分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作技巧試題庫(kù)

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作技巧試題庫(kù)姓名_________________________地址_______________________________學(xué)號(hào)______________________密封線1.請(qǐng)首先在試卷的標(biāo)封處填寫(xiě)您的姓名，身份證號(hào)和地址名稱(chēng)。2.請(qǐng)仔細(xì)閱讀各種題目，在規(guī)定的位置填寫(xiě)您的答案。一、選擇題1.以下哪項(xiàng)不屬于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作的基本原則？

a.嚴(yán)格的無(wú)菌操作

b.適當(dāng)?shù)南?/p>

c.使用非無(wú)菌實(shí)驗(yàn)用品

d.注意實(shí)驗(yàn)安全

2.在DNA提取過(guò)程中，通常需要使用以下哪種化學(xué)物質(zhì)？

a.醋酸銨

b.氯化鈉

c.乙醇

d.乙醚

3.PCR反應(yīng)體系中，以下哪項(xiàng)不是必需的？

a.引物

b.DNA模板

c.Taq聚合酶

d.硫酸銨

4.Northernblotting實(shí)驗(yàn)中，以下哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的？

a.使用RNA探針

b.轉(zhuǎn)移RNA至硝酸纖維素膜

c.使用放射性同位素標(biāo)記

d.使用DNA作為探針

5.以下哪種方法可以用于基因克隆？

a.Southernblotting

b.Northernblotting

c.Southernhybridization

d.DNAligase

6.以下哪項(xiàng)不是PCR擴(kuò)增的優(yōu)勢(shì)？

a.高度特異性

b.高效

c.簡(jiǎn)便

d.可以進(jìn)行大量平行實(shí)驗(yàn)

7.在Westernblotting實(shí)驗(yàn)中，以下哪項(xiàng)不是必要的？

a.蛋白質(zhì)樣品

b.抗體

c.電泳

d.洗滌液

8.以下哪種技術(shù)用于測(cè)定基因表達(dá)水平？

a.DNAmicroarray

b.RTqPCR

c.ELISA

d.Westernblotting

答案及解題思路：

1.答案：c

解題思路：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作的基本原則包括嚴(yán)格的無(wú)菌操作、適當(dāng)?shù)南竞妥⒁鈱?shí)驗(yàn)安全，而使用非無(wú)菌實(shí)驗(yàn)用品是不符合無(wú)菌操作原則的。

2.答案：c

解題思路：在DNA提取過(guò)程中，乙醇用于沉淀DNA，是常用的化學(xué)物質(zhì)。

3.答案：d

解題思路：PCR反應(yīng)體系中必需的成分包括引物、DNA模板和Taq聚合酶，而硫酸銨不是必需的。

4.答案：d

解題思路：Northernblotting實(shí)驗(yàn)中，使用RNA探針、轉(zhuǎn)移RNA至硝酸纖維素膜和使用放射性同位素標(biāo)記是正確的，而使用DNA作為探針是錯(cuò)誤的。

5.答案：d

解題思路：DNAligase是連接DNA片段的酶，可以用于基因克隆。

6.答案：d

解題思路：PCR擴(kuò)增的優(yōu)勢(shì)包括高度特異性、高效和簡(jiǎn)便，而可以進(jìn)行大量平行實(shí)驗(yàn)不是PCR擴(kuò)增的優(yōu)勢(shì)。

7.答案：d

解題思路：在Westernblotting實(shí)驗(yàn)中，蛋白質(zhì)樣品、抗體和電泳是必要的，而洗滌液不是必要的。

8.答案：a

解題思路：DNAmicroarray是一種用于測(cè)定基因表達(dá)水平的技術(shù)，而RTqPCR、ELISA和Westernblotting也可以用于測(cè)定基因表達(dá)水平，但DNAmicroarray是最常用的技術(shù)之一。二、填空題1.DNA提取過(guò)程中，一般使用__________酶來(lái)消化細(xì)胞核。

答案：蛋白酶K

解題思路：在DNA提取過(guò)程中，蛋白酶K用于消化細(xì)胞核中的蛋白質(zhì)，以便釋放出DNA。

2.在PCR反應(yīng)體系中，引物是一對(duì)__________。

答案：互補(bǔ)序列

解題思路：PCR反應(yīng)中的引物是一對(duì)與靶標(biāo)DNA序列互補(bǔ)的短單鏈DNA分子，它們是PCR擴(kuò)增的起始點(diǎn)。

3.Northernblotting實(shí)驗(yàn)中，將RNA轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜的過(guò)程稱(chēng)為_(kāi)_________。

