熒光分析測(cè)定維生素c

1、熒光分析法測(cè)定維生素c，其測(cè)定原理，實(shí)驗(yàn)及熒光分析法測(cè)定維生素c，說(shuō)明何，1。維生素c及其測(cè)定原理1.1維生素c，又稱(chēng)抗壞血酸，是維持人體正常生理功能的重要維生素之一，但人體不能自行合成，只能從食物和藥物中攝取。因此，食品和藥品中維生素c的分析具有重要意義。1.2維生素c的測(cè)定方法常用的維生素c測(cè)定方法包括分光光度法、電化學(xué)法、滴定法、酶法和色譜法。本實(shí)驗(yàn)提出了一種新的測(cè)定維生素c的熒光分析方法：維生素c被cu2氧化成脫氫抗壞血酸，然后與苯甲酸和十六烷基三甲基溴化銨協(xié)同敏化。維生素c的定量分析是通過(guò)測(cè)量系統(tǒng)的熒光強(qiáng)度進(jìn)行的。第二，熒光分析法測(cè)定維生素c的實(shí)驗(yàn)。1主要儀器和試劑分子光度計(jì)：ls-

2、55酸度計(jì)：ph-211榨汁機(jī)：cw-je04電熱恒溫水?。篽h。sy11-n i1硫酸銅溶液33602.010-3克/升十六烷基三甲基溴化銨溶液：6。0 10- 4克/毫升苯甲酸溶液：1。0 10- 4克/升維生素c標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液33605.010-4克/毫升，28(避光)；維生素c標(biāo)準(zhǔn)溶液：1。0 10- 5克/毫升，2 8(避光保存)；氫氧化鈉-鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液：酸堿度=6.0；1.2實(shí)驗(yàn)步驟(1)準(zhǔn)備待測(cè)樣品和空白對(duì)照，加入0。6毫升硫酸銅溶液，2。0毫升十六烷基三甲基溴化銨溶液，2。0 m l苯甲酸溶液、一定體積的維生素c標(biāo)準(zhǔn)溶液和5。將0毫升氫氧化鈉-鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液依次

3、倒入25毫升比色管中，用蒸餾水保持體積不變，搖勻；不含維生素c的溶液用作空白對(duì)照。(2)水浴加熱；在35恒溫水浴中加熱30m in；將流動(dòng)的水冷卻至室溫。(3)熒光分析將待測(cè)樣品置于樣品架上，設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)為308 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為408 nm，測(cè)量熒光強(qiáng)度f(wàn)，取不含維生素c的試劑空白為f0，計(jì)算f=f-f0。2結(jié)果和討論2。1激發(fā)光譜和發(fā)射光譜取3。0毫升維生素c標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照實(shí)驗(yàn)方法操作。激發(fā)光譜和發(fā)射光譜分別在290330納米和360460納米掃描獲得，如圖1和圖2所示。從圖1和圖2可以看出，當(dāng)激發(fā)波長(zhǎng)為308 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為408 nm時(shí)，系統(tǒng)的熒光強(qiáng)度最高，試劑空白的熒光值相對(duì)較低且

4、穩(wěn)定，因此在本實(shí)驗(yàn)中激發(fā)波長(zhǎng)為308 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為408 nm。c1u2ba緩沖溶液；2 cu2 ba維生素c緩沖溶液ctmab，1 c u2 ba緩沖溶液ctmab；cu2 ba維生素c緩沖溶液ctmab，激發(fā)光譜，發(fā)射光譜，2。2試劑添加順序按照實(shí)驗(yàn)方法操作。在每種試劑用量相同的條件下，測(cè)試了不同試劑添加順序?qū)晒鈴?qiáng)度的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)添加的試劑順序?yàn)榱蛩徙~溶液、苯甲酸溶液、維生素c標(biāo)準(zhǔn)溶液和氫氧化鈉-鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液時(shí)，體系的熒光強(qiáng)度最高，因此該添加順序是最佳的試劑添加順序。2.3緩沖溶液的酸堿度對(duì)體系的熒光強(qiáng)度有很大影響。測(cè)試了不同酸堿度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響。根據(jù)酸堿度的熒

