食品微生物自動化儀器檢測

關(guān)于食品微生物自動化儀器檢測第1頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第2頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日檢測和鑒定細(xì)菌的標(biāo)準(zhǔn)方法是什么？課堂提問：第3頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日傳統(tǒng)的微生物學(xué)鑒定方法分離培養(yǎng)染色鏡檢藥物敏感實驗生理生化反應(yīng)第4頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日傳統(tǒng)的微生物學(xué)鑒定方法過程煩瑣費時費力易發(fā)生主觀片面錯誤質(zhì)量控制難微生物學(xué)技術(shù)方法快速、準(zhǔn)確、簡易和自動化?第5頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日微電子學(xué)化學(xué)

計算機學(xué)分子生物學(xué)物理學(xué)滲透交叉微生物學(xué)自動化檢測系統(tǒng)第6頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第7頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日一、ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器用于細(xì)菌的快速鑒定，細(xì)菌的鑒定是細(xì)菌分類的實驗過程，即將未知細(xì)菌按分類原則放入某系統(tǒng)中的適當(dāng)位置與已知細(xì)菌比較，如果相同就采用已知細(xì)菌的名稱；不同則按命名原則，確定一個新的名稱。第8頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器一、ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)第9頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器一、ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)

ATBExpression是自動化微生物鑒定和藥敏分析系統(tǒng)，它是從API系統(tǒng)發(fā)展而來，由法國生物--梅里埃研制生產(chǎn)。以API試劑條為基礎(chǔ)，測試品種齊全，共有750種反應(yīng)，電腦數(shù)據(jù)庫不斷地完善和補充，鑒定能力強，可鑒定近700多種細(xì)菌。第10頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第11頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日各種細(xì)菌所具有的酶系統(tǒng)不盡相同，對營養(yǎng)基質(zhì)的分解能力也不一樣，因而代謝產(chǎn)物存在差別。以此用生理生化試驗的方法檢測細(xì)菌對各種基質(zhì)的代謝作用及其代謝產(chǎn)物，從而鑒別細(xì)菌的種屬，稱之為細(xì)菌的生理生化反應(yīng)。1.

糖（醇）類發(fā)酵試驗

第12頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日API鑒定原理第13頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日常見的生理生化反應(yīng)包括：（1）糖（醇）類發(fā)酵實驗；（2）甲基紅試驗（M.R試驗）；（3）Voges-Proskauer試驗（伏-普試驗，V.P.

試驗）；（4）靛基質(zhì)試驗（吲哚實驗）；（5）硫化氫產(chǎn)生試驗（三糖鐵實驗）；（6）明膠液化實驗；（7）檸檬酸鹽利用試驗；（8）淀粉水解實驗（9）尿酶；（10）氧化酶；（11）賴氨酸、鳥氨酸脫羧酶；（12）半乳糖酶；（13）觸酶實驗（過氧化氫酶）第14頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第15頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日甲基紅實驗（MR實驗）糖（醇）類發(fā)酵實驗V.P.

實驗﹢﹣﹣﹢溴甲酚紫［PH5.2（黃色）-6.8（紫色）]甲基紅pH4.4（紅色-pH6.2（黃色）甲基紅試驗是檢測由葡萄糖產(chǎn)生的有機酸。當(dāng)細(xì)菌代謝糖產(chǎn)生酸時，培養(yǎng)基變酸，培養(yǎng)基中甲基紅指示劑由橘黃色變?yōu)榧t色。VP試驗是測定某些細(xì)菌利用葡萄糖產(chǎn)生非酸性或中性末端產(chǎn)物的能力第16頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日﹣﹢吲哚實驗﹢﹣檸檬酸鹽利用試驗：有的細(xì)菌如產(chǎn)氣桿菌，能利用檸檬酸鈉為碳源，能在檸檬酸鹽培養(yǎng)基上生長，并分解檸檬酸鹽后產(chǎn)生碳酸鹽，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。此時培養(yǎng)基中的溴麝香草酚藍(lán)（變色范圍pH6.0(黃)～7.6(藍(lán))

）指示劑由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。

對二甲基氨基苯甲醛

第17頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日硫化氫產(chǎn)生試驗淀粉水解實驗?zāi)承┘?xì)菌能分解含硫的氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸等)，產(chǎn)生硫化氫，與乙酸鉛試紙條反應(yīng)，產(chǎn)生黑色物質(zhì)。微生物對大分子的淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解成小分子物質(zhì)才能被微生物吸收利用。胞外酶主要是水解酶，通過加水裂解大分子物質(zhì)為較小的化合物，使其能被運輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)。第18頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第19頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第20頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第21頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第22頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第23頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日Microbact生化鑒定試劑盒（18-24h出結(jié)果，約200種細(xì)菌。）第24頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日

