蔬菜中甲基對硫磷測定方法酶聯(lián)免疫法

1蔬菜中甲基對硫磷測定方法酶聯(lián)免疫法本標準規(guī)定了蔬菜中甲基對硫磷農(nóng)藥的酶聯(lián)免疫快速檢測方法的原理、試劑與材料、試樣制備、測定、結(jié)果判定與表述、檢測限和特異性。本標準適用于農(nóng)產(chǎn)品中甲基對硫磷農(nóng)藥殘留的在線篩查和快速監(jiān)測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而構(gòu)成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤表的內(nèi)容）或修改版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法GB2763-2019食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量3原理采用間接競爭ELISA方法，在微孔板上包被甲基對硫磷包被抗原，檢測樣品中殘留的甲基對硫磷農(nóng)藥與微孔板上的包被抗原競爭甲基對硫磷抗體，加入酶標羊抗鼠二抗后，顯色劑顯色，終止液終止反應(yīng)。用酶標儀測定450nm處吸光度，吸光值與檢測樣品中的甲基對硫磷殘留量成負相關(guān)。4試劑與材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純和GB/T6682中規(guī)定的三級水。酶聯(lián)免疫檢測試劑盒：甲基對硫磷酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，試劑盒中包括陽性參考品、陰性參考品、甲醇、樣品處理液、檢測液、甲基對硫磷抗體溶液、酶標二抗溶液、底物溶液、終止溶液和包被有甲基對硫磷包被源的可拆卸96孔板，96孔板使用鋁箔袋真空干燥密封包裝。5試樣制備稱取10g±0.1g大米樣品，粉碎后，加入1mL甲醇，靜置15min。加入5mL樣品處理液，充分混勻后，利用濾紙進行固液分離。濾液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶并定容至10mL（樣品處理液沖洗濾紙中的樣品）。樣品濾液由檢測液進行2.5倍稀釋。6測定2撕開鋁箔袋，根據(jù)檢測樣品數(shù)取出一定量的檢測微孔條。用檢測液將抗體溶液100倍稀釋，并與樣品處理液等體積混合后，按照50uL/孔加樣，同時設(shè)置兩孔陰性參考品、兩孔陽性參考品對照，并設(shè)一孔空白對照。37℃孵育45min，并洗板。用檢測液將酶標二抗溶液100倍稀釋，按照50uL/孔加樣。37℃孵育30min，并洗板。按照50uL/孔加樣，加入底物溶液。按照25uL/孔加樣，加入終止溶液，并在5min之內(nèi)測定OD450值。7結(jié)果判定與表述對照陽性參考品OD450平均值、陰性參考品OD450平均值和空白孔的結(jié)果，根據(jù)競爭免疫法的原理及微孔板OD450值，按照如下原則進行結(jié)果判定：（a）無效：陽性參考品顯色OD450平均值≤0.8或陰性參考品OD450平均值≥0.1；（b）陽性：樣品OD450值與陽性參考品顯色OD450平均值的比值≥0.2；（c）陰性：樣品OD450值與陽性參考品顯色OD450平均值的比值＜0.2。7.1在試紙條的質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)色帶，判定為無效；7.2僅在試紙條質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紅線，判定為陽性；7.3在試紙條檢測區(qū)及質(zhì)控區(qū)各出現(xiàn)一條紅線，判定為陰性；7.4在試紙條質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紅線，檢測區(qū)現(xiàn)一條糊的陰影線，判定為臨界值。出現(xiàn)臨界值時，需重復檢測兩次以上。8檢測限和特異性蔬菜中甲基對硫磷的檢測限為0.02mg/kg（依據(jù)為GB2763-2019