)選擇方法5.3.1應(yīng)根據(jù)監(jiān)測(cè)目的,結(jié)合湖泊(水庫(kù))形態(tài)、水文、生境、水質(zhì)和生物群落等特征,確定采樣點(diǎn)。采樣點(diǎn)位置和數(shù)量的選擇應(yīng)依據(jù)SL219中湖(庫(kù))岸帶監(jiān)測(cè)點(diǎn)位布設(shè)的相關(guān)要求來(lái)確定。采樣點(diǎn)數(shù)量可根據(jù)前期監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化調(diào)整。5.3.2湖泊(水庫(kù))中的采樣點(diǎn)應(yīng)布設(shè)在沿岸淺水區(qū),以采樣點(diǎn)為中心,其左右各100m的范圍內(nèi)為采樣區(qū)域。5.3.3河道型或狹長(zhǎng)型湖泊(水庫(kù))采樣點(diǎn)選擇可執(zhí)行5.2的規(guī)定。6樣品采集與保存6.1采樣基質(zhì)的選擇6.1.1基質(zhì)選擇原則基質(zhì)選擇原則如下:a)常規(guī)監(jiān)測(cè)建議采用單一生境法,即每個(gè)采樣點(diǎn)位盡量采集相同基質(zhì)類(lèi)型的樣品,保證各點(diǎn)位間監(jiān)測(cè)結(jié)果可比性。也可根據(jù)監(jiān)測(cè)目的,采用多生境法,即在同一采樣點(diǎn)采集各種生境和基質(zhì)上的樣品,混合后用以代表該采樣點(diǎn)的著生藻類(lèi)群落。b)優(yōu)先選擇天然基質(zhì)。當(dāng)調(diào)查區(qū)域無(wú)法采集到符合條件的天然基質(zhì)時(shí),可選擇投放人工基質(zhì)。6.1.2天然基質(zhì)的選擇天然基質(zhì)的選擇要求如下:a)在保證安全的前提下,優(yōu)先選擇河床或湖泊(水庫(kù))沿岸帶區(qū)域的基質(zhì)。隨機(jī)擇取5~10塊處于自然狀態(tài)下、直徑為60~250mm可移動(dòng)硬質(zhì)基質(zhì)(鵝卵石或石塊),采樣總面積(S)至少應(yīng)達(dá)到100cm2。若未達(dá)到上述面積要求,應(yīng)記錄采集著生藻類(lèi)基質(zhì)的數(shù)量及面積缺少的原因。b)若監(jiān)測(cè)區(qū)域無(wú)天然可移動(dòng)基質(zhì)或其數(shù)量不能達(dá)到6.1.2a)要求,可選擇碼頭、堤岸或橋墩等穩(wěn)定的人造基質(zhì)的水下垂直面進(jìn)行采樣,也可選擇其他的可移動(dòng)硬質(zhì)基質(zhì)(瓷磚、磚塊或人造石板),采樣總面積(S)至少應(yīng)達(dá)到100cm2。c)若采樣區(qū)域無(wú)法滿(mǎn)足6.1.2a)和滿(mǎn)足6.1.2b)中所述要求,可選擇在沉水植物上采集著生藻類(lèi),并盡可能覆蓋采樣區(qū)域內(nèi)分布的主要沉水植物種類(lèi)。d)所選擇的基質(zhì)應(yīng)浸沒(méi)在水中14天以上,在浸沒(méi)期間不應(yīng)露出水面。4T/CWEC37—20236.1.3人工基質(zhì)的投放人工基質(zhì)應(yīng)提前14天以上放置在監(jiān)測(cè)水域,放置地點(diǎn)應(yīng)避開(kāi)急流、漩渦和短期內(nèi)水位變化較大水域,應(yīng)避開(kāi)河流航道。放置時(shí)應(yīng)將其固定在水面下0.3m處,宜將其與水下構(gòu)筑物相連。每個(gè)采樣區(qū)域應(yīng)放置不少于3個(gè)人工基質(zhì)。6.2樣品采集6.2.1可移動(dòng)的天然基質(zhì)上的樣品采集操作步驟如下:a)將基質(zhì)從水中取出并放置于托盤(pán),盡可能避免對(duì)基質(zhì)表面造成擾動(dòng)。在單塊基質(zhì)表面量取10cm2以上的取樣區(qū)域,使用刀片或刷子將取樣區(qū)著生藻類(lèi)刮下,邊刮邊用洗瓶沖洗基質(zhì)表面,并用搪瓷盤(pán)收集獲得的混合液,完成后將其轉(zhuǎn)入樣品瓶中,在樣品瓶表面貼好標(biāo)簽。