《六堡茶 揮發(fā)性關(guān)鍵香氣成分的測定 頂空-固相微萃取氣相色譜-質(zhì)譜法》（征求意見稿）

1T/GBCXXXX—XXXX六堡茶揮發(fā)性關(guān)鍵香氣成分的測定頂空-固相微萃取氣相色譜-質(zhì)譜法本文件界定了六堡茶中6種揮發(fā)性關(guān)鍵香氣成分的相關(guān)術(shù)語和定義，規(guī)定了六堡茶中6種揮發(fā)性關(guān)鍵香氣成分測定的頂空—固相微萃取氣相色譜—質(zhì)譜法，包括方法原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、樣品制備與保存、測定步驟、數(shù)據(jù)處理以及準(zhǔn)確度和精密度等內(nèi)容。本文件適用于六堡茶中發(fā)性關(guān)鍵香氣成分含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法DB45/T581六堡茶3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.16種揮發(fā)性關(guān)鍵香氣6volatilekeyaromas成分包括：芳樟醇、壬醛、薄荷醇、癸醛、香葉醇、紫羅蘭酮。4方法原理利用固相微萃取纖維頂空吸附富集六堡茶樣品中的芳樟醇、壬醛、薄荷醇、癸醛、香葉醇、紫羅蘭酮后用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分離測定，內(nèi)標(biāo)法定量。5試劑和材料5.1試劑5.1.1除非另有說明，本方法所用試劑分析純以上試劑。5.1.2超純水：符合GB/T6682的要求，且質(zhì)譜檢驗(yàn)無干擾成分。5.1.3甲醇（CH3OH）：色譜純。5.1.4氯化鈉（NaCl）：優(yōu)級純，經(jīng)450℃烘烤2h后置干燥器內(nèi)備用。紫羅蘭酮（C13H20O）純度≥95%，或使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。5.2試劑配制5.2.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：稱取芳樟醇、壬醛、薄荷醇、癸醛、香葉醇、紫羅蘭酮10.0mg，分別置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，質(zhì)量濃度均為100mg/L。將標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液置于聚四氟乙烯封口的螺口瓶中或密閉安瓿瓶中，盡量減少瓶內(nèi)的液上頂空，避光于0℃~4℃冷藏保存。5.2.2標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：分別用甲醇將芳樟醇、壬醛、薄荷醇、癸醛、香葉醇、紫羅蘭酮標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液稀釋成質(zhì)量濃度為10.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。將標(biāo)準(zhǔn)中間溶液置于聚四氟乙烯封口的螺口瓶中或密閉安瓶中，盡量減少瓶內(nèi)的液上頂空，避光于0℃~4℃冷藏保存，使用前要檢查溶液是否揮發(fā)。5.2.3標(biāo)準(zhǔn)混合使用溶液：將標(biāo)準(zhǔn)中間溶液放至室溫，用甲醇或純水將10.0μg/L的芳樟醇、壬醛、2T/GBCXXXX—XXXX薄荷醇、癸醛、香葉醇、紫羅蘭酮標(biāo)準(zhǔn)中間溶液稀釋成10.0μg/L的標(biāo)準(zhǔn)混合使用液。現(xiàn)用現(xiàn)配。5.2.4內(nèi)標(biāo)物：2-異丁基-3-甲氧基吡嗪（C9H14N2O），純度＞95%，或使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。5.2.5內(nèi)標(biāo)儲備溶液：稱取2-異丁基-3-甲氧基吡嗪標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10.0mg，置于100ml，容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，質(zhì)量濃度為100mg/L。將內(nèi)標(biāo)儲備溶液置于聚四氟乙烯封口的螺口瓶中或密閉安瓶中，盡量減少瓶內(nèi)的液上頂空，避光于0℃~4℃冷藏保存。