帕金森病課件

1、帕金森病,掌握內(nèi)容 1.概念：帕金森?。换蛐揎椉?xì)胞 2.帕金森病的病理表現(xiàn)及發(fā)病的病理學(xué)基礎(chǔ) 3.基底神經(jīng)節(jié)環(huán)路的調(diào)節(jié)方式 4.帕金森病的發(fā)病機(jī)制,2,PPT學(xué)習(xí)交流,一、定義,帕金森?。≒akinsons Disease, PD）又名震顫麻痹（paralysis agitans），由Parkinson（1817）首先描述，是一種進(jìn)展緩慢，原發(fā)于黑質(zhì)-紋狀體通路的錐體外系變性疾病。臨床上以靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、肌強(qiáng)直和姿勢(shì)步態(tài)異常為主要特征。,3,PPT學(xué)習(xí)交流,臨床表現(xiàn) 肢體震顫 肌強(qiáng)直 運(yùn)動(dòng)遲緩 姿勢(shì)平衡反射消失 其他癥狀,Monograph by James Parkinson 181

2、7,4,PPT學(xué)習(xí)交流,流行病學(xué),PD在60歲以上人群中患病率為1000/10萬，并隨年齡增長而增高，兩性分布差異不大 是一種常見的中老年人神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,5,PPT學(xué)習(xí)交流,病理,主要病理改變是含色素的黑質(zhì)致密部DA能神經(jīng)元變性、缺失 出現(xiàn)癥狀時(shí)DA能神經(jīng)元常丟失50%以上，癥狀明顯時(shí)神經(jīng)元丟失嚴(yán)重，殘留者變性，黑色素減少 以黑質(zhì)、紋狀體減少為主，皮層和下丘腦并不減少,6,PPT學(xué)習(xí)交流,病理改變,7,PPT學(xué)習(xí)交流,PET顯示PD腦內(nèi)DAT功能顯著降低,8,PPT學(xué)習(xí)交流,病理,胞漿內(nèi)出現(xiàn)特征性嗜酸性包涵體-Lewy小體，a-突觸核蛋白是Lewy小體中重要成分 類似改變也見于藍(lán)斑、中縫核

3、、迷走神經(jīng)背核等，程度較輕,9,PPT學(xué)習(xí)交流,病理特點(diǎn),總之，典型病理特點(diǎn)是： 進(jìn)行性黑質(zhì)含色素多巴胺神經(jīng)元大量喪失(50%70%) 路易(Lewy)小體有a-突觸核蛋白沉積,10,PPT學(xué)習(xí)交流,病理改變,a. 黑質(zhì)萎縮 b. 與正常對(duì)照比較,Parkinson病 a.黑質(zhì)致密部Lewy體，H&E b.改良Bielschowsky銀染技術(shù),11,PPT學(xué)習(xí)交流,生化病理,腦內(nèi)存在多條DA遞質(zhì)通路，最重要為黑質(zhì)-紋狀體通路 左旋酪氨酸 TH L-DOPA DDC DA 該通路DA神經(jīng)元在黑質(zhì)致密部，正常時(shí)自血流攝入左旋酪氨酸，經(jīng)細(xì)胞內(nèi)酪氨酸羥化酶(TH)轉(zhuǎn)化為左旋多巴(L-DOPA) 再經(jīng)過

4、多巴脫羧酶(DDC)轉(zhuǎn)化為DA DA通過黑質(zhì)-紋狀體束作用于殼核和尾狀核細(xì)胞,12,PPT學(xué)習(xí)交流,Levodopa Mechanism,13,PPT學(xué)習(xí)交流,黑質(zhì)-紋狀體多巴胺系統(tǒng)功能紊亂，多巴胺含量顯著減少(80% 99%) 該生化異常與臨床癥狀嚴(yán)重程度成正比 PD發(fā)病的病理學(xué)基礎(chǔ)：黑質(zhì)-紋狀體多巴胺能神經(jīng)環(huán)路,14,PPT學(xué)習(xí)交流,生化病理-基底節(jié)的神經(jīng)生化解剖簡圖,DA神經(jīng)元對(duì)紋狀體GABA源性遞質(zhì)釋放起抑制作用,ACh神經(jīng)元對(duì)紋狀體GABA源性遞質(zhì)釋放起興奮作用,15,PPT學(xué)習(xí)交流,生化病理-帕金森病基底節(jié)神經(jīng)生化病理學(xué),DA神經(jīng)元變性(黑圈及虛線)破壞紋狀體GABA神經(jīng)元的多巴胺

