新生物制品審批辦法

新生物制品審批方法

《新生物制品審批方法》于1999年3月26日經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局局務(wù)會審議通過，現(xiàn)予發(fā)布。本規(guī)定自1999

年5月1日起施行。

一九九九

年四月二十二日

新生物制品審批方法

第一章總那么

第一條根據(jù)《中華人民共和國藥品管理法》、《中華人民共和國藥品管理法實施方法》

的規(guī)定，為加強新生物制品研制和審批的管理，特制定本方法。

第二條生物制品是應(yīng)用普通的或以基因工程、細胞工程、蛋臼質(zhì)工程、發(fā)醉工程等生

物技術(shù)獲得的微生物、細胞及各種動物和人源的組織和液體等生物材料刎備，用于人類疾病

預(yù)防、治療和診斷的藥品。

第三條新生物制品系指我國未批準上市的生物制品；已批準上市的生物制品，當(dāng)改換

制備疫苗和生物技術(shù)產(chǎn)品的菌毒種、細胞株及其他重大生產(chǎn)工藝改革對制品的平安性、有效

性可能有顯著影響時按新生物制品審批。

第四條新生物制品審批實行國家一級審批制度。

第五條凡在中華人民共和國境內(nèi)進行新生物制品研究、生產(chǎn)、經(jīng)營、使用、檢定、審

批、監(jiān)督管理的單位和個人，都必須遵守本方法。

第二章新三物制品命名及分類

第六條新牛?物制品的命名應(yīng)遵照《中國生物制品規(guī)程》和藥品命名原那么的有美規(guī)定命

名。

第七條新生物制品分為五類：

第一類：國內(nèi)外尚未批準上市的生物制品。

第二類：國外已批準上市，尚未列入藥典或規(guī)程，我國也未進口的生物制品。

第三類：1.療效以生物制品為主的新復(fù)方制劑。

2.工藝重大改革后的生物制品。

第四類：1.國外藥典或規(guī)程已收載的牛?物制品。

2.已在我國批準進口注冊的生物制品。

3.改變劑里或給藥途徑的生物制品。

第五類：增加適應(yīng)癥的生物制品。

第三章新生物制品研制的要求

第八條新生物制品研制內(nèi)容，包括生產(chǎn)用菌毒種、細胞株、生物組織、生產(chǎn)工藝和產(chǎn)

品質(zhì)量標準、檢定方法、保存條件、穩(wěn)定性以及與制品平安性、有效性有關(guān)的免疫學(xué)、藥理

學(xué)、毒理學(xué)、藥代動力學(xué)等臨床前的研究工作和臨床研究。并根據(jù)研窕結(jié)果提出制造檢定規(guī)

程和產(chǎn)品使用說明書（草案）。

第九條新生物制品研制和生產(chǎn)要分別符合我國《藥品非臨床研究質(zhì)量管理標準》

1GLP）、《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理標準》（GMP）的有關(guān)規(guī)定。

第十條新生物制品研制過程一般分為以下幾個階段，各階段的要求如下。

1.實驗研究

包括應(yīng)用根底研究，生產(chǎn)用菌毒種或細胞株的構(gòu)建、選育、培養(yǎng)、遺傳穩(wěn)定性，生物組

織選擇，有效成分的提取、純化及其理化特性、生物特性的分析等研究，取得制造和質(zhì)量檢

定的根本條件和方法。

2.小量試制

根據(jù)實驗研究結(jié)果，確定配方、建立制備工藝和檢定方法，試制小批量樣品，進行臨床

前平安性和有效性的實驗，并制定制造與檢定根本要求。

3.中間試制

（D生產(chǎn)工藝根本定型，產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)率相對穩(wěn)定，并能放大生產(chǎn)。

（2）有產(chǎn)品質(zhì)量標準、檢定方法、保存穩(wěn)定性資料，并有測定效價用的參考品或?qū)φ掌贰?/p>

（3）提供自檢和中國藥品生物例品檢定所復(fù)檢合格，并能滿足臨床研究用量的連續(xù)三批

產(chǎn)品。

（4）制定較完善的制造檢定試行規(guī)程和產(chǎn)品使用說明書（草案）。

4.試生產(chǎn)

在試生產(chǎn)階段，完善生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標準及其檢定方法：同時按有關(guān)規(guī)定完成第IV期臨

床試驗、制品長期穩(wěn)定性研究和國家藥品監(jiān)督管理局要求進行的其他工作。

5.正式生產(chǎn)

按要求完成試生產(chǎn)期工作后，經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準轉(zhuǎn)入正式生產(chǎn)。

第四章新生物制品臨床研究申報與審批

第十一條申報新生物制品臨床研究，研制單位要填寫申請表（附件一），提交規(guī)定的

有關(guān)申報材料（附件二、三、四、五，其中保密資料按保密有關(guān)規(guī)定辦理），送所在省、自

治區(qū)、直轄市藥品監(jiān)督管理部門。省級藥品監(jiān)督管理部門對申報材料進行形式審查，并對研

制條件和原始資料進行現(xiàn)場核查，提出意見后，報送國家藥品監(jiān)督管理局審批.

第十二條除體外診斷試劑外，生物制品臨床研究須經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局審評、批準

前方可進行。臨床研窕用藥的生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標準應(yīng)與臨床前研究用藥一致。

1.預(yù)防用新生物制品臨床研究工作，由國家藥品監(jiān)督管理局指定的單位按照附件六、七

的技術(shù)要求和程序組織實施。

2.治療用新生物制品臨床研究參照新藥臨床研究的要求，須在國家藥品監(jiān)督管理局確定

的藥品臨床研究基地按《藥品臨床研究質(zhì)量管理標準》（GCP）的要求進行。

3.體外診斷用品的臨床研究，申報單位于申報前，須在三個以上省級醫(yī)療衛(wèi)生單位用其

他方法診斷明確的陽性、陰性標本（總數(shù)一般不少于1000例）考核其申報品種的特異性、

敏感性。申報后，根據(jù)需要由國家藥品監(jiān)督管理局指定單位做進一步的臨床考核。

4.人用鼠源性單克隆抗體、體細胞治療和基因治療的臨床研究申報和審批具體要求見附

件四、八、九。

5.【、H、H1期臨床試驗用藥由研制單位無償提供并承當(dāng)研究費用。IV期臨床試驗用藥

的提供和研究費用，由生產(chǎn)單位與承當(dāng)單位雙方商定；有明確規(guī)定者按有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

第十三條中外合作研制的新生物制品，合作雙方在國內(nèi)外實驗研究的資料和樣品均可

店于臨床研究申報。

第五章新芻物制品生產(chǎn)的申報和審批

第卜四條新生物制品HI期臨床試驗結(jié)束后，研制單位填寫申請表（附件卜三），提交

規(guī)定的有關(guān)申報資料（附件二），報送國家藥品監(jiān)督管理局審批，批準后發(fā)給新藥證書。

多家聯(lián)合研制的新生物制品，國家藥品監(jiān)督管理局批準后，給每個單位頒發(fā)研制單位聯(lián)