第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器一、ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)API細(xì)菌鑒定系統(tǒng)（生物梅里埃）鑒定產(chǎn)品包括試劑條和數(shù)據(jù)庫，試劑條通常包含20個微量生化試驗。目前系列提供的16個產(chǎn)品鑒定范圍涵蓋幾乎所有的細(xì)菌群，超過550個不同的種。第25頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日

第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器一、ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)API細(xì)菌鑒定系統(tǒng)（生物梅里埃）將操作繁瑣、解釋冗長的傳統(tǒng)方法微量化和標(biāo)準(zhǔn)化，將生化試驗試劑條和數(shù)據(jù)庫結(jié)合起來，使鑒定工作變得容易、快速和安全。這一創(chuàng)新得益于數(shù)值鑒定法的發(fā)展。第26頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第27頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第28頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第29頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日API細(xì)菌鑒定系統(tǒng)第30頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日ATCC成立于1925年，是世界上最大的生物資源中心，由美國14家生化、醫(yī)學(xué)類行業(yè)協(xié)會組成的理事會負(fù)責(zé)管理，是一家全球性、非盈利生物標(biāo)準(zhǔn)品資源中心。ATCC向全球發(fā)布其獲取、鑒定、保存及開發(fā)的生物標(biāo)準(zhǔn)品，推動科學(xué)研究的驗證、應(yīng)用及進(jìn)步。第31頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第32頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第33頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第34頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第35頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第36頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第37頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第38頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第39頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第40頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日（一）系統(tǒng)原理1．微生物數(shù)值編碼鑒定技術(shù)細(xì)菌的編碼鑒定法采用21項生化指標(biāo)，

每3項一組，共7組。每組3項生化試驗，陽性結(jié)果數(shù)值分別記為1、2、4，反應(yīng)陰性者記為0，爾后，分別將各組數(shù)值相加，依次組成一組7位數(shù)值的編碼，即代表所鑒定的菌株的相應(yīng)菌名。查《革蘭氏陰性桿菌新編碼鑒定手冊》中的檢索表，找出這7位數(shù)碼相對應(yīng)的菌名。一、ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器第41頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日一、ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器第42頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日（一）系統(tǒng)原理2．微生物快速生化反應(yīng)技術(shù)通過實驗總結(jié)不同的細(xì)菌與不同物質(zhì)反應(yīng)規(guī)律，設(shè)計獨特的培養(yǎng)基通過與未知細(xì)菌反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果鑒定出細(xì)菌。一、ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器第43頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)原理

選擇識別力最強的發(fā)酵試驗、同化試驗、抑制試驗、酶試驗和其他傳統(tǒng)的生化反應(yīng)，經(jīng)過優(yōu)化，組成由32個反應(yīng)聯(lián)合的專一鑒定試劑條。采用8進(jìn)位制細(xì)菌數(shù)碼分類法，整個鑒定條10-11位數(shù)的生物數(shù)碼，與標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫分類單位比較，得到相似系統(tǒng)和鑒定值，并計算模式頻率T值(Tindex)，T值越接近1代表該細(xì)菌與典型菌株反應(yīng)模式越接近。第44頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)第45頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日ATBExpression細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀由閱讀器、數(shù)字顯示電子比濁儀、電子連續(xù)加樣器、電腦及打印機組成。

第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器一、ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)第46頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)閱讀器能以比色及比濁模式操作，能掃描試劑條條碼，自動判斷出試條的種類。計算機根據(jù)閱讀器檢測到的結(jié)果自動調(diào)用相應(yīng)試劑條數(shù)據(jù)庫，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得出生化/同化結(jié)果（數(shù)值編碼）和藥敏試驗結(jié)果。第47頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)系統(tǒng)將所得編碼跟數(shù)據(jù)庫的典型菌株生化譜比較，以客觀的2個參數(shù)（鑒定百分率及T值）計算鑒定結(jié)果。第48頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日一、ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器主要操作程序：

1、用光電比濁儀配制菌懸液，將待檢菌液濃度調(diào)節(jié)至各試條要求的范圍。

2、將試條置入普通培養(yǎng)箱35℃培養(yǎng)4或24h。

3、將試條置入讀數(shù)器讀數(shù)，并打印報告。報告內(nèi)容包括細(xì)菌鑒定、藥敏試驗S、I、R（部分試條含MIC）的結(jié)果，有豐富的專家系統(tǒng)信息，嚴(yán)格控制報告質(zhì)量。第49頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)