5、抑制與ACh興奮的平衡 凈效應(yīng)是增加紋狀體GABA釋放,16,PPT學(xué)習(xí)交流,帕金森病生化病理,17,PPT學(xué)習(xí)交流,病因及發(fā)病機(jī)制,本病病因迄今未明-原發(fā)性PD (idiopathic Parkinsons disease)。 發(fā)病確切機(jī)制還不完全清楚，20世紀(jì)80年代以后，對(duì)PD發(fā)病機(jī)制的研究有兩個(gè)突破性發(fā)展：其一基底核神經(jīng)回路的平衡失調(diào)成為PD發(fā)病的病理基礎(chǔ)；其二DA氧化應(yīng)激學(xué)說成為黑質(zhì)部位DA神經(jīng)元退化的理論基礎(chǔ)。,18,PPT學(xué)習(xí)交流,一、基底神經(jīng)節(jié)環(huán)路與帕金森病 錐體外系的運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)中心區(qū)：基底神經(jīng)節(jié) 運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)的關(guān)鍵遞質(zhì)：多巴胺 基底神經(jīng)節(jié)（basal ganglia）包括：紋狀體

6、（striaturn, corpus striaturn）、黑質(zhì) （substantia nigra, SN）、丘腦底核和杏仁核。,19,PPT學(xué)習(xí)交流,基底神經(jīng)節(jié)的主要功能：控制肢體肌張力，全身運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)，維持姿勢(shì)調(diào)節(jié)反射和下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的反射控制 基底神經(jīng)節(jié)損害：肌張力不全運(yùn)動(dòng)增多綜合征或肌張力增高運(yùn)動(dòng)減少綜合征,20,PPT學(xué)習(xí)交流,基底神經(jīng)節(jié)接受來自大腦皮層有關(guān)運(yùn)動(dòng)區(qū)的傳入沖動(dòng)，基底神經(jīng)節(jié)的傳出沖動(dòng)又通過丘腦返回皮質(zhì)的特定區(qū)域，構(gòu)成了5條不同通路的皮質(zhì)-基底節(jié)-丘腦-皮質(zhì)反饋的神經(jīng)環(huán)路。 基底神經(jīng)節(jié)環(huán)路的調(diào)節(jié)方式：直接通路；間接通路；黑質(zhì)-紋狀體多巴胺通路。,基底核調(diào)節(jié)運(yùn)動(dòng)的神經(jīng)回路,22

7、,PPT學(xué)習(xí)交流,（一）直接通路 皮層谷氨酸能神經(jīng)元 紋狀體GABA神經(jīng)元釋放GABA遞質(zhì) 蒼白球GABA神經(jīng)元 丘腦對(duì)谷氨酸神經(jīng)元抑制作用 谷氨酸釋放增加 皮層運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元活性增加。 （二）間接通路 皮層谷氨酸能神經(jīng)元 紋狀體GABA神經(jīng)元釋放 GABA遞質(zhì) 蒼白球GABA神經(jīng)元 丘腦底核的谷氨酸能神經(jīng)元纖維投射到蒼白球的神經(jīng)興奮性 蒼白球的GABA神經(jīng)元釋放增加 丘腦谷氨酸能神經(jīng)元興奮性降低 皮層運(yùn)動(dòng),興奮,抑制,減弱,興奮,抑制,抑制,23,PPT學(xué)習(xí)交流,（三）黑質(zhì)-紋狀體多巴胺通路 直接環(huán)路：D1受體介導(dǎo)的，GABA/肽類神經(jīng) 遞質(zhì)(SP)/強(qiáng)啡肽(DYN)參與的調(diào) 節(jié)環(huán)路，起興奮調(diào)節(jié)