合署名的新藥證書。

第十五條多家聯(lián)合研制的新生物制品，第一類新生物制品允訐其中兩個單位生產(chǎn)：其

他類別的新生物制品允許?個單位生*。

第十六條申報生產(chǎn)新生物制品的企業(yè)，在經(jīng)過國家驗收符合GMP要求的車間內(nèi)連續(xù)生

產(chǎn)三批，經(jīng)中國藥品生物制品檢定所抽樣檢定合格，填報申請表（附件一二），提交新藥證

書、生產(chǎn)車間驗收文件?、中國藥品生物制品檢定所的檢定報告復(fù)印件，報國家藥品監(jiān)督管理

局審批，批準后，發(fā)給批準文號。第一類為“國藥試字SXXXXXXXX”，其中S代表

生物制品，其他類別的新生物制品除某些制品外均為“國藥準字sxxxxxxxx-o

第十七條更換生產(chǎn)用菌毒種或細胞的疫苗、牛.物技術(shù)產(chǎn)品或第基酸數(shù)目、順序等結(jié)構(gòu)

發(fā)生改變的生物技術(shù)產(chǎn)品以及需試產(chǎn)期考核的改變給藥途徑的產(chǎn)品核發(fā)試生產(chǎn)文號。

第十八條國藥試字新生物制品試生產(chǎn)期二年。試生產(chǎn)期滿3人月前，生產(chǎn)單位填寫申

請表（附件十四），提交規(guī)定的有關(guān)申報資料（附件二），報國家藥品監(jiān)督管理局審批：審批

期間，其試生產(chǎn)批準文號仍然有效。如有特殊情況，確需延長試生產(chǎn)期者，經(jīng)批準可延長試

生產(chǎn)期.批準轉(zhuǎn)正式生產(chǎn)的產(chǎn)品，發(fā)給新的批準文號為“國藥準字SXXXXXXXX”，

逾期未提出轉(zhuǎn)正式生產(chǎn)巾清或試產(chǎn)期滿未批準轉(zhuǎn)正式生產(chǎn)的產(chǎn)品原批準又號取消。

第十九條已批準上市的生物制品，經(jīng)過工藝重大改革，研究資料證明改革后的產(chǎn)品質(zhì)

量、平安性和有效性明顯提高者，按新生物制品審批后，發(fā)給新的批準又號，原工藝產(chǎn)品的

批準文號予以取消。其他單位采用新工藝時按新藥技術(shù)轉(zhuǎn)讓規(guī)定辦理。

第:十條凡新生物制品申報原料藥的，按本方法規(guī)定進行審批，核發(fā)新藥證書和批準

文號。

第二十一條新體外診斷試制，研制單位完成產(chǎn)品臨床考核，其連續(xù)三批產(chǎn)品（批量見

附件十二）經(jīng)中國藥品生物制品檢定所檢定合格后，填寫巾請表（附件一三），提交規(guī)定的

有關(guān)資料（附件二、四、十、十一）.報國家藥品監(jiān)督管理局審批，批準后，發(fā)新藥證書,

具備相應(yīng)生產(chǎn)條件者發(fā)批準文號。生*單位用外購的主要原材料制備的新體外診斷試劑，經(jīng)

批準，發(fā)批準文號,不發(fā)新藥證書。

第六章新生物物品制造檢定規(guī)程的轉(zhuǎn)正

第：十二條新生物制品生戶批準后，其制造檢定規(guī)程為試行規(guī)程。試行期第?類為三

年（含試生產(chǎn)期），其他類別為二年.

第二十三條試行期滿三個月前，生產(chǎn)企業(yè)填寫申請表（附件一五），提交規(guī)定的有關(guān)

申報資料（附件十六），報國家藥品監(jiān)督管理局。

第二十四條國家藥品監(jiān)督管理局責(zé)成中國生物制品標準化委員會對試行規(guī)程按規(guī)定的

要求和程序（附件十六）進行審式，提出制造檢定正式規(guī)程，報國家藥品監(jiān)督管理局審批、

發(fā)布。

第二十五條規(guī)程試行期滿，未提出轉(zhuǎn)正申請或未按要求補充材料的生產(chǎn)企業(yè)，國家藥

品監(jiān)督管理局取消其產(chǎn)品的批準文號,

第七章附那么

第二十六條本方法中體外診斷試劑指免疫學(xué)、微生物學(xué)、分子生物學(xué)等體外診斷試劑。

第二十七條抗生素、動物臟器制品按《新藥審批方法》管理.

第二十八條生物制品工藝重大改革的審查認定由中國藥品生物制品檢定所負責(zé)。

第二十九條治療用生物制品臨床研究的要求、新生物制品的技術(shù)轉(zhuǎn)讓、新生物制品研

制過程中違規(guī)處分等與《新藥審批方旅》規(guī)定類同的事項均參照《新藥日批方法》執(zhí)行。

第三十條本方法由國家藥品監(jiān)督管理局負責(zé)解釋。

第三十一條本方法自1999年5月1日起施行。

附件：

一、新生物制品臨床研究申請表

二、新生物制品申報資料工程

（一）治療用新生物制品中報資料工程

（二）預(yù)防用新生物制品中報資料工程

（三）體外診斷用品申報資料工程

三、人用重組DNA制品質(zhì)量控制要點

四、人用鼠源性單克隆抗體質(zhì)量控制要點

五、傳代細胞系生產(chǎn)生物制品規(guī)程

六、預(yù)防用新生物制品臨床研究的技術(shù)要求

七、預(yù)防用新生物制品臨床研究程序

八、人的體細胞治療申報臨床試驗指導(dǎo)原那么

九、人基因治療申報臨床試驗指導(dǎo)原那么

十、放射免疫分析藥盒申報資料工程及要求

十一、用于檢測病原體的體外核酸擴增（PCR）診斷試劑盒的申報、審評兩行方法

十：、體外生物診斷試劑報批批量最低要求

十三、新生物制品證書生產(chǎn)申請表

十四、新生物制品轉(zhuǎn)正式生產(chǎn)申請表

十五、新生物制品試行規(guī)程轉(zhuǎn)正申請表

十六、新生物制品試行規(guī)程轉(zhuǎn)正的具體要求

附件一：

新生物制品臨床研究申請表

名稱：

類別：

研究單位：國家藥品監(jiān)督管理局制

研制單位填報工程

I中文

名I

品名I英文

名

I漢語拼音

劑型I規(guī)格

組成成

份

及含

量

制

備

r

藝

適應(yīng)癥與用法

活

性

測

定

方

法

和

結(jié)

論

效力實

驗

或藥理

學(xué)

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和結(jié)

論

111

11

1

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1

1實驗室平安

11

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1性及毒

性

11

1

1研究工程及

11

1

1結(jié)

論1

1

11

1

111

1

11

1

11

1

11t1

1申請單

位

11111

I郵政編瑪

地址

I電話

I研制負責(zé)人I（簽字）I日期I年月日I

附件二：

新生物制品申報資料工程

（-）治療用新生物制品申報資料工程

1.新生物制品臨床研究申請表，附中檢所復(fù)檢報告

2.研究工作總結(jié)

