微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-口腔微生物的染色觀察與顯微鏡油鏡的使用;細(xì)菌的革蘭氏染色PPT演示課件

1、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn),1,微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)應(yīng)當(dāng)掌握,1、微生物的觀察方法（制片、染色、油鏡的使用）2、微生物的培養(yǎng)方法（培養(yǎng)基配制、分裝、包扎、滅菌）3、無菌操作技術(shù)（火焰滅菌、倒平板、劃線、涂平板、接種）,本課程的成績考核：,基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)：60%由單個(gè)實(shí)驗(yàn)的成績相加組成。每次實(shí)驗(yàn)由實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師根據(jù)出勤、實(shí)驗(yàn)操作、實(shí)驗(yàn)報(bào)告等進(jìn)行評定，具體比例為：實(shí)驗(yàn)出勤及實(shí)驗(yàn)態(tài)度占20；實(shí)際操作30；實(shí)技能考核30；實(shí)驗(yàn)報(bào)告占20。自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)：40%設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案實(shí)驗(yàn)操作總結(jié),實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌的革蘭氏染色,實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告思考題,微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-1,4,1.了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類

2、鑒定中的重要性。2.學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色技術(shù)，進(jìn)一步熟練光學(xué)顯微鏡油鏡的使用技術(shù)。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?革蘭氏染色法（Gramstaining）是微生物學(xué)中常用的一種染色方法，該染色法由丹麥醫(yī)生（ChristianGram）于1884年創(chuàng)立，故名。,實(shí)驗(yàn)原理,G+細(xì)菌,G-細(xì)菌,革蘭氏染色機(jī)理,G+細(xì)菌由于細(xì)胞壁較厚、肽聚糖含量較高和其分子交聯(lián)度較緊密，故在用乙醇洗脫時(shí)，肽聚糖網(wǎng)孔會因脫水而明顯收縮，因不含脂類，故乙醇處理不能在壁上溶出縫隙，因此，結(jié)晶紫與碘復(fù)合物仍牢牢阻留在其細(xì)胞內(nèi)，使其呈現(xiàn)紫色。G-細(xì)菌因其壁薄、肽聚糖含量低和交聯(lián)松散，故遇乙醇后，肽聚糖網(wǎng)孔不易收縮，加上它的類脂含量高，所以當(dāng)乙醇把

3、類脂溶解后，在細(xì)胞壁上就會出現(xiàn)較大的縫隙，結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物極易被溶出細(xì)胞壁，因此，通過乙醇脫色后，細(xì)胞又呈無色。這時(shí)再經(jīng)番紅復(fù)染，就使G-細(xì)菌染成紅色，而G+細(xì)菌仍呈紫色。,結(jié)晶紫初染,全部細(xì)胞紫色,碘液媒染,全部細(xì)胞紫色,乙醇脫色,G-菌無色G+菌紫色,番紅復(fù)染,G-菌紅色G+菌紫色,革蘭氏染色各步驟時(shí)細(xì)菌的外觀,菌種大腸桿菌（Escherichiacoli）金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）試劑：蒸餾水；草酸銨結(jié)晶紫染液；盧戈氏碘液95%乙醇；番紅復(fù)染液；香柏油；二甲苯光學(xué)顯微鏡,實(shí)驗(yàn)材料,革蘭氏染色操作步驟,水洗,干燥,鏡檢（油鏡）,涂片,滴水,取菌,火焰固定,

4、結(jié)晶紫染色1分鐘,水洗,碘液1分鐘,乙醇脫色（2030秒）,水洗,番紅1分鐘,水洗,實(shí)驗(yàn)方法,自然干燥,E.coli,S.aureus,混合菌,涂片方法示意圖,分辨率D=數(shù)值孔徑NAnsin,a,n=1.515,空氣n=1,2NA,2,a,電源,電源,顯微鏡油鏡的使用與保護(hù),插上電源插頭，打開顯微鏡電源開關(guān)。調(diào)節(jié)顯微鏡光源。先用低倍鏡、高倍鏡查找標(biāo)本視野，下降載物臺約2cm，加香柏油一滴于標(biāo)本的待檢部位，換用油鏡觀察。換用油鏡后，眼睛從側(cè)面注視油鏡頭，緩慢上升載物臺至油圈不再擴(kuò)大為止，此時(shí)鏡頭幾乎與裝片接觸，但不可壓及裝片。觀察標(biāo)本時(shí)，雙眼同時(shí)掙開，左眼觀察，右眼畫圖。油鏡用畢，轉(zhuǎn)動粗調(diào)將載物

5、臺下降，取下標(biāo)本，用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦凈，然后再用擦鏡紙擦去二甲苯。7.使各部分還原，物鏡鏡頭呈八字形，光源強(qiáng)度調(diào)至最暗，關(guān)閉電源，罩上防塵罩，收拾干凈臺面。,金黃色葡萄球菌(G+),大腸桿菌(G-),實(shí)驗(yàn)結(jié)果,大腸桿菌(G-)和金黃色葡萄球菌(G+),注意事項(xiàng),1.涂片不宜過厚，以免脫色不完全造成假陽性；自然干燥后再進(jìn)行火焰固定（以玻片不燙手為宜）。2.染色過程中勿使染色液干涸。3.乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，脫色不足陰性菌被誤染成陽性菌；脫色過度，會使陽性菌被誤染成陰性菌。4.選用培養(yǎng)1824h菌齡的細(xì)菌為宜。若菌齡太老，由于菌體死亡或自溶常使會使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)成陰性反應(yīng)。

6、,實(shí)驗(yàn)報(bào)告,Escherichiacoli10100,Staphylococcusaureus10100,混合菌10100,1通過本實(shí)驗(yàn)?zāi)阏J(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？,思考題,實(shí)驗(yàn)二口腔微生物的染色觀察與顯微鏡油鏡的使用,實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告思考題,微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-1,25,學(xué)習(xí)并初步掌握細(xì)菌的單染色法。了解口腔內(nèi)微生物的種類。掌握油鏡的使用方法。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?細(xì)菌的單染色法是微生物學(xué)中常用的一種染色方法。人體口腔中特別是在牙垢中，有細(xì)菌、真菌、支原體、口腔原蟲、病毒等數(shù)量眾多的微生物，用無菌牙簽刮取少許牙垢，涂片染色后用顯微鏡下即可觀察到各類微生物的形態(tài)。,實(shí)驗(yàn)原理,試劑：蒸餾水；石碳酸復(fù)紅染液；香柏油；二甲苯光學(xué)顯微鏡、滅菌牙簽、載玻片,實(shí)驗(yàn)材料,口腔微生物染色操作步驟,干燥,鏡檢（油鏡）,涂片,滴水,刮取牙垢,火焰固定,革蘭氏染色或復(fù)紅染色1分鐘,水洗,實(shí)驗(yàn)方法,自然干燥,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,注意事項(xiàng),1.載玻片要潔凈無脂，否則菌液涂不開。2.取樣時(shí)只需輕刮牙齒表面，肉眼可見少許牙垢即可，滴水不宜過多，以免干燥時(shí)間過長；涂片不宜過厚，以免水洗不完全造成背景雜亂。3.自然干燥后再進(jìn)行火焰固定（以玻片不燙手為宜）。4.染色過程中勿使染