答案：轉(zhuǎn)膜

解題思路：Northernblotting實(shí)驗(yàn)中，將RNA從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物（如硝酸纖維素膜）的過(guò)程稱(chēng)為轉(zhuǎn)膜。

4.基因克隆過(guò)程中，DNA連接酶將__________連接起來(lái)。

答案：DNA片段

解題思路：在基因克隆過(guò)程中，DNA連接酶用于連接DNA片段，形成完整的DNA分子。

5.DNA微陣列（DNAmicroarray）可以用來(lái)檢測(cè)__________。

答案：基因表達(dá)

解題思路：DNA微陣列是一種高通量檢測(cè)技術(shù)，用于分析大量基因的表達(dá)水平，從而檢測(cè)基因表達(dá)。

6.在Westernblotting實(shí)驗(yàn)中，蛋白質(zhì)樣品在__________電泳后，轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上。

答案：SDSPAGE

解題思路：Westernblotting實(shí)驗(yàn)中，首先使用SDSPAGE（十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳）對(duì)蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行分離，然后轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上。

7.ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）是一種__________測(cè)定方法。

答案：定量測(cè)定

解題思路：ELISA是一種常用的定量測(cè)定方法，用于檢測(cè)和分析抗原或抗體。

8.在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，__________是防止交叉污染的重要措施。

答案：無(wú)菌操作

解題思路：在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，無(wú)菌操作是防止細(xì)菌、病毒等微生物污染實(shí)驗(yàn)樣本和設(shè)備的重要措施。三、判斷題1.DNA提取過(guò)程中，細(xì)胞破碎是第一步操作。（×）

解題思路：在DNA提取過(guò)程中，通常的第一步是使細(xì)胞裂解，釋放細(xì)胞內(nèi)的DNA，但這一步并不直接稱(chēng)為“細(xì)胞破碎”，而是細(xì)胞裂解或細(xì)胞破碎，因此這一說(shuō)法不夠準(zhǔn)確。

2.PCR反應(yīng)體系中，引物長(zhǎng)度越長(zhǎng)，擴(kuò)增效率越高。（×）

解題思路：PCR反應(yīng)中引物的長(zhǎng)度通常在1825個(gè)堿基之間最為適宜，過(guò)長(zhǎng)的引物可能導(dǎo)致擴(kuò)增效率下降，因?yàn)樗鼈兛赡芘c模板DNA的非目標(biāo)序列發(fā)生非特異性結(jié)合，從而影響擴(kuò)增反應(yīng)的特異性。

3.Northernblotting實(shí)驗(yàn)中，探針與靶RNA的結(jié)合是隨機(jī)的。（×）

解題思路：在Northernblotting實(shí)驗(yàn)中，探針與靶RNA的結(jié)合是基于序列互補(bǔ)的，因此結(jié)合不是隨機(jī)的，而是有選擇性地與靶RNA結(jié)合。

4.基因克隆過(guò)程中，質(zhì)粒是一種載體。（√）

解題思路：在基因克隆過(guò)程中，質(zhì)粒是一種常用的載體，它能夠攜帶外源DNA片段并在宿主細(xì)胞中復(fù)制。

5.DNA微陣列可以同時(shí)檢測(cè)數(shù)千個(gè)基因的表達(dá)水平。（√）

解題思路：DNA微陣列技術(shù)可以通過(guò)一次實(shí)驗(yàn)同時(shí)檢測(cè)數(shù)千甚至數(shù)萬(wàn)個(gè)基因的表達(dá)水平，是一種高通量基因表達(dá)分析工具。

6.在Westernblotting實(shí)驗(yàn)中，抗體與蛋白質(zhì)的特異性結(jié)合是必要的。（√）

解題思路：Westernblotting實(shí)驗(yàn)中，抗體的特異性結(jié)合是識(shí)別和檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的關(guān)鍵步驟，保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

7.ELISA可以用于檢測(cè)蛋白質(zhì)濃度。（√）

解題思路：ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）是一種常用的檢測(cè)蛋白質(zhì)濃度的方法，通過(guò)酶標(biāo)記的抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)。

8.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，無(wú)菌操作是防止交叉污染的重要措施。（√）

解題思路：無(wú)菌操作是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染和保持實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的基本要求。四、簡(jiǎn)答題1.簡(jiǎn)述DNA提取實(shí)驗(yàn)的基本步驟。

