2024高中生物專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)第2課時(shí)實(shí)驗(yàn)操作及實(shí)驗(yàn)結(jié)果教案新人教版選修1

PAGE9-第2課時(shí)試驗(yàn)操作及試驗(yàn)結(jié)果[學(xué)習(xí)目標(biāo)]1.學(xué)會(huì)培育基的制備方法。2.駕馭大腸桿菌的純化方法。3.了解菌種保藏所用的方法。學(xué)問點(diǎn)一制備牛肉膏蛋白胨固體培育基學(xué)問梳理1.操作步驟2．倒平板(1)在火焰旁右手拿錐形瓶，左手eq\o(□,\s\up3(01))拔出棉塞。(2)右手拿錐形瓶，使錐形瓶的瓶口快速通過eq\o(□,\s\up3(02))火焰。(3)左手將培育皿打開一條縫隙，右手將培育基(約10～20mL)倒入培育皿，左手立即蓋上eq\o(□,\s\up3(03))皿蓋。(4)待平板冷卻凝固后，將平板e(cuò)q\o(□,\s\up3(04))倒過來放置，使皿蓋在下、皿底在上。1.培育基滅菌后，須要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么方法來估計(jì)培育基的溫度？提示：可以用手觸摸盛有培育基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2．為什么須要使錐形瓶的瓶口通過火焰？提示：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培育基。典題分析題型一培育基的制備過程分析[例1]下列關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培育基的敘述，錯(cuò)誤的是()A．操作依次為計(jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C．待培育基冷卻至50℃左右時(shí)倒平板D．待平板冷卻凝固后將平板倒過來放置解題分析制備牛肉膏蛋白胨固體培育基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，其依次不能顛倒，A錯(cuò)誤；牛肉膏比較黏稠，所以稱好后需將稱量紙一同放入燒杯中加熱，當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分別后，用玻璃棒取出稱量紙，B正確；待培育基冷卻至50℃左右，起先倒平板，C正確；平板冷卻凝固后倒置，D正確。答案A學(xué)問拓展1培育基滅菌后，需冷卻至50℃左右時(shí)才能倒平板，溫度過高會(huì)燙手，溫度過低培育基又會(huì)凝固。2整個(gè)操作在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避開四周環(huán)境中微生物的污染。3平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝聚水珠，將平板倒置，可防止皿蓋上的水珠落入培育基，造成污染。4倒平板時(shí)不要將培育基濺在皿蓋與皿底之間，否則此培育基不能用來培育微生物，因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培育基上滋生。

學(xué)問點(diǎn)二純化大腸桿菌學(xué)問梳理1.菌落的概念由一個(gè)微生物細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的eq\o(□,\s\up3(01))子細(xì)胞群體，就是菌落。2．純化大腸桿菌的原理在培育基上得到由eq\o(□,\s\up3(01))一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的eq\o(□,\s\up3(02))菌落，即獲得較純的菌種。3．微生物接種常用的方法(1)平板劃線法①概念：通過接種環(huán)在瓊脂固體培育基表面eq\o(□,\s\up3(01))連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培育基的表面。②操作步驟③留意事項(xiàng)a．第一次劃線及每次劃線之前都需eq\o(□,\s\up3(09))灼燒接種環(huán)滅菌，劃線操作結(jié)束仍需灼燒接種環(huán)。第一次劃線前灼燒：殺死接種環(huán)上eq\o(□,\s\up3(10))原有的微生物。每次劃線之前灼燒的目的：殺死eq\o(□,\s\up3(11))上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種干脆來源于上次劃線的末端。劃線結(jié)束灼燒的目的：殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避開細(xì)菌污染eq\o(□,\s\up3(12))環(huán)境和感染eq\o(□,\s\up3(13))操作者。b．灼燒接種環(huán)之后，要等其eq\o(□,\s\up3(14))冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。c．在做其次次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的eq\o(□,\s\up3(15))末端起先劃線，這樣才能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步削減，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。