鑒定試條包含風(fēng)干底物的反應(yīng)孔，將標(biāo)準(zhǔn)濁度的菌液接種于反應(yīng)孔，于指定溫度培養(yǎng)4h/24h后，即可上ATBExpression儀器閱讀及分析各生化孔的數(shù)據(jù)。第50頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)操作步驟第51頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日ATBExpression細(xì)菌鑒定系統(tǒng)結(jié)果檢測第52頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日ATBExpression細(xì)菌鑒定及藥敏智能系統(tǒng)

①包括單核增生李斯特菌在內(nèi)的6種李斯特菌；

②包括空腸彎曲菌在內(nèi)的18種彎曲菌；

③包括蠟樣芽孢桿菌、炭疽桿菌在內(nèi)的24種需氧芽孢桿菌；

④包括淋球菌在內(nèi)的10種奈瑟氏菌和嗜血桿菌；

⑤52種乳酸桿菌。第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器第53頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日一、ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器3．反應(yīng)結(jié)果自動檢測查詢技術(shù)第54頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日（二）系統(tǒng)鑒定的特點一、ATBExpression細(xì)菌鑒定智能系統(tǒng)第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器第55頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日二、全自動微生物快速鑒定儀器VITEK系統(tǒng)（一）系統(tǒng)工作原理（二）VITEK系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)組成（三）VITEK系統(tǒng)的特點（四）系統(tǒng)局限性第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器第56頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日二、全自動微生物快速鑒定儀器VITEK系統(tǒng)

Vitek全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)

原理：采用光電技術(shù)、電腦技術(shù)和細(xì)菌八進(jìn)位制數(shù)碼鑒定相結(jié)合。每個鑒定卡內(nèi)含有30項生化反應(yīng)，每三項為一組，各確立陽性反應(yīng)值分別為1，2，4。第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器第57頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器二、全自動微生物快速鑒定儀器VITEK系統(tǒng)（一）系統(tǒng)工作原理

VITEK對細(xì)菌的鑒定是以每種細(xì)菌的微量生化反應(yīng)為基礎(chǔ)，不同種類的VITEK試卡(檢測卡)含有多種生化反應(yīng)孔，可達(dá)30種。第58頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日二、全自動微生物快速鑒定儀器VITEK系統(tǒng)

Vitek全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)

原理：30項生化反應(yīng)可獲取10位數(shù)生物數(shù)碼。讀數(shù)器每隔30min對每一試卡讀數(shù)一次，對各反應(yīng)孔底物進(jìn)行光掃描，動態(tài)觀察反應(yīng)變化，一旦試卡內(nèi)終點指示孔到達(dá)臨界值，指示反應(yīng)完成，系統(tǒng)將最后一次判讀的結(jié)果所得生物數(shù)碼與菌種庫標(biāo)準(zhǔn)菌生物模型相比較，經(jīng)矩陣分析得出鑒定值和鑒定結(jié)果，并自動打印報告。

第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器第59頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日二、全自動微生物快速鑒定儀器VITEK系統(tǒng)

Vitek全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)

這一類的鑒定系統(tǒng)主要有：ATB(法國梅里埃公司)、BIOLOG(美國BIOLOG)等，系統(tǒng)除了鑒定微生物外，也可進(jìn)行藥敏試驗。每一系統(tǒng)都有其分析特點，用戶可根據(jù)需要選用。第60頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日二、全自動微生物快速鑒定儀器VITEK系統(tǒng)

Vitek全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)

目前生產(chǎn)的檢測卡片有14種，如GNI+用于檢測革蘭氏陰性菌，GPI用于檢測革蘭氏陽性菌，其他還有檢測芽孢菌(BAC)、酵母菌(YBC)等。

第61頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器二、全自動微生物快速鑒定儀器VITEK系統(tǒng)（一）系統(tǒng)工作原理VITEK卡(檢測卡)第62頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器二、全自動微生物快速鑒定儀器VITEK系統(tǒng)（二）VITEK系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)組成1．檢測卡

