實(shí)驗(yàn)二 外植體的滅菌與接種.ppt

1、實(shí)驗(yàn)二外植體的滅菌和接種，一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖峭ㄟ^實(shí)驗(yàn)，初步掌握外植體植物材料消毒、接種無菌操作技術(shù)以及外植體愈傷組織誘導(dǎo)和分化的方法。 二、實(shí)驗(yàn)原理植物組織培養(yǎng)是應(yīng)用無菌操作培養(yǎng)離體植物器官和組織以及單個(gè)細(xì)胞球的過程。 組織培養(yǎng)所用植物材料帶菌時(shí)，在接種前選擇合適的消毒劑對(duì)植物外植體進(jìn)行表面消毒，獲得無菌材料進(jìn)行組織培養(yǎng)，是獲得組織培養(yǎng)成功的最基本前提和重要保證。 植物細(xì)胞球有全能性，外植體在合適的培養(yǎng)基中脫分化，形成可迅速增殖的具有特定結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞球團(tuán)愈傷組織。 植物生長調(diào)節(jié)劑是外植體形成愈傷組織和愈傷組織分化的重要影響因素。 消毒目的：用表面消毒劑殺滅植物材料(外植體)表面微生物等云同步，

2、盡量維持植物材料的生活力。 三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑及器具(1)材料：煙葉(2)試劑及培養(yǎng)基10% aClO (全班2000mL) 75%乙醇(全班2000mL，已調(diào)配)無菌水0.1%新卸妝水(全班2000mL煙葉調(diào)配的培養(yǎng)基(8組) (脫脂棉、標(biāo)簽條紙、馬克筆、酒精燈、燒杯、大頭針定徑套、剪刀、解剖刀等4種，操作順序培養(yǎng)基，儀器滅菌(實(shí)驗(yàn)完成)，打開超潔凈工作臺(tái)紫外線燈管20min，熄燈后20min即可進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室， 進(jìn)入接種室：穿著滅菌工作服裝，換拖鞋，接種前的7.5 %酒精或0.1%新卸妝手，外植體，自來水洗凈，7.5 %酒精浸漬30s，aClO浸漬15-20min，無菌水洗4-5次，無菌吸水紙

3、干燥，被分割成邊長為0.81cm的正方形接種火焰上蓋上蓋子，培養(yǎng)，用超潔凈工作臺(tái)進(jìn)行，粘貼標(biāo)簽條，清掃超潔凈工作臺(tái)， 注意事項(xiàng)接種接種前的75%酒精或0.1%新卸妝手進(jìn)入接種室：穿著滅菌工作服裝，換拖鞋接種時(shí)盡量不要來往于接種室(防止超潔凈臺(tái)的氣流變動(dòng))，使用超潔凈臺(tái)，接種前75酒精或者用1%新清潔液擦拭超清潔工作臺(tái)的桌面，將培養(yǎng)基和接種器具放入超清潔工作臺(tái)的桌面，點(diǎn)亮超清潔工作臺(tái)的紫外線燈管，照射約2030 min使紫外線燈管熄滅，打開送風(fēng)開關(guān)進(jìn)行10 min換氣后， 可點(diǎn)亮熒光燈進(jìn)行外植體消毒和接種等無菌操作，標(biāo)簽條形式(例)材料名稱：煙(葉)培地名：MS NAA2mg/L 6-BA1mg/L接種日： xxx名稱： xxx，5，觀察記錄，觀察污染情況的細(xì)菌性污染： 接種后12天真菌性污染：出現(xiàn)了不同的顏色(霉菌)，接種后3-10天材料變黃的組織變軟是因?yàn)橄緯r(shí)間長，組織破壞死亡污染率(%