d．劃線時(shí)最終一區(qū)域不要與eq\o(□,\s\up3(16))第一區(qū)域相連。e．劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過大將eq\o(□,\s\up3(17))培育基劃破。(2)稀釋涂布平板法①概念：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到eq\o(□,\s\up3(18))瓊脂固體培育基的表面，進(jìn)行培育。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)，即可獲得單個(gè)細(xì)菌形成的eq\o(□,\s\up3(19))菌落。②操作過程包括eq\o(□,\s\up3(20))系列稀釋和eq\o(□,\s\up3(21))涂布平板。③操作步驟A．系列稀釋操作步驟：a．將分別盛有9mL水的6支試管滅菌，并按101～106的依次編號(hào)。b．用移液管吸取1mL培育的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使eq\o(□,\s\up3(22))菌液與水充分混勻。c．從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復(fù)第2步的混勻操作。依次類推，直到完成最終一支試管的稀釋。留意：移液管須要經(jīng)過eq\o(□,\s\up3(23))滅菌。操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1～2cm處。B．涂布平板操作步驟：a．涂布器消毒：將eq\o(□,\s\up3(24))涂布器浸在盛有eq\o(□,\s\up3(25))酒精的燒杯中消毒。b．取菌液：取少量菌液(不超過0.1mL)，滴加到培育基表面。c．涂布器滅菌：將沾有少量酒精的涂布器在eq\o(□,\s\up3(26))火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s。d．涂布平板：用涂布器將菌液勻稱地涂布在培育基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培育皿，使菌液分布勻稱。④留意事項(xiàng)：a.消毒時(shí)將涂布器末端浸在盛有eq\o(□,\s\up3(27))體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精的燒杯中。取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中eq\o(□,\s\up3(28))滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。b．操作中肯定要留意防火！不要將eq\o(□,\s\up3(29))過熱的涂布器放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。4．接種勝利的標(biāo)準(zhǔn)假如培育基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形態(tài)、大小基本一樣，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是eq\o(□,\s\up3(01))符合要求的；假如培育基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，試驗(yàn)eq\o(□,\s\up3(02))失敗，須要分析緣由，再次接種。5．菌種的保藏(1)目的：保持菌種的純凈，降低微生物的新陳代謝速率，延緩菌種蒼老。(2)方法比較項(xiàng)目臨時(shí)保藏甘油管藏適用范圍eq\o(□,\s\up3(01))頻繁運(yùn)用的菌種eq\o(□,\s\up3(02))長(zhǎng)期保存的菌種培育基eq\o(□,\s\up3(03))固體斜面培育基eq\o(□,\s\up3(04))液體培育基保藏溫度4℃－20℃詳細(xì)方法接種到eq\o(□,\s\up3(05))固體斜面培育基上→相宜溫度下培育→eq\o(□,\s\up3(06))4_℃冰箱中保藏甘油瓶中裝入甘油后eq\o(□,\s\up3(07))滅菌→將菌液轉(zhuǎn)移至甘油瓶中→混勻后冷凍箱中保存優(yōu)缺點(diǎn)甘油管藏法可以長(zhǎng)時(shí)間保存菌種，臨時(shí)保藏法保存時(shí)間短，菌種簡(jiǎn)潔被污染或產(chǎn)生變異1.在純化大腸桿菌操作中，如何驗(yàn)證培育基滅菌是否徹底？提示：將接種后的培育基和一個(gè)未接種的培育基，都放在37℃恒溫箱中培育，視察并記錄結(jié)果。2．假如你在培育基上視察到了不同形態(tài)的菌落，你認(rèn)為是由什么緣由造成的？提示：培育基滅菌不徹底或接種過程中感染了雜菌。3．稀釋倍數(shù)和劃線次數(shù)是兩種接種方法的關(guān)鍵，確定稀釋倍數(shù)和劃線次數(shù)的因素是什么？提示：菌液的濃度。典題分析題型二正確區(qū)分平板劃線法和稀釋涂布平板法[例2]下面四種菌落分布圖中，不行能是用稀釋涂布平板法得到的是()解題分析對(duì)微生物的分別常用稀釋涂布平板法和平板劃線法進(jìn)行接種，將不同稀釋度的菌液用涂布器分別涂布到瓊脂固體培育基的表面進(jìn)行培育，這一過程是稀釋涂布平板法。據(jù)圖分析：A、B、C屬于稀釋涂布平板法接種得到的平板，D平板有明顯的劃線痕跡，是平板劃線法接種得到的平板。