8、效應(yīng) 。 間接環(huán)路：D2受體介導(dǎo)的，GABA/腦啡肽 (ENK)/神經(jīng)營養(yǎng)素(NT)參與的調(diào) 節(jié)環(huán)路，起去抑制調(diào)節(jié)效應(yīng)。 二者易化運(yùn)動(dòng)效果，相互協(xié)調(diào)作用，平衡錐體外系運(yùn)動(dòng)功能。,24,PPT學(xué)習(xí)交流,T,Dopamine: Inhibitory Ach: Excitatory GABA: Inhibitory,DA neuron generated,三、PD的發(fā)病機(jī)制 （一）環(huán)境因素與PD發(fā)病 參與PD發(fā)病的物質(zhì)： （1）N-甲基氨基-L-丙氨酸（L-BMMA ） （2）長期接觸銅、錳、鐵、鉛或長期暴露 于殺蟲劑 （3）N-甲基1,2,3,6四氫吡啶（N-methyl- 4-phenyl-1,

9、2,3,6-tet-rahydro-pyridine， MPTP ）,26,PPT學(xué)習(xí)交流,（二）多巴胺(DA)的氧化應(yīng)激學(xué)說與 PD發(fā)病 腦內(nèi)生成的自由基可以攻擊腦內(nèi)的多巴胺神經(jīng)元，使之產(chǎn)生神經(jīng)細(xì)胞的退化性病理變化。 氧化應(yīng)激損傷是黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元死亡的主要原因，導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷增高的可能原因：外源性毒物的侵入；DA的氧化應(yīng)激代謝；神經(jīng)黑色素的存在；清除自由基的能力不全。,27,PPT學(xué)習(xí)交流,1、DA的氧化應(yīng)激代謝 在DA的代謝過程中，77%DA被星形神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的單氨氧化酶B( MAO-B )所氧化，23%DA被神經(jīng)元內(nèi)MAO-A氧化代謝。在O2存在的情況下，此MAO-A催化DA代謝為

10、34-雙羥苯乙酸（DOPAC）的同時(shí)生成過氧化氫（H2O2），DOPAC在單胺氧化酶甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下代謝生成高香草酸（HVA）。 在生理的條件下，DA的酶促反應(yīng)代謝較快。但在氧化應(yīng)激的條件下，神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的DA可通過非酶促反應(yīng)來進(jìn)行代謝，在鐵離子的參與下，反應(yīng)加快，被氧化生成醌類衍化物，并進(jìn)一步形成黑色素。,28,PPT學(xué)習(xí)交流,多巴胺在神經(jīng)元中的酶代謝及其代謝產(chǎn)物,29,PPT學(xué)習(xí)交流,在DA代謝過程中，產(chǎn)生超氧陰離子（O2-）和H2O2；此外，多巴胺又可以被代謝形成6-羥基多巴（6-hydroxyldopamine, 6-OHDA），后者又可以作為單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的化學(xué)切割劑進(jìn)一步損傷多巴胺

11、神經(jīng)元。 該途經(jīng)生成的H2O2通過Fenton反映，形成羥基和羥自由基。 H2O2 + Fe3+ OH - + OH,30,PPT學(xué)習(xí)交流,2、鐵離子參與DA的氧化應(yīng)激 腦內(nèi)的鐵離子（Fe2+和Fe3+）主要分布在黑質(zhì)、紋狀體和蒼白球，尤其是在黑質(zhì)。在PD病人的腦內(nèi)發(fā)現(xiàn)鐵離子的含量明顯升高，并呈現(xiàn)以下三方面的特點(diǎn)： 在黑質(zhì)的鐵離子濃度異常升高，但其它腦區(qū)并 不升高； 鐵離子含量升高，但鐵蛋白的含量不變； Fe3+含量升高，但Fe2+的含量不變。 這些特點(diǎn)提示黑質(zhì)鐵離子的升高可能與PD的發(fā)病過程有關(guān)。,31,PPT學(xué)習(xí)交流,鐵離子的促進(jìn)氧化應(yīng)激的作用可以通過以下幾條途徑： 如前所述，加速非酶促反