2．充填機

3．讀數(shù)器/恒溫箱

4．電腦/打印機

5．電源穩(wěn)壓器和UPSVITEK微生物鑒定系統(tǒng)第63頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日VITEK自動化微生物分析儀由充填機/封口機、讀取器/恒溫器、電腦主機及打印機組成，充填機/封口機三分鐘內(nèi)把樣本注入試驗卡中及封口；讀取器/恒溫箱自動恒定培養(yǎng)溫度并同時讀取卡內(nèi)生化反應(yīng)變化（系統(tǒng)依據(jù)不同型號，容納60至480張卡不等），電腦主機負(fù)責(zé)分析資料的儲存、系統(tǒng)的操作及分析程式的運作。第64頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器二、全自動微生物快速鑒定儀器VITEK系統(tǒng)（三）VITEK系統(tǒng)的特點1、可鑒定405種細(xì)菌。2、可對澄清液體中的微生物進(jìn)行計數(shù)。3、可測定細(xì)菌生長曲線。第65頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日二、全自動微生物快速鑒定儀器VITEK系統(tǒng)VITEK試卡的反應(yīng)池內(nèi)含風(fēng)干底物。試卡由標(biāo)準(zhǔn)濃度菌液充填，然后放入測試槽內(nèi)，讀取器每小時量度卡片內(nèi)樣本在培養(yǎng)介質(zhì)內(nèi)生長變化值，直至最后結(jié)果打印出來.第66頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日（1）選擇并標(biāo)記測試卡；（2）配置菌懸液；（3）充填測試卡：將彎形塑料吸管與測試卡充液口相連，吸管另一端浸入已調(diào)好濁度的菌懸液中，放入VITEK32的接種充液箱中，開啟充液箱電源，自動充液，關(guān)閉充液電源，取出測試卡，去除塑料吸管，用塑料封口塞封住測試卡充液口。

（4）測試卡上機

：打開VITEK32讀數(shù)器/孵育箱門，將已編號及吸好樣本的鑒定卡和藥敏卡插入試卡架中；（5）打開讀書器進(jìn)行讀數(shù)；（6）給出檢測結(jié)果報告。第67頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日二、全自動微生物快速鑒定儀器VITEK系統(tǒng)（四）系統(tǒng)局限性第一節(jié)全自動微生物鑒定儀器

生化反應(yīng)結(jié)果同時相似于數(shù)據(jù)庫中的2個菌，且產(chǎn)生可接受的絕對相似值，使2種菌間難于區(qū)分，需加一些試驗方可確定其最后鑒定。第68頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第二節(jié)全自動微生物總數(shù)和大腸桿菌快速測定儀器一、微生物總數(shù)快速測定儀二、ISO－GRID檢測系統(tǒng)三、大腸桿菌快速測定儀第69頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第二節(jié)全自動微生物總數(shù)和大腸桿菌快速測定儀器

一、微生物總數(shù)快速測定儀（ATP熒光儀）（一）原理（二）微生物總數(shù)快速測定儀的特點（三）結(jié)構(gòu)組成（四）操作步驟（五）特點第70頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第二節(jié)全自動微生物總數(shù)和大腸桿菌快速測定儀器

一、微生物總數(shù)快速測定儀（ATP熒光儀）

（一）原理

ATP是存在于所有活體細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)物質(zhì)，微生物能量的主要載體。ATP的量和活細(xì)胞體的活性、種類和數(shù)量呈一定的比例。ATP可以和熒光素相互作用發(fā)出生物光，光的強度和微生物的數(shù)量呈一定的比例關(guān)系。通過檢測生物光的強度可反映微生物的量。第71頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日（一）原理第72頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日（一）原理第73頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第二節(jié)全自動微生物總數(shù)和大腸桿菌快速測定儀器

一、微生物總數(shù)快速測定儀（ATP熒光儀）（二）微生物總數(shù)快速測定儀的特點

可在1min內(nèi)完成檢測，得出結(jié)果，可測定好氧、鐵細(xì)菌、氮硝化菌、硫酸鹽還原菌、酵母菌、藻類。第74頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第二節(jié)全自動微生物總數(shù)和大腸桿菌快速測定儀器

一、微生物總數(shù)快速測定儀（ATP熒光儀）（三）系統(tǒng)組成

包括樣品過濾膜、ATP生物熒光反應(yīng)器、熒光增強及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。第75頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日（三）結(jié)構(gòu)組成第76頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日（四）操作步驟第77頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日（四）操作步驟第78頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日（四）操作步驟第79頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日（四）操作步驟第80頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第81頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第82頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第83頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日（五）特點第84頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日危害分析的臨界控制點第85頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第二節(jié)全自動微生物總數(shù)和大腸桿菌快速測定儀器

二、ISO-GRID檢測系統(tǒng)

ISO-GRID檢測系統(tǒng)是一種基于疏水性網(wǎng)膜（HGMF）的過濾系統(tǒng)。該系統(tǒng)通過使用這種有1600個小方格的濾膜，來對微生物進(jìn)行檢測或計數(shù)。第86頁，共96頁，星期日，2025年，2月5日第二節(jié)全自動微生物總數(shù)和大腸桿菌快