3.新制品名稱、選題目的和依據(jù)、國內(nèi)外有關(guān)方面研究現(xiàn)狀（包括專利）、生產(chǎn)和使用

情況綜述及主要參考文獻

4.生產(chǎn)用菌毒種來源、歷史、全面檢定及鑒別資料和傳代限度試驗資料；或工程菌（細

服）構(gòu)建的詳細資料，包括目的基因的獲得、表達載體詳細結(jié)構(gòu)、宿主茵（細胞）基因型、

表型特征等；或雜交瘤株建株詳細資料

5.生產(chǎn)用原材料質(zhì)控要求的々.關(guān)資料

6.生產(chǎn)工藝研究及確定的有關(guān)資料

7.中試產(chǎn)品質(zhì)量研究總結(jié)資料,包括生物活性測定方法試驗研究資料

8.工作參考品或?qū)φ掌返闹苽浼皺z定資料

9.培養(yǎng)及生產(chǎn)過程中使用對人有潛在毒性物質(zhì)的檢查資料

10.生產(chǎn)用動物合格證明，研制和中試車間面積、凈化、工藝走向圖紙，制備和檢定用主

要儀器、設(shè)備等情況，省級藥品監(jiān)督管理部門核實蓋章

1L與國內(nèi)外同類產(chǎn)品質(zhì)量比擬資料

12.內(nèi)包裝材料及選擇的依據(jù)

13.供臨床研究用連續(xù)三批中試產(chǎn)品的制造和檢定原始記錄

14.中試產(chǎn)品制造和檢定規(guī)程草案及起草說明

15.至少三批中試產(chǎn)品初步穩(wěn)定性試驗資料

16.制劑的處方、工藝及處方依據(jù)，輔料的來源及質(zhì)量標準，有關(guān)文獻資料等

17.目的基因核甘酸序列、表達質(zhì)粒酶切圖譜以及特異性鑒別資料

18.目的基因表達產(chǎn)物結(jié)構(gòu)確證資料，包括氨基酸組成分析、N末端15個氨基酸及C末

端1?2個氨基酸序列分析、肽圖分析、圓二色光譜分析等，或單抗特異性、親和力、活性

等試驗資料

19.原始種子庫和生產(chǎn)種子庫建庫資料以及貯存復(fù)蘇過程中宿主載體表達系統(tǒng)遺傳、表

達穩(wěn)定性試驗資料，或雜交瘤細胞株分泌抗體穩(wěn)定性試驗資料

20.生產(chǎn)用種子庫外源因子檢查（細菌、真菌、支原體和病毒）、細胞基質(zhì)外源因子檢查、

核型分析及致瘤性試驗資料

21.與治療作用有關(guān)的動物主要藥效學(xué)研究資料及文獻資料

22.動物一般藥理學(xué)研究資料及文獻資料

23.動物藥代動力學(xué)研究資料及文獻資料

24.動物急性（單劑量）毒性研究資料及文獻資料

25.動物長期（重復(fù)給藥）毒性研究資料及文獻資料

26.動物局部用藥毒性研究資料及文獻資料

27.復(fù)方制劑中多種組分對動物藥效或毒性影響的研究資料及文獻資料

28.遺傳毒性研究資料及文獻資料

29.生殖帚性研究資料及文獻資料

30.致癌研究資料及文獻資料

31.藥物依賴性研究資料及文獻資料

32.免疫毒性和/或免疫原性研究資料及文獻資料

33.供臨床醫(yī)師參閱的臨床前藥理毒理研究結(jié)論綜述及擬進行的臨床研究方案及有關(guān)文

就資料

34.新生物制品證書、生產(chǎn)申請表，附臨床研究批件

35.臨床藥代動力學(xué)的研究資料及文獻資料

36.臨床研究負責(zé)單位總結(jié)的臨床研究資料，并附各臨床研究單位的分報告等資料

37.制定保存條件及效期的穩(wěn)定性試驗資料

38.連續(xù)三批試產(chǎn)品原始制檢記錄及中檢所復(fù)核報告

39.制造和檢定試行規(guī)程及起草說明

40.內(nèi)包裝材料及選擇的依據(jù)

41.使用說明書及包裝、標簽樣稿

42.臨床研究批件要求完成工作的完成情況及試驗資料

43.生產(chǎn)用原材料、試劑、化學(xué)藥品的規(guī)格及標準

44.生產(chǎn)車間的GMP認證證書

45.臨床前研究工作簡要總結(jié)

46.新生物制品轉(zhuǎn)正式生產(chǎn)申請表，附試生產(chǎn)批件、制造和檢定試行規(guī)程、使用說明書

47.N期臨床研究總結(jié)資料，并附各臨床研究單位的分報告等資料

48.試生產(chǎn)批件上要求完成工作的完成情況及試驗資料

49.試生產(chǎn)工作總結(jié)，包括試生產(chǎn)概況、產(chǎn)量及全面質(zhì)量檢定結(jié)具等

50,連續(xù)3?5批試制品的原始制檢記錄及中檢所復(fù)檢報告

51.修改后的制造及檢定試行規(guī)程和使用說明書，以及修改說明并提供有關(guān)試驗資料

52.連續(xù)3?5批試制品的穩(wěn)定性考核資料及所有試制品留樣考核結(jié)果總結(jié)

關(guān)于申報資料工程的幾點說明：

1.不包括基因治療和體細胞治療制劑。

2.每份研究資料后面都應(yīng)注明試驗設(shè)計者、試驗參加者、試驗單位、試驗日期、原始資

料保存處和聯(lián)系人等。

3.藥學(xué)：

1）常規(guī)方法生產(chǎn)制品申報臨末資料需報資料1?16項，采用DNA重組技術(shù)或雜交瘤技

術(shù)制備制品尚需申報17?20項（I、U類制品）：申報新藥證書、試生產(chǎn)需報資料34?45

項：轉(zhuǎn)正式生產(chǎn)需報資料46?52項。13項中應(yīng)說明試制和檢定用主要儀器、設(shè)備、環(huán)境條

件等。

2）血液制品尚需增加病毒滅活工藝驗證，請參照“血液制品去除或滅活病毒方法及其

驗證和論證程序”。

3）特殊申請申報資料根據(jù)不司品種而定。

4）單抗及修飾單抗詳細要求參照“人用鼠源性單克隆抗體質(zhì)量控制要點”。

5）111、IV類制品根據(jù)重大生聲工藝改革情況或劑型、途徑改變情況而減少申報工程。

6）V類制品主要申報1?3和41項。

4.藥理毒理研究：

1）許多新生物制品具有較強的種屬特異性、免疫原性等生物學(xué)特性，因此，申報資料的

21?33項，對某些新生物制品可能涉及到選擇相關(guān)動物種屬（指受試物在此類動物體內(nèi)能

逃過表達的受體或抗原決定簇產(chǎn)生藥理活性）進行體內(nèi)外試驗。有時只能確定一種相關(guān)動物

壓于試驗。如確無可供選擇的相關(guān)動物種屬，應(yīng)考慮使用表達人源受體的相關(guān)轉(zhuǎn)基因動物或

使用同系蛋白。

2）未經(jīng)修飾的人源性血液制品和特異性免疫球蛋白，可免報平安性研究資料（不包括復(fù)