12、應(yīng)的DA自身氧 化生成H2O2和O2-。 促進(jìn)H2O2和O2-形成OH。 促使脂質(zhì)過氧化物的分解。 鐵離子與黑色素結(jié)合沉積于黑質(zhì)，催化 自由基產(chǎn)生。,DA神經(jīng)毒的氧化應(yīng)激機(jī)制示意圖,33,PPT學(xué)習(xí)交流,由上述可以得出多巴胺引起兒茶酚胺的細(xì)胞死亡主要通過以下三方面的機(jī)制： 細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的多巴胺的自身氧化產(chǎn)生 自由基； MAO介導(dǎo)的多巴胺代謝產(chǎn)生的過氧化氫； 多巴胺對(duì)線粒體呼吸鏈的直接抑制作用。,（三）遺傳易感性 參與PD發(fā)病的遺傳調(diào)節(jié)因子： 1、-神經(jīng)突觸核蛋白(-synuclein, -SN) ： 除分布在神經(jīng)突觸末梢外，在神經(jīng)細(xì)胞核內(nèi)也有分布，因此稱為神經(jīng)突觸核蛋白，可分為、和三種 。

13、有幾個(gè)PD家系的患者-SN有突變位點(diǎn)，主要位于染色體臂的4q21-q23，呈染色體顯性遺傳。 -SN致蛋白空間結(jié)構(gòu)改變，可引起DA神經(jīng)元選擇性毀損，且需要達(dá)到一定量才會(huì)發(fā)生作用。 在MPTP制備的PD模型上觀察到，黒質(zhì)神經(jīng)元 上-SN表達(dá)呈時(shí)間依賴性上調(diào)，并與DA神 經(jīng)元退變平行。,35,PPT學(xué)習(xí)交流,2、Parkin ：parkin基因突變與早發(fā)性PD有關(guān)。Parkin主要位于神經(jīng)元胞漿和突觸中，與突觸傳遞有關(guān)，功能與泛素樣蛋白裂解有關(guān)，參與泛素蛋白酶體復(fù)合物降解異常蛋白的功能，若此復(fù)合物的功能減退，則導(dǎo)致異常蛋白選擇性聚集在黒質(zhì)多巴胺神經(jīng)元，妨礙多巴胺遞質(zhì)釋放和運(yùn)輸，產(chǎn)生PD樣癥狀，同時(shí)

14、產(chǎn)生細(xì)胞毒性，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。,36,PPT學(xué)習(xí)交流,3、細(xì)胞色素P450同工酶 ：能代謝很多內(nèi)外源性物質(zhì)。 亞家族CYP 2D6 可能與PD發(fā)病有關(guān)；在肝臟MPTP通過 CYP 2D6的代謝形成非毒性產(chǎn)物，而在腦中則經(jīng)MAO-B代謝形成有毒性的產(chǎn)物MPP+。如果細(xì)胞色素P450酶基因和阿樸脂蛋白E同時(shí)改變時(shí)，則誘導(dǎo)PD的發(fā)病的可能性加大。,（四）線粒體功能缺陷 MPTP 1-甲基-4-苯基吡啶離子(MPP+) 動(dòng)物（特別是靈長類動(dòng)物）產(chǎn)生類似PD的病理及臨床特點(diǎn) 機(jī)制：阻斷線粒體呼吸鏈復(fù)合物I （五）興奮性氨基酸的毒性作用 興奮性氨基酸L-谷氨酸與PD的發(fā)病有關(guān) ，主要通過N-甲基-D天冬氨酸

15、(NMDA)起作用。,MAO-B,誘發(fā),38,PPT學(xué)習(xí)交流,主要機(jī)制： 老齡動(dòng)物神經(jīng)突觸線粒體內(nèi)膜上的谷氨酸載體的轉(zhuǎn)運(yùn)活性明顯 谷氨酸和天冬氨酸的線粒體的內(nèi)外交換發(fā)生障礙 谷氨酸在細(xì)胞內(nèi)大量堆積，同時(shí)神經(jīng)細(xì)胞間隙的谷氨酸不能及時(shí)地被再攝取，引起NMDA型谷氨酸受體持久性激活 （1）改變Ca2+、Na+、Cl-等離子的通透性 ，破壞細(xì) 胞的生理穩(wěn)態(tài)平衡，使細(xì)胞腫脹、變性和壞死 ； （2）誘發(fā)線粒體內(nèi)自由基的生成 ； （3）引起線粒體腫脹和功能異常 。 黑質(zhì)變性 PD,39,PPT學(xué)習(xí)交流,（六）其他 1、炎癥反應(yīng)參與PD發(fā)病過程 PD病人和長期暴露于MPTP的黑質(zhì)和紋狀體有膠質(zhì)增生和反應(yīng)性小膠