5、光強(qiáng)度曲線(xiàn)，當(dāng)酸堿度為5時(shí)。9 6.2，熒光強(qiáng)度達(dá)到最大值，相對(duì)穩(wěn)定，因此確定最佳酸堿度為6。0.緩沖溶液的類(lèi)型也對(duì)系統(tǒng)的熒光強(qiáng)度有一定的影響。下列緩沖溶液的酸堿度為6。0:n oh-kh2po 4，kh2po4硼砂，kh2 po4-na2 h po4，naoh-鄰苯二甲酸氫鉀，na2 h po4-檸檬酸，naoh-檸檬酸鈉，ha c-naa c等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)緩沖溶液為氫氧化鈉-鄰苯二甲酸氫鉀時(shí)，熒光強(qiáng)度最大且穩(wěn)定。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇氫氧化鈉-鄰苯二甲酸氫鉀作為緩沖溶液，最佳用量為5。0米長(zhǎng)2.4通過(guò)加熱溫度和加熱時(shí)間測(cè)試了不同溫度對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明，當(dāng)加熱溫度為35時(shí)，不僅可

6、以提高體系的反應(yīng)速度，而且可以防止反應(yīng)物和產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的破壞。通過(guò)改變加熱時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)在35個(gè)水浴中加熱30分鐘時(shí)，體系的熒光強(qiáng)度達(dá)到最大，且相對(duì)穩(wěn)定。測(cè)試了硫酸銅和苯甲酸的用量對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明，硫酸銅用量為0。苯甲酸的用量為2。0毫升時(shí)，體系的熒光強(qiáng)度最高。2.6測(cè)試了十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基磺酸鈉和-環(huán)糊精對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明，表面活性劑能在一定程度上增強(qiáng)體系的熒光強(qiáng)度，其中ctmab對(duì)體系的增強(qiáng)效果最好。進(jìn)一步測(cè)試了單克隆抗體的量對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響。當(dāng)ctmab的量為2時(shí)。該體系的熒光強(qiáng)度最高。3.應(yīng)用熒光分析法測(cè)定維生素c取一片維生素c片進(jìn)行樣品測(cè)定

7、，研磨并混合均勻，準(zhǔn)確稱(chēng)取0。152 0克，將其溶解在二次蒸餾水中，然后將其轉(zhuǎn)移到500毫升容量瓶中進(jìn)行定容，以制備水溶液。準(zhǔn)確取出10微升該溶液，并將其稀釋成100微升溶液作為樣品稀釋劑。測(cè)量樣品稀釋劑并進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)回收試驗(yàn)。同時(shí)，這種方法被用來(lái)確定西紅柿和水果的寶藏。準(zhǔn)確稱(chēng)量一定量的水果珍品，并將其配制成100毫升溶液。將洗凈的西紅柿榨汁，稱(chēng)取一定量的番茄汁，制成100毫升的溶液。其他步驟同維生素c片的測(cè)定方法。樣品測(cè)定結(jié)果列于表3表3樣品測(cè)定結(jié)果(n=3)。從表3可以看出，熒光分析法用于測(cè)定維生素c片劑、番茄和水果珍品中維生素c的含量，回收率為96。7%和100。5%。表3樣品測(cè)定結(jié)果(n=3)。熒光分析具有操作簡(jiǎn)單、精度高、檢出限低等優(yōu)點(diǎn)。該方法可用于水果、蔬菜和藥品中維生素c的測(cè)定，適合推廣。感謝您的收看！最后，利用某些物質(zhì)在光照射下的熒光特性和強(qiáng)度對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析，這就是熒光光譜分析。保持激發(fā)光的波長(zhǎng)和強(qiáng)度不變，讓熒光物質(zhì)產(chǎn)生的熒光通過(guò)發(fā)射單色儀照射到探測(cè)器上，調(diào)節(jié)發(fā)射單色儀到不同的波長(zhǎng)，探測(cè)器測(cè)量相應(yīng)的熒光強(qiáng)度，然后以熒光波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