方制品）：微生態(tài)制品只需做一般平安試驗，其他平安性研究資料可免技。

3）人體內(nèi)用單克隆抗體的有關(guān)申報資料的毒理研究要求，可參考“人用鼠源性單克隆抗

體質(zhì)量控制要點”（附件四）中有關(guān)臨床前研究局部。

4）對第28項的說明：常規(guī)使用的遺傳毒性研究方法不適用于生物技術(shù)藥物，因此可免

做。但如果對產(chǎn)品有某些擔(dān)憂（例如結(jié)合蛋白產(chǎn)品中存在有機聯(lián)接物），應(yīng)考慮用相關(guān)的或

新建立的方法進行研究。

5）對第29項的說明：可根據(jù)女品的情況、臨床適應(yīng)癥和預(yù)期使月的病人群體決定是否

進行該項研究。

6）對第30項的說明：常規(guī)使用的致癌研究方法一般不適用于生物技術(shù)藥物，然而有些

如生長因廣、免疫抑制劑等產(chǎn)品，應(yīng)根據(jù)臨床用藥時間、病人群體和生物活性對其進行潛在

致癌性的評價。如具有加強或誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化細胞增生和克隆擴增潛力的產(chǎn)品燈能具有致瘤性，可

無相關(guān)的惡性或正常細胞和動物模型進行研究。

7）對第32項的說明：免疫毒性研究主要考察擬用于刺激或抑制免疫系統(tǒng)的某些生物技

術(shù)藥物，因其可能影響細胞介導(dǎo)的免度或改變靶細胞外表抗原的表達（可能導(dǎo)致自身免疫）。

免疫毒理學(xué)評價的一個方面還應(yīng)包括評價潛在的免疫原性，許多生物技術(shù)藥物對動物行

免疫原性，其評價可在市豆給藥毒性試驗中檢測抗體以助說明。

一般對■蛋白質(zhì)產(chǎn)品呈陽性的豚鼠過敏試驗結(jié)果不能預(yù)測人體反響，因此，對這類產(chǎn)品進

行該試驗無必要。

8）對申報資料21?33項的有關(guān)具體技術(shù)要求可進一步參考“藥理毒理申報資料技術(shù)要

求”指導(dǎo)原那么的有關(guān)章節(jié)。

9）第五類制品主要中報21、22、24、25、26、33項（延長用藥周期和/或增加劑量者）。

（二）預(yù)防用新生物制品中報資料工程

1.新生物制品臨床研究申請表，附中檢所復(fù)檢報告

2.研究工作總結(jié)

3.新制品名稱、選題目的和依據(jù)、國內(nèi)外有關(guān)方面研究現(xiàn)狀（包括專利）、生產(chǎn)和使用

情況綜述及主要參考文獻

4.生產(chǎn)用菌、毒種來源、歷史、全面檢定及鑒別資料和傳代限度成驗資料

5.生產(chǎn)用菌、毒種毒力（或毒性）及毒力穩(wěn)定性、傳代限度試驗研究資料

6.生產(chǎn)用菌、毒種原始種子庫和生產(chǎn)種子庫建庫及保存條件、貯存資料

7.生產(chǎn)用菌、毒種原始種子庫和生產(chǎn)種子庫外源因子檢查資料（細菌、真菌、支原體和

病毒）

8.細胞基質(zhì)外源因子檢查、核型分析及致瘤性試驗資料以及傳代使用代次限度試驗資料

9.抗原性試驗研究資料

10.免疫原性或效力試驗研究資料

1L過敏原性研究資料

12.生產(chǎn)工藝確定及質(zhì)量檢定方法研究資料

13.中試產(chǎn)品質(zhì)量及產(chǎn)量全面總結(jié)資料

14.參考品或?qū)φ掌分苽浼皺z定資料

15.至少三批中試產(chǎn)品初步穩(wěn)定性試驗資料

16.培養(yǎng)及生產(chǎn)、純化過程中參加對人有潛在毒性物質(zhì)檢查資料

17.供臨床研究用連續(xù)三批中試產(chǎn)品的制造和檢定原始記錄

18.中試產(chǎn)品制造和檢定規(guī)程草案及起草說明

19,擬進行的臨床研究方案及有關(guān)文獻資料

20.生產(chǎn)用動物合格證明，研制和中試車間面積、凈化、工藝走向圖紙，制備和檢定用主

要儀器、設(shè)備等情況，省級藥品監(jiān)督管理部門核實蓋章

21.與原制品比擬資料

22.內(nèi)包裝材料及選擇的依據(jù)

23.工程菌（細胞）構(gòu)建的詳細資料，包括目的基因的獲得、表達載體詳細結(jié)構(gòu)、宿主

M（細胞）基因型、表型特征等

24.原始種子庫和生產(chǎn)種子庫建庫資料以及貯存復(fù)蘇過程中宿主我體表達系統(tǒng)穩(wěn)定性試

驗資料

25.目的基因核昔酸序列及酶切圖譜以及特異性鑒別資料

26.目的基因表達產(chǎn)物結(jié)構(gòu)確證資料，包括氨基酸組成分析、N末端15個氨基酸及C末

端1?2個氨基酸序列分析、肽圖分析等

27.剩余人D\A含量、宿主蛋白剩余量測定

28.新生物制品證書、生產(chǎn)申請表，附臨床研究批件

29.臨床研究負責(zé)單位總結(jié)的臨床研究資料，并附各臨床研窕單位的分報告等資料

30.制定保存條件及效期的穩(wěn)定性試驗資料

31.連續(xù)三批試產(chǎn)品原始制檢記錄及中檢所復(fù)核報告

32.制造和檢定試行規(guī)程及起草說明

33.內(nèi)包裝材料及選擇的依據(jù)

34.使用說明書及包裝、標簽樣稿及有關(guān)說明

35.臨床研究批件要求完成工作的試驗資料

36.生產(chǎn)用原材料、試劑、化學(xué)藥品的規(guī)格及標準

37.試生產(chǎn)車間的GMP認證證書

38.臨床前研究工作簡要總結(jié)

39.新生物制品轉(zhuǎn)正式生產(chǎn)申請表，附試生產(chǎn)批件、制造和檢定試行規(guī)程、使用說明書

40.IV期臨床研究總結(jié)資料，并附各臨床研究單位的分報告等資料

41.試生產(chǎn)批件上要求完成工作的試驗資料

42.試生產(chǎn)工作總結(jié)，包括試生產(chǎn)概況、產(chǎn)量及全面質(zhì)量檢定結(jié)具等

43.連續(xù)3?5批試制品的原始制檢記錄及中檢所復(fù)檢報告

44.修改后的制造及檢定試行規(guī)程和使用說明書，以及修改說明并提供有關(guān)試驗資料

45.連續(xù)3?5批試制品的穩(wěn)定性考核資料及所有試制品留樣考核結(jié)果總結(jié)

