GB 19171-2003 雙孢蘑菇菌種

GB19171-2003

前言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B均為規(guī)范性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:福建省輕工業(yè)研究所、福建省蘑菇菌種研究推廣站。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:王澤生、廖劍華、曾輝、陳軍、陳美元。

GB19171-2003

引言

栽培雙抱落菇使用的菌種是人工培育的純菌絲體及其培養(yǎng)基的混合體。我國(guó)采用三級(jí)擴(kuò)大繁育程

序(即母種、原種、栽培種)培育雙抱蘑菇菌種。

為了規(guī)范我國(guó)雙抱蘑菇菌種生產(chǎn)、經(jīng)銷和使用，確保我國(guó)雙抱蘑菇生產(chǎn)持續(xù)健康發(fā)展，特制定本

標(biāo)準(zhǔn)。

CB19171-2003

雙抱蘑菇菌種

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雙抱蘑菇(Agaricus

裝、貯運(yùn)等。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于雙抱蘑菇(Agaricus

bisporus)菌種的質(zhì)量要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則及標(biāo)簽、標(biāo)志、包

bisporus)菌種的生產(chǎn)、經(jīng)銷和使用。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是

否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志(GB/T191-2000,egvISO780;1997)

GB/T4789.28食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)染色法、培養(yǎng)基和試劑

GB/T12728-1991食用菌術(shù)語

GB19172-2003平菇菌種

NY/T528-2002食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.1

母種stockculture

經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實(shí)性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，以玻璃試管為培養(yǎng)容器和

使用單位，也稱一級(jí)種、試管種。

[NY/T528-2002，定義3.31

3.2

原種pre-culturespawn

由母種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶或15cmX28cm聚

丙烯塑料袋為容器。

[NY/T528-2002，定義3.4〕

3.3

栽培種spawn

由原種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃瓶或塑料袋為容器。栽培種只能用于栽

培，不可再次擴(kuò)大繁殖菌種。

[NY/T528-2002，定義3.5」

3.4

領(lǐng)頑現(xiàn)象antagonism

具有不同遺傳基因的菌落間產(chǎn)生不生長(zhǎng)區(qū)帶或形成不同形式線行邊緣的現(xiàn)象。

[GB19172-2003，定義3.4〕

3.5

角變sector

I

G日19171-2003

因菌絲體局部變異或感染病毒而導(dǎo)致菌絲變細(xì)、生長(zhǎng)緩慢、菌絲體表面特征成角狀異常的現(xiàn)象。

[GB19172-2003，定義3.51

3.6

高溫抑制級(jí)hightemperaturedline

食用菌菌種在生產(chǎn)過程中受高溫的不良影響，培養(yǎng)物出現(xiàn)的圈狀發(fā)黃、發(fā)暗或菌絲變稀弱的

現(xiàn)象。

[GB19172-2003，定義3.61

3.7

同工陣isoenzyme

催化相同生化反應(yīng)，而結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)不同的酶分子。通過凝膠電泳使同工酶分離成遷移率不同

的區(qū)帶，經(jīng)生物化學(xué)染色后顯示出的同工酶譜，可對(duì)生物品種進(jìn)行酶分子水平的鑒別或鑒定。

3.8

生物學(xué)效率biologicalefficiency

單位數(shù)量培養(yǎng)料的干物質(zhì)與所培養(yǎng)產(chǎn)生出的子實(shí)體或菌絲體干重之間的比率。

[GB/T12728-1991，定義2.1.20]

3.9

種性charactersofvariety

食用菌的品種特性是鑒別食用菌菌種或品種優(yōu)劣的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。一般包括對(duì)溫度、濕度、酸堿

度、光線和氧氣的要求，抗逆性、豐產(chǎn)性、出菇遲早、出菇潮數(shù)、栽培周期、商品質(zhì)量及栽培習(xí)性等農(nóng)藝

性狀。

[NY/T528-2002，定義3.8]

4質(zhì)量要求

4.1母種

4.1.1容器規(guī)格應(yīng)符合NY/T528-2002中4.7.1.1規(guī)定。

4.1.2感官要求應(yīng)符合表1規(guī)定。

表1母種感官要求

項(xiàng)目

要求

容器

完整，無損

棉塞或無棉塑料蓋

干操、潔凈，松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求

培養(yǎng)基滋人it

為試管總?cè)莘e的四分之一至五分之一

培養(yǎng)基斜面長(zhǎng)度頂端距棉塞40mm^-50mm

接種量(接種塊大小)