解題思路：此題要求考生能夠詳細(xì)描述DNA提取實(shí)驗(yàn)的步驟，包括樣品的處理、溶解、沉淀、洗滌和溶解等環(huán)節(jié)。

答案：

DNA提取實(shí)驗(yàn)的基本步驟包括：

1.樣品處理：將含有DNA的細(xì)胞或組織破碎，釋放DNA。

2.溶解：使用適當(dāng)?shù)木彌_液溶解DNA。

3.沉淀：通過(guò)加入酒精使DNA沉淀。

4.洗滌：洗滌沉淀物以去除雜質(zhì)。

5.溶解：將沉淀的DNA溶解于適當(dāng)?shù)木彌_液中。

2.解釋PCR反應(yīng)體系中各組分的作用。

解題思路：此題要求考生理解PCR反應(yīng)體系中的關(guān)鍵組分及其功能。

答案：

PCR反應(yīng)體系中的組分及其作用

1.模板DNA：作為PCR擴(kuò)增的起始模板。

2.引物：與模板DNA的特定序列互補(bǔ)，引導(dǎo)DNA聚合酶的延伸。

3.DNA聚合酶：催化DNA的合成。

4.dNTPs（脫氧核糖核苷酸）：DNA合成的原料。

5.Mg2：作為DNA聚合酶的輔助因子。

6.PCR緩沖液：提供適宜的pH和離子強(qiáng)度。

3.介紹Northernblotting實(shí)驗(yàn)的原理和應(yīng)用。

解題思路：此題要求考生掌握Northernblotting實(shí)驗(yàn)的基本原理及其應(yīng)用領(lǐng)域。

答案：

Northernblotting實(shí)驗(yàn)的原理是利用DNA與RNA的雜交特性，通過(guò)電泳分離RNA，然后將固定在膜上的RNA與探針進(jìn)行雜交，檢測(cè)特定的RNA分子。其應(yīng)用包括：

1.定量或定性分析特定RNA的表達(dá)水平。

2.鑒定未知RNA序列。

3.研究基因表達(dá)調(diào)控。

4.解釋基因克隆的原理和步驟。

解題思路：此題要求考生了解基因克隆的基本原理和操作步驟。

答案：

基因克隆的原理是利用分子生物學(xué)技術(shù)將目的基因插入載體中，使其在宿主細(xì)胞中復(fù)制和表達(dá)。步驟包括：

1.目的基因的獲取。

2.設(shè)計(jì)并合成引物。

3.PCR擴(kuò)增目的基因。

4.提取質(zhì)粒DNA。

5.DNA連接：將目的基因插入載體。

6.轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。

7.選擇和鑒定陽(yáng)性克隆。

5.簡(jiǎn)述DNA微陣列的基本原理和用途。

解題思路：此題要求考生理解DNA微陣列的工作原理及其應(yīng)用。

答案：

DNA微陣列的基本原理是將大量探針固定在固體表面，與待測(cè)樣本中的靶標(biāo)DNA進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)來(lái)分析基因表達(dá)水平。其用途包括：

1.大規(guī)?；虮磉_(dá)分析。

2.基因功能研究。

3.疾病診斷和預(yù)后。

6.介紹Westernblotting實(shí)驗(yàn)的原理和應(yīng)用。

解題思路：此題要求考生掌握Westernblotting實(shí)驗(yàn)的基本原理及其應(yīng)用領(lǐng)域。

答案：

Westernblotting實(shí)驗(yàn)的原理是利用抗原抗體反應(yīng)，將蛋白質(zhì)樣品中的目標(biāo)蛋白通過(guò)電泳分離，然后轉(zhuǎn)移到固相支持物上，與特異性抗體結(jié)合，通過(guò)檢測(cè)抗體與抗原的結(jié)合來(lái)分析蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。其應(yīng)用包括：

1.蛋白質(zhì)定量和定性分析。

2.研究蛋白質(zhì)相互作用。

3.疾病診斷。

7.簡(jiǎn)述ELISA實(shí)驗(yàn)的原理和應(yīng)用。

解題思路：此題要求考生理解ELISA實(shí)驗(yàn)的基本原理及其應(yīng)用。

答案：

ELISA實(shí)驗(yàn)的原理是利用抗原抗體反應(yīng)，通過(guò)酶催化底物反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化來(lái)定量檢測(cè)目標(biāo)分子。其應(yīng)用包括：

1.檢測(cè)病原體、抗體和抗原。

2.檢測(cè)藥物濃度。

3.疾病診斷。

8.如何防止分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的交叉污染？

解題思路：此題要求考生了解分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中交叉污染的預(yù)防措施。