說明：

1.不包括DNA疫苗。

2.每份研究資料后面都應(yīng)注明試驗設(shè)計者、試驗參加者、試驗單位、試驗日期、原始資

料保存處和聯(lián)系人等。

3.臨床研究申請：用常規(guī)方法制備菌苗、疫苗、類毒素申報資料1?22項，用DNA重組

技術(shù)產(chǎn)品尚需增加申報23?27項。

4.新生物制品證書、試生產(chǎn)巾請需報28?38項：轉(zhuǎn)正式生產(chǎn)申請需報39?45項。

（三）體外診斷用品申報資料工程

1.新生物制品證書/生產(chǎn)申請表。

2.研究工作總結(jié)。

3.新體外診斷用品的名稱，選題目的和依據(jù)，國內(nèi)外有關(guān)的研究現(xiàn)狀及生產(chǎn)使用情況綜

述及主要參考文獻資料，專利檢索資料。

4.產(chǎn)品的研制報告：包括原材料的選擇、制造，生產(chǎn)工藝過程確實定，成品質(zhì)控標準的

建立，成品性能評價（靈敏度,特異性精密度等），與國內(nèi)外同類產(chǎn)品進行比擬等試驗資料。

5.連續(xù)生產(chǎn)三批產(chǎn)品的原始制造檢定記錄復(fù)印件，及中國藥品生物制品檢定所對這三批

產(chǎn)品進行檢定的報告書。

6.穩(wěn)定性試驗資料：至少三批產(chǎn)品在儲存溫度條件下保存至效期后兩個月的試驗資料，

及37c保存的試驗資料。檢測工程應(yīng)按成品檢定標，準進行。

7.臨床使用考核資料：選擇三家以上省級醫(yī)療衛(wèi)生單位用統(tǒng)一的方案進行考核，提供一

份總的臨床考核總結(jié)報告及各單位的分報告，附臨床考核原始數(shù)據(jù)。病例數(shù)一般不少于1000

例，非常見病可酌減，但要有統(tǒng)計學(xué)位義。

8.制造檢定規(guī)程草案：參照《中國生物制品規(guī)程》的格式書寫。

9.使用說明書：包括中英文名稱，規(guī)格，前言（原理、用途、特點），試劑盒組份、操作

步麻，結(jié)果判定，考前須知，保存條件及有效期，生產(chǎn)單位名稱、地址、、等。

10.包裝材料及各組份標簽實物或樣稿。

11.《藥品生產(chǎn)企業(yè)許可證》豆印件。生產(chǎn)車間驗收文件復(fù)印件。

12.轉(zhuǎn)正式生產(chǎn)申請報告。

13.原批準的試生產(chǎn)批件及試行制檢規(guī)程、使用說明書。

14.試生產(chǎn)期間完善生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)、銷售情況總結(jié)及臨床使用情況分析總結(jié)。

15.對試生產(chǎn)批件中耍求進行的研究工作完成情況的總結(jié)。

16.提供重新修改的產(chǎn)品制檢規(guī)程和使用說明書。

17.中國藥品生物制品檢定所對連續(xù)試生產(chǎn)的三批樣品的檢定報缶書及原始生產(chǎn)制造檢

定記錄復(fù)印件。

關(guān)于申報資料工程的幾點說明：

1.自制原材料為單克隆抗體或基因工程產(chǎn)品，申報資料要求參照附件三、四。

2.放射免疫分析藥盒申報資料工程及要求見附件十。

3.用于檢測病原體的體外核酸擴增（PCR）診斷試劑盒申報資料工程及要求見附件十一。

4.體外診斷用品證書/生產(chǎn)中請需報1-11項，試生產(chǎn)轉(zhuǎn)正式生產(chǎn)申請需報12?17項。

5.試劑盒檢定所用的參比品由中國藥品生物制品檢定所提供和/或認可。

6.CUTOFF值確實定：正常人標本測定人數(shù)應(yīng)在400人份以上，所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理。

7.評價體外診斷試劑盒試驗標準應(yīng)包括兩方面：真實性和可靠性。

①真實性(Validity)：真實性指測量值9實際值符合的程度。(診斷試驗應(yīng)能提供哪些

人確實有病(真陽性)和哪些人確實無病(真陰性)的指標，這是試驗的真實性)。評價真

實性的兩個指標:靈敏度(Sensitivity)及特異度(Specificity)o

靈敏度是試臉檢出有病(即陽性)的人占病人總數(shù)的比例，即真陽性率。特異度指試驗

檢出無病(即陰性)的人占無病者總數(shù)的比例，即真陰性率。

表評價一個試驗真實性的資料歸納表

試驗有病(真陽性)無病(具陰性)合V

陽性AB

A+B

陰性CD

C+D

總數(shù)A+CB+DA+B

+C+D

用以下公式表示：

靈敏度(真陽性率)=A/(A+CjX100%

特異度(其陰性率)=D/(B+DjX100%

假陽性率=1^(出口)乂100%

假陰性率=C/(A+C)X100%

除上述指標外，還可計算以下幾種指標：

1)粗一致性(Crudeagreement)=(A+D)/(A+B+C+D)X100%

2)調(diào)整一致性(adjustedagreement)=1/4{A/(A+B)+A/G\+C)+D/(C+D)+D/(B+D)X100%}

以上兩個指標均說明診斷試驗陽性與羽性結(jié)果均正確的百分比，亦反映試驗的真實性。

3)約登指數(shù)(youden'sindex)=A/(A+C)+D/(B+D)T約登指數(shù)是將靈敏度與特異度之

和減1,指數(shù)可從0?1。約登指數(shù)愈大，其真實性亦愈大。

②可靠性(reliability)：可靠性是指試驗在相同條件下重復(fù)試驗獲得相同結(jié)果的穩(wěn)定

程度。如試驗結(jié)果為均數(shù)，可用變異系數(shù)(coefficientofVariation)表示。公式為

CV=S/XX100%

S為標準差，X為平均值

③預(yù)示值(Predictivevalue)：預(yù)示值是說明試驗的診斷價值。試驗陽性的預(yù)示值是

指試驗陽性者中患病者(真陽性)的可能性；試驗陰性的預(yù)示值是指試驗陰性者中為非病人

(真陰性)的可能性?？捎靡韵鹿奖硎荆?/p>

陽性試驗的預(yù)示值=A/(A+B)X100%

陰性試驗的預(yù)示值=D/(C+D)X100%

附件三：

人用重組DNA制品質(zhì)量控制要點

1.引言

由于分子遺傳學(xué)、核酸化學(xué)及重組D\A（rDNA）技術(shù)的迅速開展，現(xiàn)已能夠確定和獲得許

多天然活性蛋白的編碼基因，將其插入表達載體或引入某種宿主細胞后，能有效地表達該基

優(yōu)產(chǎn)物，再經(jīng)別離、純化和檢定，可得到用于偵防和治療某些人類疾病的制品，諸如現(xiàn)有的

乙型肝炎疫苗、胰島素、生長激素、干擾素等。

用不同于常規(guī)方法的rDNA技術(shù)生產(chǎn)的制品，是近年來出現(xiàn)的新產(chǎn)品，評價其平安性和

有效性亦不同于常規(guī)方法。目前在這方面的生產(chǎn)和質(zhì)量控制經(jīng)驗不多，而且這一領(lǐng)域中的知

法和技術(shù)還在不斷開展，但是，為了有利于這類制品在我國的研究和開展，并為這類制品的

審評提供依據(jù)，有必要制定一個原那么性指導(dǎo)文件，以保證在人群中試驗或應(yīng)用時平安有效。

本“質(zhì)量控制要點”（以下簡稱《要點》）不可能面面俱到，可能有許多專門技術(shù)問題會

出現(xiàn)，對于這類問題或某一特定制品，那么應(yīng)視具體問題具體研究決定。本《要點》亦將隨科

學(xué)技術(shù)開展和經(jīng)驗積累而逐步完善。

2.總那么

2.1本《要點》適用于rDNA技術(shù)生產(chǎn)并在人體內(nèi)應(yīng)用的制品。

2.2凡屬與一般生物制品有關(guān)的質(zhì)量控制，均按現(xiàn)行《中國生物制品規(guī)程》執(zhí)行。

有關(guān)生產(chǎn)設(shè)施的要求應(yīng)參照國家藥品監(jiān)督管理局《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理標準》1999年版