(3-5)mmX(3--5)mm

菌種外觀

菌絲生長(zhǎng)量

長(zhǎng)滿斜面

菌絲體特征潔白或米白、濃密、羽毛狀或葉脈狀

菌絲體表面

均勻、平整、無角變

菌絲分泌物

無

菌落邊緣

整齊

雜菌菌落

無

斜面背面外觀培養(yǎng)基不干縮，頗色均勻、無暗斑、無色素

氣味有雙泡曹菇菌種特有的香味，無酸、臭、霉等異味

GB19171-2003

4.1.3微生物學(xué)要求應(yīng)符合表2規(guī)定。

表2母種徽生物學(xué)要求

項(xiàng)目要求

菌絲粗壯

雜菌無

4.1.4菌絲生長(zhǎng)速度:在PDA培養(yǎng)基上，在適溫(24℃士10C)下，15天~20天長(zhǎng)滿斜面。

4.1.5母種遺傳和栽培性狀:供種單位需對(duì)所供母種進(jìn)行醋酶(Est)同工酶類型鑒定，確認(rèn)其遺傳類型

與對(duì)照相同后，再經(jīng)出菇試驗(yàn)確證農(nóng)藝性狀和商品性狀等種性合格后，方可用于擴(kuò)大繁殖或出售。

4.1.5.1菌絲體Est同工酶的板狀聚丙烯酞胺凝膠電泳類型:包括G型(呈現(xiàn)el,e3特征帶),H型

(呈現(xiàn)e2,e4和e30-e33特征帶)、HG1-HG2型(呈現(xiàn)el,e3,e30-e33特征帶)和HG4型(呈現(xiàn)el,

e2,e3,e4和e30-e33特征帶)等。以Est區(qū)帶向正極泳動(dòng)距離與澳酚藍(lán)指示劑向正極泳動(dòng)距離的比值

作為電泳相對(duì)遷移率(R.).el,e2,e3,e4,e30,e31,e32和e33的Rm值分別為0.820,0.810,0.760,

0.750,0.128,0.100,0.070和0.010,

4.1.5.2菌絲萌發(fā)、定植與生長(zhǎng)能力:接種到適合的培養(yǎng)基后，在正常條件下24h內(nèi)萌發(fā)，定植迅速、

菌絲健壯。

4.1.5.3結(jié)菇轉(zhuǎn)潮能力:覆土后12天~16天結(jié)菇，分布均勻;18天~22天采菇，每潮菇間

隔7天一10天。

4.1.5.4生物學(xué)效率:在正常條件下生物學(xué)效率不低于30a,

4.2原種

4.2.1容器規(guī)格應(yīng)符合NY/T528-2002中4.7.1.2規(guī)定。

4.2.2感官要求應(yīng)符合表3規(guī)定。

表3原種感官要求

項(xiàng)目要求

容器完整，無損

棉塞或無棉塑料蓋干燥、潔凈，松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求

培養(yǎng)基上表面距瓶口的距離50mm士5mm

接種量(每支母種接原種數(shù)，接種物大小)(4^-6)瓶(袋),)12-.X15mm

菌種外觀

菌絲生長(zhǎng)量長(zhǎng)滿容器

菌絲體特征潔白濃密、生長(zhǎng)旺健

表面菌絲體生長(zhǎng)均勻，無角變，無高溫抑制線

培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶(袋)壁，無干縮

表面分泌物無

雜菌菌落

無

靚頑現(xiàn)象

無

氣味有雙泡蘑菇菌種特有的香味，無酸、臭、霉等異味

4.2.3微生物學(xué)指標(biāo)應(yīng)符合表2規(guī)定。

4.2.4菌絲生長(zhǎng)速度:在適宜培養(yǎng)基上，在適溫(24℃士1'C)下菌絲長(zhǎng)滿容器不超過45天。

4.3栽培種

4.3.1容器規(guī)格應(yīng)符合NY/T528-2002中4.7.1.3規(guī)定。

GB19171-2003

4.3.2感官要求應(yīng)符合表4規(guī)定。

表4栽培種感官要求

項(xiàng)目

要求

容器

完整，無損

棉塞或無棉塑料蓋

干燥、潔凈，松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求

培養(yǎng)基面距瓶(袋)口的距離

50--士5mm

接種量仁每瓶(袋)原種接栽培種數(shù)習(xí)

(30-50)瓶(袋)

菌種外觀

菌絲生長(zhǎng)量

長(zhǎng)滿容器

菌絲體特征

潔白濃密、生長(zhǎng)旺健

不同部位菌絲體

生長(zhǎng)均勻，無角變，無高溫抑制線

培養(yǎng)基及菌絲體

緊貼瓶(袋)壁，無干縮

表面分泌物

無

雜菌菌落

無

頗頑現(xiàn)象

無

氣味

有雙抱蘑菇菌種特有的香味，無酸、臭、霉等異味

4.3.3

4.3.4

微生物學(xué)指標(biāo)應(yīng)符合表2規(guī)定。

菌絲生長(zhǎng)速度:在適宜培養(yǎng)基上，在適溫(24℃士10C)下菌絲長(zhǎng)滿瓶(袋)不超過45天。

5抽樣

5.1質(zhì)檢部門的抽樣應(yīng)具有代表性。

5.2母種按品種、培養(yǎng)條件、接種時(shí)間分批編號(hào)，原種、栽培種按菌種來源、制種方法和接種時(shí)間分批編

號(hào)。按批隨機(jī)抽取被檢樣品。

5.3母種、原種、栽培種的抽樣量分別為該批菌種量的100/a,5%,10/a。但每批抽樣數(shù)量不得少于10支

(瓶、袋);超過100支(瓶、袋)的，可進(jìn)行兩級(jí)抽樣。

6試驗(yàn)方法

6.1感官檢驗(yàn)