16、質(zhì)細(xì)胞；在PD的黑質(zhì)中已經(jīng)觀察到有膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的白介素、干擾素、腫瘤壞死因子等炎癥反應(yīng)介質(zhì)。 2、細(xì)胞凋亡與PD發(fā)病 細(xì)胞凋亡參與神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育和老化的生理和病理過程，尚無明確的證據(jù)說明凋亡是否參與PD的發(fā)病，有些現(xiàn)象提示凋亡可能參與PD的發(fā) 病。,40,PPT學(xué)習(xí)交流,有研究表明，MPP+ 可誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)凋亡，而細(xì)胞凋亡因子Caspase抑制可降低MPTP的神經(jīng)毒性 。 3、免疫異常與PD發(fā)病 PD患者的血清對(duì)大鼠中腦DA神經(jīng)元有抑制作用，并呈補(bǔ)體依賴性的抑制效應(yīng)。PD患者中多數(shù)的病人腦脊液中含有能與黒質(zhì)多巴胺神經(jīng)元起免疫反應(yīng)的抗體，即多巴胺神經(jīng)元抗體 ；進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，PD患者中有78的病

17、人腦脊液中含有多巴胺神經(jīng)元抗體，而對(duì)照組病人的腦脊液中僅有3的人含有多巴胺神經(jīng)元抗體。,主要臨床表現(xiàn),主要癥狀 靜止性震顫 肌強(qiáng)直 運(yùn)動(dòng)遲緩 姿勢(shì)步態(tài)異常 初發(fā)癥狀：震顫最多(60%70%)，步行障礙(12%)、肌強(qiáng)直(10%)、運(yùn)動(dòng)遲緩(10%),42,PPT學(xué)習(xí)交流,帕金森震顫,多數(shù)患者以震顫為首發(fā)癥狀。一側(cè)上肢遠(yuǎn)端(手指)開始，逐漸擴(kuò)展到同側(cè)下肢及對(duì)側(cè)肢體，下頜、唇、舌及頭部最后受累。 靜止性震顫，46次/秒。拇指與食指“搓丸樣”(pill-rolling)動(dòng)作，安靜時(shí)出現(xiàn)。 多為不對(duì)稱性。 情緒激動(dòng)或精神緊張時(shí)加劇，睡眠中可完全消失。,43,PPT學(xué)習(xí)交流,肌強(qiáng)直,初期患者感到患肢運(yùn)動(dòng)

18、不靈活，有僵硬或緊張的感覺，出現(xiàn)動(dòng)作困難。 對(duì)側(cè)肢體的自主運(yùn)動(dòng)可誘導(dǎo)出肌張力的增高。 “鉛管樣強(qiáng)直”、“齒輪樣強(qiáng)直”。,44,PPT學(xué)習(xí)交流,運(yùn)動(dòng)遲緩,因肌張力增高、姿勢(shì)反射障礙，使起床、翻身、步行、變換方向等運(yùn)動(dòng)遲緩 病人有運(yùn)動(dòng)啟動(dòng)困難和動(dòng)作執(zhí)行困難，是病人最常見和較特殊的表現(xiàn)。 早期以肢體遠(yuǎn)端受累 對(duì)左旋多巴治療反應(yīng)好,45,PPT學(xué)習(xí)交流,運(yùn)動(dòng)遲緩的具體表現(xiàn),一般性表現(xiàn)： 動(dòng)作啟動(dòng)困難 自主動(dòng)作變慢、幅度變小 重復(fù)動(dòng)作易疲勞 做序列性動(dòng)作困難 不能同時(shí)做多個(gè)動(dòng)作 僵住,特殊表現(xiàn)： 解系鞋帶、扣紐扣難 “小寫癥” “面具臉” 手?jǐn)[動(dòng)減少 流涎 言語減少，語音低沉、單調(diào)。,46,PPT學(xué)習(xí)交

