T-CVMA 177-2024 貓皰疹病毒感染診斷技術(shù)規(guī)范

中國獸醫(yī)協(xié)會發(fā)布I1貓皰疹病毒感染診斷技術(shù)規(guī)范NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范4縮略語PCR：聚合酶鏈式反應(yīng)（PolymeraseSDS：十二烷基硫酸鈉（SodiumDodeTBE緩沖液：三羥甲基氨基甲烷_硼酸_流行病學史和臨床癥狀是FHV感染的重要26.1.1患貓發(fā)病前不久接觸過FHV病貓或者無癥狀感染貓或患6.1.2患貓發(fā)病前有過生活環(huán)境的改變，比如寄養(yǎng)、更換住處、運輸、進入多貓環(huán)境或去過醫(yī)6.1.3收容所、貓舍等群養(yǎng)貓中出現(xiàn)了群發(fā)性呼吸道疾病，尤其在新引進貓后，未注射疫苗的貓6.2.2打噴嚏、眼鼻分泌物增多、結(jié)膜炎、流涎等癥狀至少出現(xiàn)6.2.3少數(shù)病例出現(xiàn)咳嗽、口腔潰瘍和肺炎中的一種或者一種以上的手柄，隨即密封即完成取樣，編號并填寫相應(yīng)采樣單，樣品盡快送檢，送檢時添加冰袋保持低溫。測的樣本于-70℃或以下保存，如無-70℃保存條件，可置于-20℃冰38.3.310%SDS：配方見附錄8.3.4蛋白酶K貯備液：配方見附8.5.5加入兩倍體積預(yù)冷的無水乙8.5.6室溫干燥后，加入30μLRNase-free水溶解沉淀，即得D8.5.7可采用同等提取效果的其他方法或商品化病毒核酸提取試劑盒。8.6PCR擴增4取8.5步驟提取的病毒核酸，進行PCR擴增均勻，加入核酸凝膠樣品孔，核酸凝膠配置見8.7.2加樣：分別取10μLDNAMark8.8.2陰性對照：PCR產(chǎn)物無核酸8.8.38.8.1和8.8.2在同一次實驗中同時滿足，否則在實驗有效的前提下，被檢樣品的PCR9貓皰疹病毒熒光PCR檢測9.1儀器9.3病毒DNA提取9.4.2加樣），記錄反應(yīng)管對應(yīng)的樣品編號，蓋緊管蓋后，5合的檢測通道讀取熒光信號值，淬滅基團選擇none。推薦的熒9.4.4結(jié)果判定確定閾值質(zhì)控標準可疑出現(xiàn)6.1和6.2中的任一項，且經(jīng)貓皰疹病毒PCR檢測或貓皰疹病毒熒光PCR檢測核酸陽性，可診斷6試劑配方），稱量Tris24.2g，Na2EDTA·2H2O3.72g于1L燒杯中。向燒杯中加入約600mL無菌蒸餾水，充分攪稱量Tris54.0g，EDTA2.9mg于1L燒杯中。向燒加入硼酸27.5g，充分攪拌；加無菌蒸餾水定容至1L后，室溫保存。使用時稀釋5倍即1×TBE。A.5核酸凝膠制備7引物序列5’-3’UL23_PCR_FUL23UL23_PCR_R注2：擴增目的片段長度474bp，針對FHVUL2體積(μL）\UL23_PCR_FUL23_PCR_R\2\7\118UL23_FUL23_RUL23_PFAM-CTTTTACATTCCAGACTATCCACAATAACAGG-BH工作液終濃度(μmol/L）加樣體積(μL）1×UL23_F1UL23_R1UL23_P\2\\119D.1FHV陽性對照質(zhì)粒序列（GenBankAccessionNo.MH070348再轉(zhuǎn)化至DH5α感受態(tài)細胞，構(gòu)建重組質(zhì)粒，提取重組質(zhì)粒進行PCR檢測和測序分析，結(jié)果正確的為陽性重組質(zhì)粒。利用超微量分光光度計測定陽性重組質(zhì)粒濃度，并將濃度換算成拷貝數(shù)（DNA拷貝/μL=[6.02×1023×DNA濃度（ng/μL）×10-9]/（DNA