試劑標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）-CK

文件號：AA第1版頁數(shù)PAGE3共5頁試劑標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程項目肌酸磷酸激酶（CK）方法DGKC速率法儀器H7600系列編寫人日期審核人日期批準(zhǔn)人日期文件分發(fā)部門和/或個人本規(guī)程自年月日起實施 目錄檢測原理標(biāo)本采集與處理2.1受檢者的準(zhǔn)備2.2靜脈采血2.3抗凝劑2.4標(biāo)本處理3.試劑3.1試劑3.2校準(zhǔn)血清3.3試劑、校準(zhǔn)血清的穩(wěn)定性4.儀器5.操作6.計算7.操作性能7.1精密度7.2準(zhǔn)確度7.3靈敏度7.4可報告范圍7.5特異性7.6干擾8.參考值9.臨床意義附錄A:參數(shù)1.檢測原理CK肌酸磷酸+ADP肌酸+ATPHKATP+葡萄糖葡萄糖-6-磷酸+ADPG6PDH葡萄糖-6-磷酸+NADP+6-磷酸葡萄糖酸+H++NADPHNADPH在340nm處有特異吸收，通過測定NADPH生成速率計算出CK活性。2．標(biāo)本采集與處理2.1受檢者的準(zhǔn)備：病人空腹12h，不飲酒24h后采集血樣。體檢對象抽血前應(yīng)有兩周的的正常狀況記錄。注意有無應(yīng)用影響測試項目的藥物。此外，對于體檢者，采血的季節(jié)都應(yīng)做相關(guān)記錄，因為樣本中各項目的含量有季節(jié)性變動，為了前后比較應(yīng)在每年同一季節(jié)檢驗。應(yīng)囑體檢對象在抽血前24小時內(nèi)不做劇烈運(yùn)動。2.2靜脈采血：除非是臥床的病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外的分布，會影響測試項目的濃度。在采血前至少應(yīng)靜坐5分鐘，一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過1分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3抗凝劑：血漿使用肝素作為抗凝劑。2.4標(biāo)本處理：血標(biāo)本室溫放置30min～45min后離心分離血清或血漿，置潔凈試管加蓋低溫保存。3．試劑3.1試劑：本科使用上海華臣生物技術(shù)有限公司CK試劑盒，為液體雙試劑，各組分如下：試劑包裝規(guī)格見試劑說明書。試劑1咪唑緩沖液 pH6.7100mmol/L葡萄糖 20mmol/LN-乙酰半胱氨酸 20mmol/L乙酸鎂 10mmol/LEDTA-Na2 2mmol/LADP 2mmol/LAMP 5mmol/L5’-磷酸二腺苷 10mmol/LNADP 2mmol/L葡萄糖-6-磷酸脫氫酶 >1500U/L已糖激酶 >2500U/L試劑2磷酸肌酸30mmol/L3.2：校準(zhǔn)血清使用上海華臣生物技術(shù)有限公司提供的復(fù)合校準(zhǔn)血清或采用因數(shù)法。按照說明書提供的樣本和試劑比例上機(jī)。校準(zhǔn)頻次：空白定標(biāo)：每日需做試劑空白定標(biāo)。全點定標(biāo)：試劑換批號使用時或質(zhì)控結(jié)果超過規(guī)定的2SD范圍，需要全點定標(biāo)。3.3試劑、校準(zhǔn)血清的穩(wěn)定性：原包裝試劑儲存在2-8℃至標(biāo)簽所示失效日期。18-22℃穩(wěn)定15天，試劑應(yīng)避免污染。當(dāng)試劑空白吸光度高于0.5時，試劑按照失效處理。多項校準(zhǔn)血清在2-8℃儲存至標(biāo)簽所示失效日期，復(fù)溶后-20℃保存，可穩(wěn)定一個月，只可凍融一次，避免反復(fù)凍融。參見校準(zhǔn)血清說明書。4．儀器H7600系列型號儀器。5．操作樣品為血清或肝素抗凝血漿。本法為速率法。參數(shù)見后附，附錄A。試劑參數(shù)設(shè)置、定標(biāo)操作以及樣本檢測常規(guī)操作，見儀器操作規(guī)程。6．計算ΔA/min×Vt×1000 CK(U/L)==ΔA/min×Fe×Vs×d式中：ΔA/min——每分鐘吸光度變化率；e——摩爾吸光系數(shù)；Vt——反應(yīng)液總體積（ml）；d——1比色杯光徑（cm）；1000——變化因數(shù)；Vs——標(biāo)本體積（ml）；7．操作性能7.1精密度：批內(nèi)CV<5%，批間CV<7%。7.2準(zhǔn)確度：測量結(jié)果在上海華臣生物質(zhì)控血清靶值±2SD范圍內(nèi)。不同方法學(xué)試劑的質(zhì)控結(jié)果之間會存在差異，使用時請確保質(zhì)控選擇與試劑的方法學(xué)保持一致。7.3靈敏度：肌酸磷酸激酶濃度為：500U/L時，吸光度變化率ΔA340nm/min為0.130～0.158。7.4可報告范圍：血清與試劑用量之比為10:240:60時，測定上限為1500U/L。7.5特異性：測量值在給定值的90%-110％范圍內(nèi)。7.6干擾：內(nèi)源性干擾物溶血為1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黃疸30mg/ml、抗壞血酸300mg/ml對測試結(jié)果無明顯影響。8．參考值