19、流,運(yùn)動(dòng)遲緩(bradykinesia),表情肌活動(dòng)少，雙眼凝視，瞬目減少，呈面具臉(masked face)，流涎,47,PPT學(xué)習(xí)交流,手指精細(xì)動(dòng)作(扣紐、系鞋帶等)困難；做序列性動(dòng)作困難，不能同時(shí)做多個(gè)動(dòng)作 隨意動(dòng)作減少，始動(dòng)困難,48,PPT學(xué)習(xí)交流,小寫癥(micrographia),49,PPT學(xué)習(xí)交流,姿勢(shì)步態(tài)異常,站-屈曲體姿 行-步態(tài)異常 轉(zhuǎn)彎-平衡障礙 早期下肢拖曳；之后小步態(tài)、啟動(dòng)困難、行走時(shí)上肢擺動(dòng)消失,50,PPT學(xué)習(xí)交流,屈曲體姿,51,PPT學(xué)習(xí)交流,四、PD的診斷和治療,診斷標(biāo)準(zhǔn) 1.靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、肌強(qiáng)直和姿勢(shì)性反射障礙；四個(gè)癥狀和體征中的二個(gè)。 2.排

20、除帕金森綜合征 沒有可以引起繼發(fā)性帕金森病的病因： 如腦外傷、腦血管疾病、病毒感染、金屬中毒、一氧化碳中毒等。 3.必要時(shí)可結(jié)合左旋多巴實(shí)驗(yàn)或阿樸嗎啡實(shí)驗(yàn)。,52,PPT學(xué)習(xí)交流,修訂的帕金森病診斷標(biāo)準(zhǔn)： 有下列表現(xiàn)三項(xiàng)以上的可以診斷： 1. 起?。阂粋€(gè)或多個(gè)肢體的運(yùn)動(dòng)緩慢、靜止性 震顫。 2. 明顯的單側(cè)分布起病形式。 3. 鉛管樣或齒輪樣強(qiáng)直，伴有面部、軀干或肢體的運(yùn)動(dòng)減少，姿勢(shì)反射異常等。 4. L-DOPA治療兩個(gè)月內(nèi)反應(yīng)良好（改善25%以上）。 左旋多巴可以改善臨床癥狀，降低死亡率，是治療PD的金標(biāo)準(zhǔn),53,PPT學(xué)習(xí)交流,不支持PD診斷的癥狀和體征： 1. 下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損害。 2.

21、 失用性步態(tài)障礙。 3. 小腦癥狀、意向性震顫。 4. 凝視麻痹。 5. 明顯的癡呆伴輕度錐體外系癥狀。 6. 嚴(yán)重的自主神經(jīng)功能障礙。,（二）PD的治療 1、 藥物治療 藥物治療是目前最常用的方法，主要針對(duì)增加多巴胺遞質(zhì)而改善癥狀： （1）左旋多巴：是數(shù)十年來最主要的治療藥物 ； （2）單胺氧化酶B（monoamine oxidase B, MAO-B）：抑制多巴胺的代謝； （3）多巴胺受體激動(dòng)藥：激活紋狀體神經(jīng)元上的 D1和D2多巴胺受體，增加多巴胺含量 ； （4）乙酰膽堿抑制藥。,55,PPT學(xué)習(xí)交流,2、其他正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)的新療法 （1）多巴胺能組織移植 （2）多巴胺和去甲腎上腺素的

22、微球體注入紋 狀體內(nèi)，能可控地釋放多巴胺 ； （3）神經(jīng)營養(yǎng)因子（neurotrophic factors, NTFs）的治療 A:膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF） B:腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）,56,PPT學(xué)習(xí)交流,GDNF和BDNF能提高多巴胺能神經(jīng)元的生存能力，減少M(fèi)PTP和6-羥多巴對(duì)黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)的損害，改善6-羥多巴所致的旋轉(zhuǎn)癥狀。 C:堿性成纖維細(xì)胞生長因子( bFGF) 能提高多巴胺合成酶-酪氨酸羥化酶(TH)免疫活性細(xì)胞的數(shù)目及活性。 將神經(jīng)營養(yǎng)因子注入到黑質(zhì)、紋狀體或腦室內(nèi)可以挽救PD患者的多巴胺能神經(jīng)元，減輕黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)損害產(chǎn)生的震顫麻痹癥狀。,57,PPT學(xué)習(xí)交

