第3章食用菌菌種的制作.ppt

1、第三章食用菌菌種的制作,一、母種，也稱一級菌種或試管種 母種鑒定： 潔白，健壯，無蟲害，有蘑菇香味,第一節(jié) 食用菌菌種的概述,二、原種，也稱二級菌種 原種鑒定： 潔白，健壯，有凝水，不干燥,三、栽培種，也稱三級菌種 栽培種鑒定：潔白，健壯，有凝水，不干燥, 一般不超過25-35天,第二節(jié) 培養(yǎng)基,根據(jù)各種食用菌生長時對營養(yǎng)物質(zhì)的要求，用人工方法配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)，供菌絲生長發(fā)育，把這種營養(yǎng)物質(zhì)叫培養(yǎng)基。它如同農(nóng)作物需要土壤、肥料，動物需要飼料一樣。 目前，人們采用的培養(yǎng)基相當(dāng)多，種類各不相同。不論哪種培養(yǎng)基都有共同特點：一般都含有水分、碳源、氮源、無機鹽以及生長因子等。,碳源是構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)的主

2、要元素，也是食用菌生長發(fā)膏所需能量來源。碳源的主要原料是糖類、淀粉、纖維素物質(zhì)。代表物質(zhì)是葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麩皮、米糠、鋸木屑、棉籽殼等。 氮源是食用菌細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中蛋白質(zhì)和核酸的主要元素，蛋白質(zhì)和核酸是生命的基本物質(zhì)。一切生命活動都離不開這些物質(zhì)。氮源主要有氨基酸、蛋白胨、尿素、硫酸銨、含有氮素的物質(zhì)有玉米、棉籽殼。 培養(yǎng)基中的無機鹽雖用量不多；但不可缺少，它主要是酶類的組成成分，調(diào)節(jié)各種生命代謝活動，如磷酸二氫鉀、硫酸鎂。 生長因子需要量很少，是培養(yǎng)基中的特殊營養(yǎng)物質(zhì)，它是維持食用菌正常生長所不可缺少的生長因素。如馬鈴薯、 麩皮、米糠等都含有豐富的生長因子，維生素也屬此類。,1.天然

3、培養(yǎng)基：它是利用天然的有機物配制而成的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基來源廣，成本低，很適合實際生產(chǎn)。特別具備營養(yǎng)豐富、制備方便、經(jīng)濟實用等優(yōu)點。但他學(xué)成分不能定量，每批成分也不穩(wěn)定，因此不宜用來進行精確的科學(xué)實驗。 常用的天然培養(yǎng)基，有馬鈴薯培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基、杏汁培養(yǎng)基、蘋果培養(yǎng)基、麥芽培養(yǎng)基、堆肥培養(yǎng)基等。,2.半合成培養(yǎng)基：在天然培養(yǎng)基中，適當(dāng)增加無機鹽類，或在合成培養(yǎng)基中添加少量別的有機物，成為半合成培養(yǎng)基，介于天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基之間。主要目的是促進菌絲生長發(fā)育。 3.合成培養(yǎng)基：用化學(xué)成分已知的有機物或無機物配制而成的培養(yǎng)基。由于各種化學(xué)成分已經(jīng)清楚，容易控制，所以適合某些定性和定量研究。

4、,馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）： 馬鈴薯（去皮）200克葡萄糖 20克 瓊脂 1820克 PH值 5.56.0 制法：先將新鮮無病害的馬鈴薯洗凈，去皮后切成小薄片，稱200克，加水1000毫升，煮沸20分鐘后過濾，其濾汁為馬鈴薯煮汁，然后加瓊脂和葡萄糖煮溶，后補足水分至1000毫升，裝管（瓶）滅菌備用。 一般食用菌母種的分離和培養(yǎng)都適合此培養(yǎng)基。,培養(yǎng)基的滅菌,培養(yǎng)基裝好后就要立即進行滅菌；將其中的雜菌殺死，然后才能接入我們所需要的純菌種，進行培養(yǎng)。 不論是母種分離時用的斜面培養(yǎng)基，還是原種、栽培種瓶培養(yǎng)基或聚丙烯塑料袋培養(yǎng)基，一般都采用熱力滅菌法。,高壓蒸汽滅菌法： 若是斜面試管培養(yǎng)基，

5、應(yīng)在1 kg/cm2 （121）壓力下維持30分鐘，即可達(dá)到滅菌目的。開鍋取試管時，趁熱放成斜面。 滅菌材料如是原種和栽培種，應(yīng)在1.5 kg/cm2 （128）壓力保持6090分鐘，這樣才能達(dá)到滅菌目的。,常壓蒸汽滅菌法：如沒有具備高壓鍋，可用土蒸鍋或蒸籠進行。在常壓的條件下，以 100的溫度持續(xù)68小時，以殺死培養(yǎng)料中的各種雜菌。 也可采用常壓間歇滅菌3次，可先蒸1小時，然后隔24小時又如法蒸1次，連續(xù)3次，就可達(dá)到滅菌目的。,1.加水閥 2.加水池 3.放氣閥 4.擱擋 5.擱板 6.鍋 7.爐門 8.爐室 9.灰門 10熱水鍋 11.煙囪 12.滅菌倉,滅菌效果檢驗,培養(yǎng)基的滅菌效果要