答案：

防止分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的交叉污染的措施包括：

1.使用專(zhuān)用的實(shí)驗(yàn)器材和耗材。

2.實(shí)驗(yàn)操作前后徹底清洗雙手和實(shí)驗(yàn)器材。

3.實(shí)驗(yàn)室分區(qū)，避免交叉操作。

4.使用紫外線消毒。

5.定期檢測(cè)實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的污染水平。五、論述題1.請(qǐng)論述PCR技術(shù)在分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用。

PCR技術(shù)，即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是分子生物學(xué)中的一種關(guān)鍵技術(shù)，具有廣泛的應(yīng)用。

用于基因克?。和ㄟ^(guò)PCR技術(shù)可以從復(fù)雜的DNA混合物中擴(kuò)增特定的DNA片段，便于后續(xù)的克隆、測(cè)序等操作。

基因突變檢測(cè)：PCR技術(shù)可以用來(lái)檢測(cè)基因突變，如單核苷酸多態(tài)性（SNP）的檢測(cè)。

DNA指紋分析：PCR技術(shù)可用于DNA指紋分析，用于法醫(yī)學(xué)和親子鑒定。

病原體檢測(cè)：PCR技術(shù)可用于檢測(cè)病原體，如HIV、瘧疾等。

基因表達(dá)分析：PCR技術(shù)可用于檢測(cè)目的基因的表達(dá)水平，通過(guò)定量PCR可以定量分析基因表達(dá)水平的變化。

2.分析DNA微陣列在基因表達(dá)調(diào)控研究中的優(yōu)勢(shì)。

高通量：DNA微陣列可以同時(shí)對(duì)成千上萬(wàn)的基因進(jìn)行檢測(cè)，大大提高了研究效率。

多樣性：可用于研究不同生物或同一生物不同發(fā)育階段的基因表達(dá)模式。

定性定量：不僅可定性分析基因表達(dá)，還可進(jìn)行定量分析，為后續(xù)研究提供更多信息。

檢測(cè)范圍廣：可同時(shí)檢測(cè)多種類(lèi)型的RNA，如mRNA、miRNA等。

3.討論Westernblotting實(shí)驗(yàn)在蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用。

蛋白質(zhì)定量：Westernblotting實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)特定蛋白的表達(dá)水平，通過(guò)對(duì)比不同樣本的信號(hào)強(qiáng)度，進(jìn)行蛋白質(zhì)的定量分析。

蛋白質(zhì)鑒定：通過(guò)對(duì)比已知蛋白和待測(cè)蛋白的分子量，鑒定待測(cè)蛋白。

蛋白質(zhì)相互作用：通過(guò)Westernblotting實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)蛋白之間的相互作用。

篩選候選靶標(biāo)：在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，可以通過(guò)Westernblotting實(shí)驗(yàn)篩選出與疾病相關(guān)的候選靶標(biāo)。

4.分析ELISA技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中的作用。

蛋白質(zhì)定量：ELISA技術(shù)可用于檢測(cè)和定量特定的蛋白質(zhì)，如激素、抗體等。

疾病診斷：ELISA技術(shù)可用于檢測(cè)病原體、抗體等，為疾病診斷提供依據(jù)。

藥物篩選：在藥物研發(fā)過(guò)程中，ELISA技術(shù)可用于篩選具有潛在療效的化合物。

細(xì)胞因子檢測(cè)：ELISA技術(shù)可用于檢測(cè)細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)。

5.探討分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中如何保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件：保證實(shí)驗(yàn)條件符合實(shí)驗(yàn)要求，如溫度、pH、離子濃度等。

標(biāo)準(zhǔn)化操作：嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行操作，減少人為誤差。

重復(fù)實(shí)驗(yàn)：進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，提高結(jié)果的可靠性。

數(shù)據(jù)分析：使用科學(xué)的統(tǒng)計(jì)方法分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，排除偶然因素。

答案及解題思路：

1.答案：PCR技術(shù)在分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用廣泛，包括基因克隆、基因突變檢測(cè)、DNA指紋分析、病原體檢測(cè)和基因表達(dá)分析等。

解題思路：首先列舉PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域，然后針對(duì)每個(gè)領(lǐng)域簡(jiǎn)要說(shuō)明其具體應(yīng)用。

2.答案：DNA微陣列在基因表達(dá)調(diào)控研究中的優(yōu)勢(shì)包括高通量、多樣性、定性和定量以及檢測(cè)范圍廣。

解題思路：針對(duì)每個(gè)優(yōu)勢(shì)，結(jié)合實(shí)際應(yīng)用進(jìn)行簡(jiǎn)