23、流,3、基因治療 PD的基因治療策略： （1）導(dǎo)入編碼多巴胺合成酶的基因以增加多巴 胺局部含量； （2）將神經(jīng)營養(yǎng)因子基因引入到黑質(zhì)和紋狀體 以阻止或減緩多巴胺能神經(jīng)元的退變，甚 至促進(jìn)損傷神經(jīng)元的恢復(fù)。 基因?qū)氲姆绞?： （1）直接體內(nèi)(in vivo)導(dǎo)入:載體 （2）間接體內(nèi)(ex vivo)導(dǎo)入:細(xì)胞,58,PPT學(xué)習(xí)交流,3.1 基因轉(zhuǎn)移的載體，用于直接體內(nèi)的表達(dá)載體,59,PPT學(xué)習(xí)交流,3.2 用于間接體內(nèi)的基因修飾細(xì)胞 基因修飾細(xì)胞：將外源基因克隆到一個(gè)合適的載體并導(dǎo)入體外培養(yǎng)的自體或異體靶細(xì)胞內(nèi)，這種細(xì)胞即是基因修飾細(xì)胞。 表達(dá)載體：真核表達(dá)質(zhì)粒和反轉(zhuǎn)錄病毒 靶細(xì)胞：神經(jīng)元

24、前體細(xì)胞、原代神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和成肌細(xì)胞等。,60,PPT學(xué)習(xí)交流,3.3 神經(jīng)遞質(zhì)替代的基因治療 將編碼合成多巴胺的酪氨酸羥化酶( tyroxine hydroxylase，TH ) 和其他與多巴胺合成相關(guān)的酶基因引入紋狀體，是目前基因治療PD的主要策略 。 直接體內(nèi)酶替代基因治療 A: 將攜帶TH基因的HSV-1擴(kuò)增子載體或AAV載體注射到腦內(nèi)，促進(jìn)多巴胺合成； B: AAV同時(shí)介導(dǎo)TH和GTPCH-I/ADCC基因進(jìn) 入紋狀體內(nèi)，增加多巴胺含量 ； C: 編碼D2受體的腺病毒載體進(jìn)入大鼠紋狀體， 增加D2受體的表達(dá)。,61,PPT學(xué)習(xí)交流, 間接體內(nèi)酶替代基因治療 間接體

25、內(nèi)方法通常先用磷酸鈣轉(zhuǎn)染或病毒感染的方法對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行基因修飾，再將攜帶目的基因的細(xì)胞植人腦內(nèi)以達(dá)到治療目的。 移植基因修飾細(xì)胞的治療效果明顯，但轉(zhuǎn)移基因細(xì)胞的表達(dá)呈進(jìn)行性下降，因此，長期表達(dá)是需要解決的問題。,62,PPT學(xué)習(xí)交流,3.4 神經(jīng)營養(yǎng)因子的基因治療 神經(jīng)營養(yǎng)因子的在PD中的作用： A: 能維持多巴胺能神經(jīng)元的存活； B: 促進(jìn)突起生長； C: 增強(qiáng)多巴胺神經(jīng)元對(duì)多巴胺的攝取能力； D: 減輕或防止多巴胺能神經(jīng)元的損傷，減輕 PD癥狀。,63,PPT學(xué)習(xí)交流, 直接體內(nèi)神經(jīng)營養(yǎng)因子基因治療 載體：Ad、AAV、HSV-1和慢病毒等病毒載體 神經(jīng)營養(yǎng)因子：最主要的是GDNF GDNF

26、作用：防止多巴胺神經(jīng)元的破壞，對(duì)黑質(zhì)多巴胺能系統(tǒng)產(chǎn)生保護(hù)和修復(fù)作用，減輕PD癥狀。 間接體內(nèi)神經(jīng)營養(yǎng)因子基因治療 GDNF, BDNF, bFGF 成纖維細(xì)胞、成肌細(xì)胞、星型膠質(zhì)細(xì)胞 基因修飾細(xì)胞 黑質(zhì)或紋狀體 分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子 減輕PD癥狀,反轉(zhuǎn)錄病毒載體,64,PPT學(xué)習(xí)交流,五、用于PD研究的動(dòng)物模型 （一）帕金森病動(dòng)物模型的發(fā)展： 19世紀(jì)50年代，Carlson，腹腔內(nèi)注射利血平后，表現(xiàn)出了類似人類帕金森病的癥狀。但是該模型不同個(gè)體間差別較大，而且其病理改變與人類PD大不相同。 1968，6-OHDA 80年代初期，MPTP,65,PPT學(xué)習(xí)交流,（二）利用6-羥多巴（6-OHDA）