b)若無(wú)法獲取硬質(zhì)基質(zhì),可剪取3~5根高等水生植物的水下莖段,清除附著在其表面的污染物后,將其放入樣品瓶中,加蒸餾水充分振蕩使著生藻類(lèi)脫落后將高等水生植物水下莖段從瓶中取出。也可使用軟刷刷取或通過(guò)超聲波振蕩使著生藻類(lèi)脫落。采用植物水下莖段提取著生藻類(lèi),應(yīng)測(cè)量該莖段長(zhǎng)度和植物莖直徑,計(jì)算采樣總面積(S),做好記錄。c)同一采樣點(diǎn)不同基質(zhì)上采集的樣品應(yīng)混合為一個(gè)樣品,在樣品瓶表面貼好標(biāo)簽。6.2.2不可移動(dòng)的天然基質(zhì)上的樣品采集操作步驟如下:a)采樣前先用刮刀攪動(dòng)采樣面附近水體,以清除松散附著的表面污染物(如泥沙、有機(jī)碎屑和死亡生物個(gè)體)。b)再用刮刀反復(fù)刮擦在水深0.3m處的基質(zhì)表面,將所刮下的附著物撈入篩絹網(wǎng)兜。c)樣品采集完成后,應(yīng)用洗瓶沖洗黏附在刀刃上和網(wǎng)兜內(nèi)的附著物,并將托盤(pán)中的混合液全部裝入樣品瓶中,在樣品瓶表面貼好標(biāo)簽。6.2.3利用人工基質(zhì)進(jìn)行監(jiān)測(cè)時(shí),將回收的人工基質(zhì)按照6.2.1a)進(jìn)行樣品采集。6.3樣品保存及運(yùn)輸6.3.1用于著生藻類(lèi)葉綠素a含量或無(wú)灰干重分析的樣品,應(yīng)在現(xiàn)場(chǎng)定容至50~100mL(V)并充分混勻,樣品應(yīng)在遮光、0℃冷藏狀態(tài)下保存,并于采樣后24h內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室。樣品中若無(wú)大型的絲狀藻類(lèi),量取5~10mL(V)樣品,使用孔徑為0.45μm的玻璃纖維濾膜抽濾,抽濾后將濾膜對(duì)半折疊放入封口袋或離心管中,貼好標(biāo)簽,用于下一步分析檢測(cè)。樣品中若有大型的絲狀藻類(lèi),應(yīng)先用攪拌機(jī)打勻后再進(jìn)行抽濾。6.3.2用于著生藻類(lèi)種類(lèi)鑒定和密度計(jì)算的樣品,若無(wú)法在采樣后24h內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室處理,應(yīng)在采樣現(xiàn)場(chǎng)按1%~1.5%體積比,使用魯哥氏液固定后帶回實(shí)驗(yàn)室。6.4現(xiàn)場(chǎng)信息記錄6.4.1與著生藻類(lèi)監(jiān)測(cè)相關(guān)的現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試項(xiàng)目,如水深、水溫、pH值、透明度、溶解氧的測(cè)定依據(jù)SL219的規(guī)定進(jìn)行。同時(shí)記錄采樣點(diǎn)的生境信息,如經(jīng)緯度、高程、水域?qū)挾?、水域深度、底質(zhì)類(lèi)型、植物覆蓋度和陰影遮擋等情況,拍照記錄采樣點(diǎn)生境狀態(tài)。6.4.2采樣完成后應(yīng)填寫(xiě)著生藻類(lèi)采樣記錄表,見(jiàn)附錄A。7樣品處理7.1非硅藻樣品處理樣品置于筒形分液漏斗中,經(jīng)沉淀、濃縮后,定容至適宜體積(V1),宜為以30mL或50mL。5T/CWEC37—20237.2硅藻樣品處理7.2.1預(yù)處理預(yù)處理常用方法有以下三種:a)強(qiáng)酸法,適用于有機(jī)質(zhì)含量較多的樣品。其操作流程如下:1)通風(fēng)條件下,吸取7.1樣品1~2mL(V3)至10mL玻璃試管內(nèi),加入與樣品等體積的濃硫酸,于酒精燈上加熱至液體顏色發(fā)生變化,并持續(xù)產(chǎn)生棕色氣體。2)然后多次緩慢沿試管內(nèi)壁加入1~2滴濃硝酸,待反應(yīng)不再劇烈且不產(chǎn)生棕色氣體時(shí),加入與樣品等體積的濃硝酸,繼續(xù)加熱至液體透明。