答案D[例3]下列關(guān)于微生物接種的描述，正確的是()A．平板劃線法只用于固體培育基的接種，而稀釋涂布平板法只用于液體培育基的接種B．平板劃線法的操作相對(duì)簡(jiǎn)潔一些C．利用平板劃線法不能得到單菌落，而利用稀釋涂布平板法能得到單菌落D．平板劃線法所用的接種工具不須要滅菌，而稀釋涂布平板法所用的接種工具須要滅菌解題分析這兩種方法都用于固體培育基的接種，都能用于形成單菌落，接種工具都要進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理。答案B題后歸納比較平板劃線法和稀釋涂布平板法的異同點(diǎn)題型三正確理解大腸桿菌純化中的“多次劃線”與“充分稀釋”[例4]平板劃線法和稀釋涂布平板法是常用的兩種接種方法。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．平板劃線法要求在培育基表面連續(xù)劃線，且除第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)都是上一次劃線的末端B．除第一次劃線前須要將接種環(huán)灼燒滅菌外，以后的劃線可以不用滅菌即可劃線C．假如菌液原來濃度不高，則可以適當(dāng)降低稀釋倍數(shù)D．“充分稀釋”和“連續(xù)劃線”的目的都是獲得由單一細(xì)胞繁殖而成的菌落解題分析在平板劃線法中，連續(xù)劃線的目的就是使菌種的濃度降低，所以除第一次劃線外，以后的每次劃線的起點(diǎn)都是上一次劃線的末端，A正確；將接種環(huán)灼燒滅菌并冷卻后沾取菌液進(jìn)行第一次劃線，以后的每一次劃線前都要將接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌，B錯(cuò)誤；稀釋倍數(shù)要隨菌液的濃度而定，假如菌液的濃度太大，則須要更高的稀釋倍數(shù)，假如菌液原來濃度不高，就可以適當(dāng)降低稀釋的倍數(shù)，C正確；稀釋涂布平板法中的“充分稀釋”及平板劃線法中的“連續(xù)劃線”，目的都是獲得由單一細(xì)胞繁殖而成的菌落，D正確。答案B題后歸納平板劃線法中的主要操作要領(lǐng)是“多次劃線”，稀釋涂布平板法中的主要操作要領(lǐng)是“充分稀釋”，二者雖然操作方法不同，但目的是一樣的，即獲得由單個(gè)細(xì)胞增殖而成的菌落。假如平板劃線法中的劃線次數(shù)太少或稀釋涂布平板法中的稀釋倍數(shù)不夠，則得到的可能是由多個(gè)細(xì)胞增殖而來的子細(xì)胞群體，其中還可能摻雜著其他雜菌，達(dá)不到純化的目的。課堂小結(jié)當(dāng)堂檢測(cè)——查漏補(bǔ)缺鞏固提升1．制備牛肉膏蛋白胨固體培育基的步驟是()A．計(jì)算、稱量、倒平板、溶化、滅菌B．計(jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C．計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板D．計(jì)算、稱量、滅菌、溶化、倒平板答案C解析制備牛肉膏蛋白胨固體培育基，應(yīng)先依據(jù)須要計(jì)算各成分用量，然后稱量、溶化、滅菌、倒平板，C正確。2．純化大腸桿菌的步驟正確的是()A．樣品稀釋→涂布法分別→培育成單菌落B．樣品稀釋→培育成單菌落→劃線或涂布法分別C．樣品稀釋→劃線或涂布→分別→培育成單菌落D．樣品稀釋→劃線→涂布→分別→培育成單菌落答案A解析微生物的分別與純化主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法包括樣品稀釋、涂布及培育三個(gè)基本步驟，其中劃線或涂布法是對(duì)微生物進(jìn)行分別，培育是將分別后的菌種培育成單個(gè)菌落。3．現(xiàn)有菌液10mL，按下圖進(jìn)行系列稀釋，在最終一個(gè)試管中測(cè)得細(xì)菌數(shù)為20個(gè)，則未稀釋前的試管中有細(xì)菌()A．600個(gè)B．1200個(gè)C．2×107個(gè)D．2×106個(gè)答案C解析從本題的圖中可看出，每次都是稀釋10倍，總共稀釋6次，即稀釋106倍，最終一個(gè)試管為20個(gè)，即原來菌液中應(yīng)當(dāng)有細(xì)菌2×107個(gè)，C正確。4．將平板倒置的目的是()A．接種時(shí)再拿起來便利B．在皿底上標(biāo)記日期等便利C．正著放置簡(jiǎn)潔破裂D．防止皿蓋上的冷凝水落入培育基造成污染答案D解析平板倒置主要是防止皿蓋上的水珠落入培育基造成污染，D正確。5．為了獲得純度高的大腸桿菌，須要對(duì)大腸桿菌進(jìn)行培育和分別。培育大腸桿菌一般用牛肉膏蛋白胨固體培育基。(1)培育大腸桿菌，配制固體培育基的基本步驟：計(jì)算→稱量→________→________→倒平板。(2)稱量時(shí)，由于牛肉膏比較黏稠，可以用________挑取，放在__________上稱量。由于牛肉膏和蛋白胨____________，稱量時(shí)動(dòng)作要快速，稱量后要?jiǎng)偤蒙w上瓶蓋。(3)在牛肉膏蛋白胨固體培育基上的大腸桿菌能生長(zhǎng)，說明培育基含有________________________等大腸桿菌生長(zhǎng)所需的養(yǎng)分要素。(4)微生物純化培育可以通過多種接種方法如______________和______________________等，使大腸桿菌在固體培育基上形成單個(gè)________，從而獲得純菌株。答案(1)溶化滅菌(2)玻璃棒稱量紙簡(jiǎn)潔吸潮(3)碳