執(zhí)行。

3.質(zhì)量控制要求

3.1原材料的控制

表達載體和宿主細胞

應(yīng)提供有關(guān)表達載體詳細資料，包括基因的來源、克隆和鑒定，表達載體的構(gòu)建、結(jié)構(gòu)

和遺傳特性。應(yīng)說明載體組成各局部為來源和功能，如復(fù)制子和啟動子天源，或抗生素抗性

標志物。提供至少包括構(gòu)建中所用位點的海切圖譜。應(yīng)提供宿主細胞的資料，包括細胞株（系）

名稱、來源、傳代歷史、檢定結(jié)果及根本生物學(xué)特性等。

應(yīng)詳細說明載體引入宿主細胞的方法及載體在宿主細胞內(nèi)的狀態(tài)，是否整合到染色體

內(nèi)，拷貝數(shù)。應(yīng)提供宿主和載體結(jié)合后的遺傳穩(wěn)定性資料。

3.1.2克隆基因的序列

應(yīng)提供插入基因和表達載體兩側(cè)端控制區(qū)的核甘酸序列。所有與表達有關(guān)的序列均應(yīng)詳

細表達。

表達應(yīng)詳細表達在生產(chǎn)過程中，啟動和控制克隆基因在宿主細胞中的表達所采用

的方法及表達水平。

3.2生產(chǎn)的控制

主細胞庫（MASTERCELLBANK）

rDNA制品的生產(chǎn)應(yīng)采用種子批（SEEDLOT）系統(tǒng)。從已建立的主細胞庫中，再進一步

建立生產(chǎn)細胞庫（WCB）。

含表達載體的宿主細胞應(yīng)經(jīng)過克隆而建立主細胞庫。在此過程中，在同一實驗室工作區(qū)

內(nèi)，不得同時操作兩種不同細胞（菌種）：一個工作人員亦不得同時操作兩種不同細胞或菌

種。

應(yīng)詳細記述種子材料的來源、方式、保存及預(yù)計使用壽命。應(yīng)提供在保存和復(fù)蘇條件卜.

宿主載體表達系統(tǒng)的穩(wěn)定性證據(jù)。采用新的種子批時，應(yīng)重新作全面檢定。

高等真核細胞用于生產(chǎn)時，組胞的鑒別標志，如特異性同功酶或免疫學(xué)或遺傳學(xué)特征，

對鑒別所建立的種子是有用的。有關(guān)圻用傳代細胞的致腫瘤性應(yīng)有詳細報告（參照：陽0生

物制品規(guī)程No.37）。如采用微生物培養(yǎng)物為種子，那么應(yīng)表達其特異表型特征。

一般情況下，在原始種子階段應(yīng)確證克隆基因的DNA序列。但在某些情況下，例如傳代

細胞基因組中插入多拷貝基因。在此階段不適合對克隆基因作DNA序列分析。在此情況下，

可采用總細胞DNA的雜交印染分析，或作mRNA的序列分析。對最終產(chǎn)品的特征鑒定應(yīng)特別

注意。

種子批不應(yīng)含有nJ?能致癌因子（在使用情況下），不應(yīng)含有感染性外源因子，如細菌、

支原體、真菌及病毒。

但是有些細胞株含有某些內(nèi)源病毒，例如逆轉(zhuǎn)錄病毒，且不易除去。但當(dāng)已確知在原始

細胞庫或載體局部中污染此類特定內(nèi)源因子時，那么應(yīng)能證明在生產(chǎn)的純化過程可使之滅活或

去除。

有限代次生產(chǎn)

用于培養(yǎng)和誘導(dǎo)基因產(chǎn)物的材料和方法應(yīng)有詳細資料。對培養(yǎng)過程及收獲時，應(yīng)有靈敏

的檢測措施控制微生物污染。

應(yīng)提供培養(yǎng)生長濃度和產(chǎn)量恒定性方面的數(shù)據(jù)，并應(yīng)確立廢棄一批培養(yǎng)物的指標。根據(jù)

宿主細胞/載體系統(tǒng)的穩(wěn)定性資料，確定在生產(chǎn)過程中允許的最高細胞倍增數(shù)或傳代代次，

并應(yīng)提供最適培養(yǎng)條件的詳細資料。

在生產(chǎn)周期結(jié)束時，應(yīng)監(jiān)測宿主細胞/載體系統(tǒng)的特性，例如質(zhì)?？截悢?shù)、宿主細胞中

表達載體存留程度、含插入基因的載體的曲切圖譜。一般情況下，用來自一個原始細胞庫的

全量培養(yǎng)物，必要時應(yīng)做一次基因表達產(chǎn)物的核甘酸序列分析。

連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)

根本要求同。

應(yīng)提供經(jīng)長期培養(yǎng)后所表達基因的分子完整性資料，以及宿主細胞的表型和基因型特

征。每批培養(yǎng)的產(chǎn)量變化應(yīng)在規(guī)定范圍內(nèi)。對可以進行后處理及應(yīng)廢棄的培養(yǎng)物，應(yīng)確定指