3)待樣品冷卻沉降后,小心移出試管上層形成的酸液,將底部剩余樣品轉(zhuǎn)移至離心管中以3000r/min轉(zhuǎn)速離心5min,然后吸出上層清液,向離心管中加入2~3滴重鉻酸鉀飽和溶液,使樣品氧化漂白,離心后吸出上層清液,加入蒸餾水清洗沉淀,再次離心,重復(fù)清洗4~5次,直至上清液呈中性。b)過(guò)氧化氫法,適用于有機(jī)質(zhì)含量較少的樣品。其操作流程如下:1)在通風(fēng)條件下,吸取7.1樣品5~10mL(V3)至玻璃試管內(nèi),加入20mL過(guò)氧化氫溶液后置于水浴鍋中(90±5)℃加熱1~3h,加熱完畢后取出。2)加入數(shù)滴鹽酸以去除多余過(guò)氧化氫和碳酸鹽,然后用去離子水沖洗試管內(nèi)壁,在通風(fēng)櫥中冷卻至室溫。3)將試管中所有物質(zhì)轉(zhuǎn)移至離心管中,以3000r/min轉(zhuǎn)速離心5min,去除上清液,加入去離子水洗滌沉淀,再次離心,直至上清液呈中性。c)微波消解法,適用于所有樣品。其操作流程如下:1)吸取7.1樣品10~15mL(V3)至離心管內(nèi),以3000r/min轉(zhuǎn)速離心5min,將離心管內(nèi)的沉淀物轉(zhuǎn)至消解管內(nèi)。2)在通風(fēng)條件下,向消解管內(nèi)加入10mL濃硝酸,后將消解管置于微波消解儀內(nèi),180℃消解2h。3)消解完成后,在通風(fēng)櫥內(nèi)將消解管開(kāi)啟冷卻至室溫,后將消解液轉(zhuǎn)移到玻璃試管中以3000r/min轉(zhuǎn)速離心5min后去除上清液,加入去離子水洗滌沉淀,多次離心,直至上清液呈中性。7.2.2硅藻懸浮液保存用移液器移除上清液,然后加入95%乙醇溶液定容至樣品初始體積(V4),貼上樣品標(biāo)簽保存。7.2.3永久封片制作永久封片制作步驟如下:a)搖勻7.2.2所得樣品,使用移液器迅速吸取40μL(V5)樣品,垂直滴在蓋玻片中央位置,樣品自動(dòng)均勻擴(kuò)散至整個(gè)蓋玻片表面,待乙醇揮發(fā)干燥,或放置于加熱板上加熱干燥。b)取樹(shù)膠溶液40μL,緩慢滴在載玻片中央位置,使用平口鑷子將已固定樣品的蓋玻片反蓋在樹(shù)膠溶液上,使樹(shù)膠溶液均勻擴(kuò)散至蓋玻片邊緣。如有氣泡,可使用鑷子按壓將氣泡擠出,或使用加熱板加熱去除氣泡。c)貼上包含樣品信息的標(biāo)簽并置于通風(fēng)處干燥2~3天。8實(shí)驗(yàn)室分析8.1種類(lèi)鑒定使用光學(xué)生物顯微鏡(放大倍數(shù)400~1000倍)對(duì)著生藻類(lèi)種類(lèi)進(jìn)行鑒定,其中著生藻類(lèi)優(yōu)勢(shì)種6T/CWEC37—2023應(yīng)鑒定到種。光學(xué)顯微鏡下形態(tài)特征難以鑒定的種類(lèi),可通過(guò)掃描電子顯微鏡或透射電子顯微鏡鑒定。8.2葉綠素a分析用90%丙酮萃取按6.3.1獲取的濾膜,在4℃避光靜置24h,按照SL88的規(guī)定,采用分光光度法測(cè)定濃縮樣品葉綠素a濃度ρ0。著生藻類(lèi)葉綠素a密度ρ按公式(1)計(jì)算:ρ=ρ0×……………式中:ρ—著生藻類(lèi)葉綠素a密度,mg/cm2;ρ0—濃縮樣品葉綠素a濃度,mg/mL;V—樣品濃縮體積,mL;S—采樣總面積,cm2。8.3無(wú)灰干重分析在105℃下烘干按6.3.1獲取的濾膜至恒重m1(精確至0.1mg),然后在500℃馬弗爐中繼續(xù)加熱氧化1h,最后將濾膜置于干燥器中冷卻至室溫,稱(chēng)量濾膜質(zhì)量m2(精確至0.1mg),無(wú)灰干重按公式(2)計(jì)算:AFDW=……式中:AFDW—無(wú)灰干重,mg/cm2;m1—濾膜和樣品105℃烘干后的質(zhì)量,mg;m2—濾膜和樣品500℃加熱氧化后的質(zhì)量,mg;v—過(guò)濾樣品體積,mL;V—樣品濃縮體積,mL;S—采樣總面積,cm2。8.4密度計(jì)算應(yīng)分別計(jì)算非硅藻和硅藻的密度并求和,即著生藻類(lèi)總密度。計(jì)算方法如下:a)非硅藻密度:充分混勻7.1所得濃縮樣品,吸取0.1mL樣品加入0.1mL(V2)計(jì)數(shù)框中,置于光學(xué)顯微鏡下鑒定種類(lèi)并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。