按表5逐項(xiàng)進(jìn)行。

表5感官檢驗(yàn)方法

檢驗(yàn)項(xiàng)目

檢驗(yàn)方法

}檢驗(yàn)項(xiàng)目

檢驗(yàn)方法

容器肉眼觀察

接種量

母種、原種

肉眼觀察

栽培種檢查生產(chǎn)記錄

棉塞、無棉塑料蓋

肉眼觀察

一’絲生長(zhǎng)’

肉眼觀察

母種培養(yǎng)基灌人量

肉眼觀察}菌種夕卜觀各項(xiàng)

{‘雜菌菌落除外，

肉眼觀察

母種斜面長(zhǎng)度

肉眼觀察

一雜菌菌·

肉眼觀察，必要時(shí)用

5X放大鏡觀察

母種斜面正面外觀各項(xiàng)

肉眼觀察

培養(yǎng)基上表面距瓶

(袋)口的距離

肉眼觀察

1

鼻嗅

GB19171一2003

62微生物學(xué)檢驗(yàn)

6.21表2中菌絲和雜菌用放大倍數(shù)不低于10x40的光學(xué)顯微鏡對(duì)培養(yǎng)物的水封片進(jìn)行觀察，每一

檢樣應(yīng)觀察不少于50個(gè)視野。

6.22細(xì)菌檢驗(yàn):取少量疑有細(xì)菌污染的培養(yǎng)物，按無菌操作接種于GB/T4789.28中4.8規(guī)定的營(yíng)

養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液中，25℃一28℃振蕩培養(yǎng)1天一2天，觀察培養(yǎng)液是否混濁。培養(yǎng)液混濁，為有細(xì)菌污染;

培養(yǎng)液澄清，為無細(xì)菌污染。

6.2.3霉菌檢驗(yàn):取少量疑有霉菌污染的培養(yǎng)物，按無菌操作接種于PDA培養(yǎng)基(見附錄A)中，

25℃~28℃培養(yǎng)3天~4天，出現(xiàn)雙抱蘑菇菌落以外的菌落，或有異味者為霉菌污染物，必要時(shí)進(jìn)行水

封片鏡檢。

6.3菌絲生長(zhǎng)速度

6.3.1母種:PDA培養(yǎng)基，在24℃士1℃下培養(yǎng)，計(jì)算長(zhǎng)滿需天數(shù)。

6.3.2原種和栽培種:采用第B.1章或第B.2章規(guī)定的配方之一，在24℃士1℃下培養(yǎng)，計(jì)算長(zhǎng)滿需

天數(shù)。

6.4母種遺傳和栽培性狀

6.4.1菌絲體Est同工酶的板狀聚丙烯酞胺凝膠電泳:取菌齡為15天~20天的試管母種，刮取菌絲，

按1:3:。.5的比例混合菌絲(9)、0.lmol/L磷酸緩沖液(mL)和石英砂(9)，研磨成勻漿，臺(tái)式離心機(jī)

1000or/min離心smin，取上清液，按5:1:1的比例混合上清液、40%蔗糖和。.01%嗅酚藍(lán)溶液作為

電泳樣品，4℃下冷藏備用。采用聚丙烯酞胺凝膠電泳。用pHS.gTris一HCI緩沖液配制9腸分離膠，用

pHS.3Tris一甘氨酸作電極緩沖液。點(diǎn)樣75嚴(yán)L，3℃下12oV電泳Zomin后穩(wěn)壓ZOOV，4h。用固藍(lán)

RR鹽6omg，0.lmol/L磷酸緩沖液(pH6.0)somL，a一禁乙酷38mg和民蔡乙醋38mg溶于3mL丙酮

配制的染色液，染色，顯現(xiàn)酶譜，再根據(jù)特征帶分型。

6.42栽培性狀:使用附錄B中B.2.1培養(yǎng)基按表6各項(xiàng)觀察記錄。

6.4.2.1菌絲萌發(fā)、定植與生長(zhǎng)能力:接種到附錄B中B.2.1培養(yǎng)基(含水量提高到68%)上，在適溫

(24℃士1℃)下培養(yǎng)，肉眼觀察菌絲萌發(fā)、定植與生長(zhǎng)情況。

6.4.2.2結(jié)菇轉(zhuǎn)潮能力:栽培試驗(yàn)，肉眼觀察，計(jì)算覆土到出第一潮菇的時(shí)間。

6.4.2.3生物學(xué)效率:栽培試驗(yàn)，記錄、統(tǒng)計(jì)產(chǎn)量，按GB/T12728一1991中2.120規(guī)定計(jì)算。