標。從培養(yǎng)開始至收獲，應(yīng)有靈敏的檢查微生物污染的措施。

根據(jù)宿主/載體穩(wěn)定性及表達產(chǎn)物的恒定性資料，應(yīng)規(guī)定連續(xù)培養(yǎng)的時間。如屬長時間

連續(xù)培養(yǎng)，應(yīng)根據(jù)宿主/載體稔定性及產(chǎn)物特性的資料，在不同間隔時間作全面檢定。

純化

對于收獲、別感和純化的方法應(yīng)詳細記述，應(yīng)特別注意污染病毒、核酸以及有害抗原性

物質(zhì)的去除。

如采用親和層析技術(shù)，例如用單克隆抗體，應(yīng)有檢測可能污染此類外源性物質(zhì)的方法，

不應(yīng)含有可測出的異種免疫球蛋白。

對整個純化工藝應(yīng)進行全面研究，包括能夠去除宿主細胞蛋白、核酸、糖、病毒或其它

雜質(zhì)以及在純化過程中參加的有害的化學(xué)物質(zhì)等。

關(guān)于純度的要求可視制品的用途和用法而確定，例如，僅使用一次或需反豆屢次使用；

用于健康人群或用于重癥患者；對純受可有不同程度要求。

3.3最終產(chǎn)品的控制

應(yīng)建立有關(guān)產(chǎn)品的鑒別、純度、卷定性和活性等方面的試驗方法。檢測的必要性和純度

要求取決于多種因素：產(chǎn)品性質(zhì)和用途、生產(chǎn)和純化工藝及生產(chǎn)工藝的經(jīng)驗。一般說來以F

試驗對控制產(chǎn)品質(zhì)量是可以采用的。

物理化學(xué)鑒定

.1宏基酸成份分析

完整的氨基酸成份分析結(jié)果，應(yīng)包括甲硫雙酸、半胱敏酸及色氨酸的準確值。氨基酸成

份分析結(jié)果應(yīng)為三次分別水解樣品測定后的平均值。

.2局部氨基酸序列分析

局部氨基末端序列分析（N端15個緘基酸）可作為rDNA蛋白質(zhì)和肽的重要鑒別指標。

.3肽圖分析

肽圖分析可作為與天然產(chǎn)品或參考品作精密比擬的于?段。與氨基酸成分和序列分析結(jié)果

合并，可作為蛋白質(zhì)的精確鑒別。對含二硫鍵的制品，肽圖可確證制品「二硫鍵的排列。

.4聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）及等電聚焦

PAGE及等電聚焦有助于證實蛋白質(zhì)和肽類的純度和分子量，亦可作為鑒別試驗。

PAGE應(yīng)包括在復(fù)原和非復(fù)原條件下試驗，且應(yīng)有適宜的分子量標記物作參比。凝膠帶

應(yīng)用靈敏的方法染色，例如銀染法，可測定微量蛋白質(zhì)，亦有助于檢出羊蛋白質(zhì)物質(zhì)，例如

核酸、糖及脂類。對分子量小于800C的肽類，PAGE測得的分子量可能不準確。

.5高效液相色譜（HPLC）

測定蛋白質(zhì)和肽類的純度，HPLC是一種有用的方法，在某些情況卜.,還可用來評定其

分子構(gòu)型和用作鑒別試驗。

.6剩余細胞DNA測定

必須用敏感的方法測定來源于宿主細胞的剩余DNA含量，這對于用哺乳動物傳代細胞（轉(zhuǎn)

化的細胞系）生產(chǎn)的制品尤為重要。一股認為剩余DNA含量小于lOOpg/劑是平安的，但應(yīng)

視制品的用途、用法和使用對象而決定可接受的限度。

.7其它外源性物質(zhì)

例如，用單克隆抗體（鼠源）親和層析純化的制品，應(yīng)測定可能存在的鼠IgG,細胞培

養(yǎng)生產(chǎn)的制品，應(yīng)測定剩余小半血清含量（以p.p.m表示）：在培養(yǎng)及純化過程中所添加的

可能有害物質(zhì)，亦應(yīng)有相應(yīng)的測定數(shù)據(jù)。

生物學(xué)測定

.1鑒別試驗

在可能情況下，應(yīng)用參考品將rDNA制品與天然產(chǎn)品通過生物學(xué)比擬試驗，確定其與天

然產(chǎn)品是一致的。

.2效價測定

采用國際或國家參考品，或經(jīng)過國家檢定機構(gòu)認可的參考品，以體內(nèi)或體外法測定制品

的生物學(xué)活性，并標明其活性單位。

.3特異比活性測定

在測定生物學(xué)活性的根底上，對有些制品還應(yīng)測定其特異比活性，以活性單位/重量表

示之。

.4熱原質(zhì)試驗

應(yīng)采用注射家兔法或窗試驗法（LAL）作熱原質(zhì)檢測（《中國生物制品規(guī)程》），控制標準

可參照天然制品的要求。

.5病毒污染檢查

應(yīng)采用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基質(zhì)和培養(yǎng)條件，檢查可能污染的病毒，應(yīng)證實最終制品不含外源病

擊。

.6無菌試驗

參照現(xiàn)行《中國生物制品規(guī)程》進行無菌試驗，應(yīng)證實最終制品無細菌污染。

.7抗原性物質(zhì)檢查

在有必要時，如制品屬大劑量反復(fù)使用者，應(yīng)測定最終制品中可能存在的抗原性物質(zhì)，

如宿主細胞、亞細胞組分及培養(yǎng)基成份等?；颊叻磸?fù)接受大劑量的這類制品時，應(yīng)密切監(jiān)測

止這些抗原可能產(chǎn)生的抗體或變態(tài)反響。

.8毒性試驗

可參照現(xiàn)行《中國生物制品規(guī)程》執(zhí)行。

4.臨床前平安性評價

臨床前平安性試驗的目的主要是確定新制品是否會在人體引起未能預(yù)料的不良反響。但

是，用于一般化學(xué)藥物的傳統(tǒng)平安性或毒性試驗對rDNA產(chǎn)品不一定適用，用傳統(tǒng)毒性試驗

來評價rDNA產(chǎn)品往往有困難，并受多種因素的影響。例如，某些蛋白質(zhì)，如干擾素，具有

高度種屬特異性，這種人的蛋白質(zhì)對人的藥理學(xué)活性遠超于對動物的活性，而且人的蛋白質(zhì)

負基酸序列，常常與來自其它種系的蛋白質(zhì)不同，例如糖基就不一樣。因而由基因工程技術(shù)