視野內(nèi)宜含有10~20個(gè)藻細(xì)胞以利于計(jì)數(shù)和鑒定,可通過(guò)樣品稀釋或濃縮方式獲得適宜的視野內(nèi)細(xì)胞數(shù)。將細(xì)胞數(shù)換算為原基質(zhì)單位面積非硅藻細(xì)胞數(shù)量,按公式(3)計(jì)算:……………式中:N—單位面積非硅藻細(xì)胞數(shù),cells/cm2;V1—樣品定容體積,mL;L—藻類(lèi)計(jì)數(shù)框邊長(zhǎng),μm;n—實(shí)際計(jì)數(shù)所得非硅藻的細(xì)胞數(shù),cells;V2—計(jì)數(shù)框容積,mL;R—計(jì)數(shù)的行數(shù);H—視野直徑,μm;7T/CWEC37—2023S—采樣總面積,cm2。b)硅藻密度:在7.2獲得的永久封片中,計(jì)數(shù)200~300個(gè)硅藻細(xì)胞(2個(gè)分離的硅藻殼面折算成1個(gè)硅藻細(xì)胞),計(jì)算每個(gè)種類(lèi)的密度,以此分析群落組成。當(dāng)硅藻細(xì)胞損壞部分超過(guò)3/4以及空無(wú)紋飾時(shí)不計(jì)數(shù)。將硅藻細(xì)胞數(shù)換算為原基質(zhì)單位面積上硅藻細(xì)胞數(shù),按公式(4)計(jì)算:D=…………(4)式中:D—單位面積所有硅藻細(xì)胞數(shù),cells/cm2;V1—樣品定容體積,mL;V4—乙醇定容體積,mL;L—藻類(lèi)計(jì)數(shù)框邊長(zhǎng),μm;n—實(shí)際計(jì)數(shù)所得非硅藻的細(xì)胞數(shù),cells;V3—酸化樣品體積,mL;V5—制片樣品體積,mL;R—計(jì)數(shù)的行數(shù);H—視野直徑,μm;S—采樣總面積,cm2。9資料整理9.1著生藻類(lèi)監(jiān)測(cè)資料整理包括下列內(nèi)容:a)野外現(xiàn)場(chǎng)記錄數(shù)據(jù),填寫(xiě)著生藻類(lèi)采樣記錄表(見(jiàn)附錄A)。b)著生藻類(lèi)種類(lèi)組成數(shù)據(jù),填寫(xiě)著生藻類(lèi)定性鑒定結(jié)果表(見(jiàn)附錄B)。c)著生藻類(lèi)密度、葉綠素a含量和無(wú)灰干重檢測(cè)數(shù)據(jù),填寫(xiě)著生藻類(lèi)定量檢測(cè)結(jié)果表(見(jiàn)附錄C)。d)監(jiān)測(cè)過(guò)程中拍攝的采樣點(diǎn)生境、樣品采集時(shí)的影像資料。e)監(jiān)測(cè)區(qū)域的地理、水文、氣象、水質(zhì)、生境和工程信息。f)其他有保存價(jià)值的標(biāo)本資料。9.2應(yīng)按分類(lèi)系統(tǒng),列出監(jiān)測(cè)區(qū)域內(nèi)各樣點(diǎn)的著生藻類(lèi)種類(lèi)組成、資料,填寫(xiě)名錄表。9.3應(yīng)根據(jù)資料數(shù)據(jù),列出各采樣點(diǎn)著生藻類(lèi)密度,并列出所有優(yōu)勢(shì)種。9.4著生藻類(lèi)監(jiān)測(cè)影像資料數(shù)據(jù)應(yīng)符合下列要求:a)反映每個(gè)采樣點(diǎn)生境特征的照片至少2張。b)每個(gè)采樣點(diǎn)樣品照片1~2張。c)反映著生藻類(lèi)各種類(lèi)分類(lèi)特征的顯微鏡照片至少1張。d)著生藻類(lèi)調(diào)查照片清晰,能準(zhǔn)確反映采樣河段(湖庫(kù))環(huán)境狀況。e)生境照片包括經(jīng)緯度信息、海拔信息、拍攝日期與時(shí)間。9.5著生藻類(lèi)監(jiān)測(cè)樣品標(biāo)本要求如下:a)永久玻片應(yīng)按采樣點(diǎn)或水系整理歸類(lèi)后,置于標(biāo)本室長(zhǎng)期保存。b)永久玻片的標(biāo)簽信息全面準(zhǔn)確,可明確識(shí)別其特征,例如著生藻類(lèi)名稱(chēng)、采樣點(diǎn)名稱(chēng)、基質(zhì)類(lèi)型等。