6.4.2.4栽培試驗(yàn):將被檢母種制成原種。采用附錄B中B.2.1的培養(yǎng)基配方(含水量提高到68%)，

配制360kg培養(yǎng)基，接種后分三組(每組2m2)進(jìn)行常規(guī)管理，根據(jù)表6所列項(xiàng)目，做好栽培記錄，統(tǒng)計(jì)

檢驗(yàn)結(jié)果。同時(shí)將該母種的出發(fā)菌株設(shè)為對(duì)照，亦做同樣處理。對(duì)比二者的檢驗(yàn)結(jié)果，以時(shí)間計(jì)的檢驗(yàn)

項(xiàng)目中，被檢母種的任何一項(xiàng)時(shí)間較對(duì)照菌株推遲5天以上(含5天)者，為不合格;產(chǎn)量顯著低于對(duì)照

菌株者，為不合格;菇體外觀形態(tài)與對(duì)照明顯不同或畸形者，為不合格。

裹6母種栽培中農(nóng)藝性狀和商品性狀檢驗(yàn)記錄

檢驗(yàn)項(xiàng)目檢驗(yàn)結(jié)果

檢驗(yàn)項(xiàng)目檢驗(yàn)結(jié)果

母種長(zhǎng)滿所需時(shí)間/天

一

原種長(zhǎng)滿所需時(shí)間/天

一

栽培種長(zhǎng)滿所需時(shí)間/天

一

菌種萌發(fā)所需時(shí)間/天

一

菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基所需時(shí)間/天

一

覆土至扭結(jié)所需時(shí)間/天

}

覆土至采菇所需時(shí)間/天一菇蓋直徑、厚度、柄

}長(zhǎng)、柄粗(直徑)/mm

CB19171-2003

6.5留樣

各級(jí)菌種都要留樣備查，留樣的數(shù)量應(yīng)每個(gè)批號(hào)菌種((3^-5)支(瓶、袋)，于40C^-6℃下貯存，母種

5個(gè)月，原種4個(gè)月，栽培種2個(gè)月。

7檢驗(yàn)規(guī)則

判定規(guī)則按質(zhì)量要求進(jìn)行。檢驗(yàn)項(xiàng)目全部符合質(zhì)量要求時(shí)，為合格菌種，其中任何一項(xiàng)不符合要

求，均為不合格菌種。

8標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存

8.1標(biāo)簽、標(biāo)志

8.1.，產(chǎn)品標(biāo)簽

每支(瓶、袋)菌種必須貼有清晰注明以下要素的標(biāo)簽:

a)產(chǎn)品名稱(如:雙抱蘑菇母種);

b)品種名稱(如:As2796);

c)生產(chǎn)單位(XXX菌種廠);

d)接種日期(如:2000.XX.XX);

e)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。

8.1.2包裝標(biāo)簽

每箱菌種必須貼有清晰注明以下要素的包裝標(biāo)簽:

a)產(chǎn)品名稱、品種名稱;

b)廠名、廠址、聯(lián)系電話;

c)出廠日期;

d保質(zhì)期、貯存條件;

e)數(shù)量;

f)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。

8.1.3包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示

按GB/T191規(guī)定，應(yīng)注明以下圖示標(biāo)志:

a)小心輕放標(biāo)志;

b)防水、防潮、防凍標(biāo)志;

c)防曬、防高溫標(biāo)志;

d)防止倒置標(biāo)志;

e)防止重壓標(biāo)志。

8.2包裝

8.2.1母種外包裝采用木盒或有足夠強(qiáng)度的紙材制做的紙箱，內(nèi)部用棉花、碎紙、報(bào)紙等具有緩沖作用

的輕質(zhì)材料填滿。

8.2.2原種、栽培種外包裝采用有足夠強(qiáng)度的紙材制做的紙箱，菌種間用碎紙、報(bào)紙等具有緩沖作用的

輕質(zhì)材料填滿。紙箱上部和底部用8cm寬的膠帶封口，并用打包帶捆扎兩道，箱內(nèi)附產(chǎn)品合格證書和

使用說明(包括菌種種性、培養(yǎng)基配方及適用范圍)。

8.3運(yùn)輸

8.3.1不得與有毒物品混裝。

8.3.2氣溫達(dá)30℃以上時(shí)，需用20C-20℃的冷藏車運(yùn)輸。

8.3.3運(yùn)輸中