所制備的蛋白質(zhì)或肽類往往會在人體以外的其它宿主中產(chǎn)生免疫應(yīng)答，其生物學(xué)效應(yīng)有所改

變，并可能因形成免疫復(fù)合物而導(dǎo)致有毒性反響，而這樣產(chǎn)生的毒性反響與人體平安性顯然

無關(guān)。

綜上述理由，對rDNA產(chǎn)品的臨床前平安性試驗要求，難以一概而論，應(yīng)采取較為靈活

的處置方法。除了一般生物制品的毒性試驗要求之外，其它如長期毒性試驗、藥代動力學(xué)試

驗、藥理學(xué)試驗、毒理學(xué)試驗，以及致畸和致突變等試驗，應(yīng)根據(jù)制品性質(zhì)，與國家檢定機

構(gòu)及藥品審評中心商定所需進行的試驗工程和方法，以及判定標準。

5.臨床試驗

用rDNA技術(shù)所生產(chǎn)的制品必需經(jīng)過臨床試驗，以評價其平安性和有效性。

附件四：

人用鼠源性單克隆抗體質(zhì)量控制要點

本品系用雜交瘤技術(shù)將抗原免疫動物后，取脾或外周血淋巴細胞或經(jīng)體外免疫獲得的免

疫淋巴細胞與相應(yīng)的骨髓瘤細胞融合建立穩(wěn)定分泌特異抗體的雜交瘤細胞株，通過體內(nèi)法或

體外培養(yǎng)法制備單克隆抗體，經(jīng)提取純化獲得的特異性單克隆抗體制劑。用于有關(guān)疾病的診

呼或治療。

1雜交瘤細胞

1.1親本細胞

骨髓瘤細胞

SP2/0或其他適宜的骨筋瘤細胞系。應(yīng)為不合成或不分泌免疫球蛋白維型，具有符合骨

燧瘤細胞的染色體條數(shù)，并布.明確的來源歷史及符合要求的保存條件。

免疫親代細胞

經(jīng)抗原免疫的鼠脾B淋巴細胞或外周血B淋巴細胞。

應(yīng)有明確的免疫原來源、性質(zhì)及動物種系，免疫原詳細的制備過程。

適宜的免疫方法及免疫淋巴組胞制備的方法。

1.2細胞融合

末次免疫后第3天取脾制成組胞懸液，與骨髓瘤細胞按一定的比例混合并在融合劑作用

卜或在電融合儀中按常規(guī)法或其他適宜的方法進行細胞融合。

1.3克隆化

用ELISA或其他適宜方法篩選出分泌目的抗體的雜交痛經(jīng)有限稀釋法或其他適宜方法對

具進行克隆化，直至獲得具有穩(wěn)定分泌單克隆抗體能力的雜交瘤細胞系。

1.4雜交痛細胞檢定

抗體分泌穩(wěn)定性

經(jīng)克隆化及連續(xù)傳代后檢查。連續(xù)克隆化后至檢測單克隆抗體陽性率達100%,并在體

外傳代3個月以上細胞株能保持穩(wěn)定為分泌抗體。

細胞核學(xué)特征

檢查細胞分裂中期染色體。應(yīng)符合雜交瘤細胞的核型。

鼠源病毒檢查

按附錄1要求檢測鼠源病毒。

.1細胞接種法

細胞及培養(yǎng)上清分別接種人2BS細胞、Ver。細胞，接種量為107。樣品接種細胞后，傳

兩代，制片，用IFA法檢測病毒抗原，

.2動物接種法

樣品接種出生24小時以內(nèi)乳小鼠兩窩(至少10只)，15?20g成年小鼠10只，300?350g

的豚鼠5只。每只動物腹腔接種107活細胞。觀察4周，存活率應(yīng)在80%以上：另外接種對

謝.巴脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)敏感的成年小鼠10只，腦內(nèi)接種106活紐I胞，觀察4周，

存活率應(yīng)在80%以上。用ELISA或其他適宜的方法檢測血清中病毒抗體。

.3雞胚接種法

樣品接種SPF雞胚尿囊腔和卵黃囊。每種途徑至少10只，每只接種106活細胞，孵育

5天，用豚鼠和雞紅血球做HA法檢測病毒血凝素，同組雞胚中至少80%保持健康并存活，試

驗有效。單抗制品不應(yīng)有鼠源病毒污染。

對產(chǎn)生單克隆抗體的鼠類細胞系，一般認為具有產(chǎn)生傳染性鼠類反轉(zhuǎn)錄病毒的能力，可

以不做反轉(zhuǎn)錄病毒檢測，但應(yīng)有資料證明制造工藝中能去除或滅活反轉(zhuǎn)錄病毒。

支原體檢查

.1培養(yǎng)法

細胞及培養(yǎng)上清分別接種支原體培養(yǎng)基，按《生物制品檢定標準操作細那么》進行。應(yīng)設(shè)

使、陽性對照。

.2DNA熒光染色法

細胞及培養(yǎng)上清分別與指示組胞共同培養(yǎng)，按《生物制品檢定標準操作細那么》進行。

無菌試驗

按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。

2單克隆抗體的檢定

2.1免疫球蛋白類及亞類

用免疫雙擴散法或其他適宜的方法測定。

2.2親和力

用適宜的方法測定單抗的親和常數(shù)或相對親和力。

2.3特異性

測定單抗對靶抗原的特異性：分析單抗識別的抗原決定簇。

2.4交叉反響

按附錄2要求。

免疫組織化學(xué)法測定單抗與人體組織交叉反響，用冰凍及石蠟包埋的成年人及胎兒各臟

器組織溶定。來源于腫瘤相關(guān)抗原的單抗應(yīng)進行可各種腫瘤組織的交叉反響試驗。

2.5效價測定

用ELISA法或其他特異性方法測定。

3其他原材料

3.1細胞培養(yǎng)用小牛血清

支原體檢測應(yīng)為陰性。經(jīng)小量試驗適于雜交瘤細胞生長。

3.2培養(yǎng)液

應(yīng)有培養(yǎng)液來源，質(zhì)量指標。

3.3化學(xué)試劑

規(guī)格應(yīng)到達分析純以上。

4細胞庫的建立和單克隆抗體的生產(chǎn)

為了保證長期、穩(wěn)定的生產(chǎn)出符合要求的高質(zhì)量單抗，首先要建立高標準的細胞庫。同

時單抗生產(chǎn)場所必須符合GMP要求，潔凈無污染，生產(chǎn)人員無傳染病，穴得從事其他可導(dǎo)致

傳染原污染單抗制劑的工作：無關(guān)人員不得進入生產(chǎn)區(qū)內(nèi)。在同一車間8,不得同時生產(chǎn)其

他無關(guān)單抗。

4.1細胞庫

建立原始細胞庫和生產(chǎn)細胞庫，幾種細胞株用于同一目的生產(chǎn)時，應(yīng)分別建立細胞庫及

種子批。

原始細胞庫

為雜交瘤細胞建立時較原始的細胞管，即融合細胞管、一次克隆及屢次克隆的細胞管。

種子細胞庫

由原始細胞庫中建株細胞擴大培養(yǎng)凍存的細胞種子。每一批細胞管數(shù)不應(yīng)少于20支，

賬上標簽放入液氮中保存。種子批應(yīng)進行外源因子檢查，包括細菌、真茵、支原體及病毒污

染的檢查。

生產(chǎn)細胞庫

經(jīng)檢定合格后的雜交瘤細胞按生產(chǎn)條件大量培養(yǎng)、凍存的細胞管為生產(chǎn)細胞庫。每一生

產(chǎn)細胞批細胞管數(shù)不少于10支，每次生產(chǎn)腹水時取生產(chǎn)細胞管一支復(fù)蘇、擴增及生產(chǎn)，不

再回凍。細胞庫應(yīng)詳細紀錄存放細胞管位置、代數(shù)、管數(shù)、凍存、復(fù)蘇的情況，并有專人負

責(zé)。同時要進行各種外源因子檢測，保證沒有污染。

4.2單克隆抗體制備

小鼠腹水法

.1小鼠

制備腹水必需使用SPF級小鼠，生產(chǎn)用鼠必需經(jīng)過檢查，應(yīng)無鼠源病毒污染，并有合格

證明。在腹水牛.產(chǎn)過程中如發(fā)現(xiàn)動物不健康、咬傷、感染者均應(yīng)廢棄。

.2動物實驗設(shè)施

動物實驗設(shè)施應(yīng)有相關(guān)部門頒發(fā)的二級以上的合格證。

.3細胞擴大培養(yǎng)

取生產(chǎn)批細胞管一支復(fù)蘇，加營養(yǎng)液進行擴大培養(yǎng)，一支生產(chǎn)細胞只用一次，不再凍存。

.4細胞接種

制備腹水均須在無菌條件下完成。注射雜交瘤細胞之前，每只小鼠腹腔注射液體石蠟或

降植烷0.5ml。一般在1周后每只小鼠注射雜交瘤細胞1-3X106。

.5腹水的采集

注射細胞后一般7?10天，或在小鼠瀕死前一次性采集腹水