c)去除內(nèi)含物的硅藻懸浮液宜按1%~4%體積比加入甲醛溶液后長(zhǎng)期保存,標(biāo)簽信息全面準(zhǔn)確。8T/CWEC37—202310質(zhì)量保證和質(zhì)量控制10.1樣品采集10.1.1野外現(xiàn)場(chǎng)記錄應(yīng)清晰規(guī)范,樣品標(biāo)簽應(yīng)包括樣品編號(hào)、采樣日期、水域名稱(chēng)、采樣點(diǎn)位置以及采樣人姓名等信息。10.1.2每次采樣后應(yīng)及時(shí)清洗采樣設(shè)備,防止采樣污染。10.2樣品保存及運(yùn)輸10.2.1著生藻類(lèi)樣品應(yīng)按照本文件要求及時(shí)現(xiàn)場(chǎng)處理并保存,單獨(dú)分裝。10.2.2樣品運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)避免強(qiáng)光照射及強(qiáng)烈振動(dòng)。10.3樣品處理及分析10.3.1儀器設(shè)備應(yīng)定期維護(hù)和校準(zhǔn),確保其處于準(zhǔn)確、完好狀態(tài)。10.3.2樣品種類(lèi)鑒定應(yīng)基于統(tǒng)一的分類(lèi)系統(tǒng)和相關(guān)資料。10.3.3分類(lèi)中的疑難物種,應(yīng)咨詢(xún)分類(lèi)學(xué)專(zhuān)家后鑒定,并保存樣品和不同側(cè)面及分類(lèi)特征的顯微照片。10.3.4鑒定計(jì)數(shù)結(jié)果記錄表應(yīng)由檢測(cè)人、校對(duì)人同時(shí)簽字確認(rèn)。10.3.5實(shí)驗(yàn)室分析完成后剩余的生物樣品應(yīng)至少保留到監(jiān)測(cè)項(xiàng)目結(jié)束。如監(jiān)測(cè)到新物種、新記錄種或特有物種等,應(yīng)制作長(zhǎng)期保存標(biāo)本。10.4人員比對(duì)定期按10%抽檢已完成分析的樣品,實(shí)施實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部人員比對(duì)、實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)以及與分類(lèi)鑒定質(zhì)控專(zhuān)家比對(duì),以評(píng)估該實(shí)驗(yàn)室分類(lèi)鑒定和計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。定性樣品以分類(lèi)鑒定誤差率(Percenttaxonomicdisagreement,簡(jiǎn)稱(chēng)PTD)來(lái)評(píng)估分類(lèi)鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性,按公式(5)計(jì)算:PTD=………式中:PTD—分類(lèi)鑒定誤差率;comppos—比對(duì)分析結(jié)果一致的分類(lèi)單元個(gè)數(shù);max—比對(duì)分析結(jié)果中單方所鑒定出的分類(lèi)單元個(gè)數(shù)最大值。定量樣品以計(jì)數(shù)差異率(Percentdifferenceinenumeration,簡(jiǎn)稱(chēng)PDE)評(píng)估計(jì)數(shù)精密度,按公式(6)計(jì)算:PDE=×100%…………………式中:PDE—計(jì)數(shù)誤差率;N1—平行樣1測(cè)定結(jié)果,cells/cm2;N2—平行樣2測(cè)定結(jié)果,cells/cm2。根據(jù)監(jiān)測(cè)目的制定人員比對(duì)質(zhì)控目標(biāo),如PTD≤40%、PDE≤30%。9T/CWEC37—2023附錄A(資料性)著生藻類(lèi)采樣記錄表樣著生藻類(lèi)采樣記錄表見(jiàn)表A.1。表A.1著生藻類(lèi)采樣記錄表樣點(diǎn)名稱(chēng):采樣時(shí)間:年月