5.2.6內(nèi)標(biāo)中間溶液：用甲醇將2-異丁基-3-甲氧基吡嗪儲備溶液逐級稀釋成質(zhì)量濃度為10.0mg/L的內(nèi)標(biāo)中間溶液。將內(nèi)標(biāo)中間溶液置于聚四氟乙烯封口的螺口瓶中或密閉安瓿瓶中，盡量減少瓶內(nèi)的液上頂空，避光于0℃~4℃冷藏保存，使用前要檢查溶液是否揮發(fā)。5.2.7內(nèi)標(biāo)使用溶液的配制：將內(nèi)標(biāo)中間溶液放至室溫，用甲醇或純水將10.0mg/L的2-異丁基-3-甲氧基吡嗪中間溶液稀釋成質(zhì)量濃度為50.0μg/L的內(nèi)標(biāo)使用溶液。現(xiàn)用現(xiàn)配。6儀器和設(shè)備6.1氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，質(zhì)譜儀使用電子電離源（EI）方式離子化，標(biāo)準(zhǔn)電子能量為70eV。6.2全自動頂空固相微萃取裝置能直接連接到色譜部分，并能自動啟動色譜6.3纖維萃取頭：85μmCarboxen/PDMS（聚二甲基硅氧烷）的纖維萃取頭或相當(dāng)者。6.4色譜柱30m×0.25mm，0.25μm，填料為5%二苯基（95%）二甲基聚硅氧烷；或其他等效色譜柱。6.5固相微萃取專用襯管（78.5mm×6.3mm，0.75mm）。6.6固相微萃取瓶（SPME）：20mL棕色螺旋口頂空瓶，具聚四氟乙烯襯墊和磁性螺旋蓋。6.7分析天平：感量0.1mg和0.01g。7樣品制備與保存取100g樣品，粉碎后過60目篩處理后，混合均勻，常溫保存。8測定步驟8.1樣品處理稱取粉碎后樣品約0.1g（準(zhǔn)確至0.0001g）。置于20mL棕色玻璃瓶，依次3g氯化鈉（5.1.4），混勻。10.0mL超純水（5.1.2）和20μL內(nèi)標(biāo)使用溶液（5.2.7），混勻，置于頂空固相微萃取樣品盤適當(dāng)位置，待測。纖維萃取頭270℃活化5min，插入萃取瓶中，60℃條件下震蕩萃取40min后拔出，插入氣相色譜進(jìn)樣口250℃熱解析5min，經(jīng)氣相分離后進(jìn)入質(zhì)譜檢測。8.2繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線移取標(biāo)準(zhǔn)混合使用溶液（5.2.3）0.0μL、10.0μL、30.0μL、50.0μL、70.0μL、100μL、200μL分別置于預(yù)先加有3g氯化鈉（5.1.4）和10.0mL超純水（5.1.2）的固相微萃取瓶（6.6）中，各加入20μL內(nèi)標(biāo)使用溶液（5.2.7），混勻，按照8.1前處理后，經(jīng)氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。8.3儀器參考條件8.3.1氣相色譜參考條件：載氣：高純氦氣[φ（He）≥99.999%]；進(jìn)樣口溫度：250℃；進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣；程序升溫：起始溫度40℃,保持2min，以8℃/min速率升至110℃,保持5min。以10℃/min速率升至260℃,保持5min。8.3.2質(zhì)譜儀操參考條件：離子源：電子電離源（EI）；離子源溫度：230℃；接口溫度：260℃；離子化能量：70eV；掃描模式：選擇離子檢測（SIM），參數(shù)見表1。T/GBCXXXX—XXXX3表1選擇離子檢測參數(shù)8.4空白實(shí)驗(yàn)以超純水替代試樣，采用完全相同的測定步驟進(jìn)行平行操作。9數(shù)據(jù)處理9.1定性分析9.1.1各組分出峰順序：芳樟醇、壬醛、薄荷醇、癸醛、香葉醇、紫羅蘭酮9.1.2保留時間（min）：芳樟醇9.520、壬醛9.620、薄荷醇11.045、癸醛11.670、香葉醇12.605、紫羅蘭酮16.470。9.2定量分析樣品中組分含量以質(zhì)量濃度pi計(jì)，單位以微克每千克(μg/kg）表示，按式（1）計(jì)算：式中：pi——樣品中目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度，單位為(μg/kgAi——樣品中目標(biāo)化合物定量離子峰面積；Ais——樣品中內(nèi)標(biāo)物物定量離子峰面積；ai——標(biāo)準(zhǔn)曲線截距；pis——