27、制備的 大鼠PD模型 1. 6-OHDA的建模機(jī)制： (1) 黑質(zhì)內(nèi)的6-OHDA與DA競爭攝取位點(diǎn)； (2) 細(xì)胞內(nèi)外的氧化反應(yīng)把6-OHDA分解后產(chǎn)生活性氧，通過MAO誘導(dǎo)產(chǎn)生H2O2； (3) 直接引起線粒體功能障礙。,2. 6-OHDA制模的方法： 完全損傷模型 ：用成年健康SD大鼠或Wistar大鼠麻醉后，固定于立體定位儀，將6-OHDA定向注射于大鼠的內(nèi)側(cè)前腦束（Medial Forebrain Bundle, MFB）或黑質(zhì)。 模型成功標(biāo)準(zhǔn)：模型制備成功后，外周注射DA能受體直接激動(dòng)劑（如阿普嗎啡、左旋多巴等）能誘發(fā)動(dòng)物向健側(cè)旋轉(zhuǎn)，促DA釋放劑如苯丙胺等能誘發(fā)動(dòng)物向損傷側(cè)旋轉(zhuǎn)。,

28、67,PPT學(xué)習(xí)交流, 部分損傷模型 ： A: 小劑量6-OHDA黑質(zhì)內(nèi)注射； B: 黑質(zhì)致密部（substantia nigra pars compacta，SNpc）周圍注射，外側(cè)單點(diǎn)注射和內(nèi)外側(cè)兩點(diǎn)注射； C: 紋狀體內(nèi)注射。,68,PPT學(xué)習(xí)交流,3. 6-OHDA模型的行為測(cè)定與評(píng)定： 大鼠PD模型制備成功的標(biāo)準(zhǔn)：注入誘導(dǎo)劑后，通過旋轉(zhuǎn)測(cè)量儀計(jì)算30分鐘內(nèi)大鼠旋轉(zhuǎn)的總次數(shù)，若超過平均7轉(zhuǎn)/分鐘，連續(xù)4周誘發(fā)旋轉(zhuǎn)次數(shù)穩(wěn)定，表示損毀穩(wěn)定，可認(rèn)為模型制備成功。 完全損傷模型 ：可模擬晚期帕金森病病人的特征，主要用于黑質(zhì)細(xì)胞移植，TH基因及膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子移植等研究。 6-OHDA單側(cè)損

29、毀模型 ：用于PD的發(fā)病機(jī)制及藥物療效判定、細(xì)胞移植治療、基因治療和神經(jīng)保護(hù)治療等方面的研究。,69,PPT學(xué)習(xí)交流,（三）利用MPTP制作的帕金森病動(dòng)物模型 1. MPTP制模的方法 . 非人靈長類動(dòng)物雙側(cè)PD模型； . 非人靈長類動(dòng)物偏側(cè)PD模型； . 小鼠PD模型； . 貓的PD模型。,70,PPT學(xué)習(xí)交流,2. MPTP的制模機(jī)制：MPTP 主要通過MPP+ 發(fā)揮作用 （1）抑制線粒體的呼吸功能； （2）產(chǎn)生氧自由基和改變Ca2+流； 使黑質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞減少。 （3）低濃度的MPP+能誘發(fā)黑質(zhì)細(xì)胞發(fā)生凋 亡，而高濃度的MPP+則導(dǎo)致細(xì)胞死亡。,71,PPT學(xué)習(xí)交流,3. MPTP模型的行為測(cè)定與評(píng)價(jià)： . 非人靈長類雙側(cè)PD動(dòng)物模型： 較少用 . 非人靈長類偏側(cè)PD動(dòng)物模型：是目前建立 機(jī)制、診斷和治療等方面的研究。 . 貓PD模型： 在PD基礎(chǔ)和臨床藥理研究方 面具有很好的應(yīng)用價(jià)值。 . 小鼠MPTP模型：主要用于檢測(cè)藥物毒性機(jī) 制等實(shí)驗(yàn)，一般不進(jìn)行行為測(cè)定。,72,PPT學(xué)習(xí)交流,（四）利用其它藥物和方法制作的PD動(dòng)物模型： 1. 遺傳學(xué)模型：-神經(jīng)突觸核蛋白基因和 Parkin基因PD動(dòng)物模型。 2.免疫損傷模型：將PD患者血清免疫球蛋白 或免疫激活劑