6、經(jīng)常檢驗，是否滅菌徹底：一般情況下，滅菌后的培養(yǎng)基最好應(yīng)放在要培養(yǎng)的溫度下，空白培養(yǎng)1周，可檢查滅菌效果。如果在這一段時間內(nèi)培養(yǎng)基沒發(fā)生任何變化，說明滅菌效果良好，可以使用。,液體菌種,簡言之就是將純正優(yōu)良的菌種，接入液體培養(yǎng)基（固體培養(yǎng)基不加凝固劑），使菌絲繁殖形成大量小菌球，然后將這種培養(yǎng)基拌入木屑或棉籽皮料內(nèi)，制成菌塊、培養(yǎng)其形成子實體。還可用于制原種、栽培種。 目前，用液體深層發(fā)酵法生產(chǎn)菌種，具有生產(chǎn)量大、周期短、菌齡整齊、成本低廉、接種方便等特點，是實現(xiàn)食用菌工廠化生產(chǎn)的目標(biāo)。,生產(chǎn)上常用的栽培種,木屑、棉籽殼菌種 麥粒菌種 玉米粒菌種 木塊菌種 木筷菌種 牙簽菌種,接種技術(shù)與環(huán)境的

7、消毒,接種箱（接種室） 接種室和接種箱是進行菌種分離接種的場所，和外界空間隔絕，防止空氣流動，經(jīng)過一定的消毒措施后，室內(nèi)就可達(dá)到無菌狀態(tài)，防止分離和接種時污染雜菌。一般一個接種箱就可展開工作，如有條件也可建一個接種室。,無菌箱及無菌室的消毒滅菌,l用甲醛和高錳酸鉀混合熏蒸：一般每平方米需40甲醛10毫升、高錳酸鉀8毫升，進行熏蒸。使用時，先密閉門窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高錳酸鉀，人員隨之離開接種室，關(guān)緊房門，熏蒸2030分鐘即可。 20.1升汞水消毒：用0.1升汞水浸過的紗布或海綿進行揩擦，或用噴霧器噴霧滅菌，噴霧后 2030分鐘，箱內(nèi)的雜菌和霧滴一起落到箱底被殺死，內(nèi)部的空氣

8、就變得很清潔。,3紫外線照射滅菌：在無菌箱中裝一支220伏、30瓦的紫外線燈管；每次開2030分鐘，就能達(dá)到空間殺菌的目的。照射結(jié)束后，罩黑布半小時，以增強殺菌效果。 4石炭酸噴霧：在每次接種之前，用5石炭酸溶液噴霧，可促使空氣中的微粒和雜菌沉降，防止桌面微塵飛揚，并有殺菌作用。 5石灰揩擦：經(jīng)常用藥物熏蒸，易造成酸性環(huán)境，特別用甲醛和高錳酸鉀熏蒸長久，污染往往越來越嚴(yán)重，預(yù)防辦法可把各種藥品交替使用，過一段時間（約五周）用石灰擦洗一遍，實踐證明，這樣做效果很好。,1.接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.接種鋤 5.接種鏟 6.接種匙 7.接種刀 8.接種刀 9.剪刀 10.鋼鉤 11.鑷子

9、12.彈簧接種槍 13.接種槍（日本式）,第三節(jié) 食用菌菌種分離的方法,（一） 組織分離法 （二） 孢子分離法,（一） 組織分離法,使用組織分離復(fù)壯菌種，簡便易行、效果明顯，很適宜一般種植戶。 其操作技術(shù)要點是： 選擇種菇：在菇床、菌墻中選擇出菇早、無雜菌侵染、株型緊湊、圓整肉厚、色澤美觀、七八成熟的第一潮菇的肥壯菇體作種菇； 種菇消毒：在種菇中部取最大的3-4張菇片，用70%的酒精輕擦表面后置于接種箱內(nèi)消毒；,菇肉接種：將菇片縱向撕開，在每個裂面靠近菇片邊緣處取一米粒大小的菇肉組織接于PDA培養(yǎng)基上。每張菇片共撕10個裂面，接10支試管，一次分離共接3040支試管； 將試管置于1530下培養(yǎng)

10、； 培養(yǎng)期間每天都要檢查發(fā)菌情況，從中選擇菌絲濃白粗壯、邊緣整齊、長速正常、無綠、黃及漿糊狀等雜菌斑點的，表現(xiàn)最好的分離種轉(zhuǎn)接于木屑麩皮培養(yǎng)基上，于1530下培養(yǎng)；,菌絲發(fā)滿后，在接種箱內(nèi)去掉棉塞，用蠟封口，用黑膜包裹后于49的冰箱內(nèi)保藏； 在下一個生產(chǎn)季節(jié)與原始保藏種作對比試驗，擇優(yōu)作為生產(chǎn)用種。每季都如此篩選，能逐步提高菌種各方面的性狀，使發(fā)菌加快，抗逆抗雜性增強，質(zhì)量明顯提高。,（二） 孢子分離法,同一品種經(jīng)過四年以上栽培就會表現(xiàn)出一些退化現(xiàn)象，如出菇遲，長勢弱，轉(zhuǎn)潮慢，產(chǎn)量不高等。通過有性繁殖所產(chǎn)生的孢子進行母種繁殖是解決種性退化的一條有效途徑。因子實體孢子彈射量大，接種操作簡易，在栽

11、培專業(yè)戶中推廣孢子分離提純復(fù)壯技術(shù)是可行的。,母種孢子分離與接種 （）采菇 選擇菇體形態(tài)好，生長勢健壯，并能代表該品種性狀接近成熟的平菇子實體，采摘一叢或兩叢作為種菇拿回室內(nèi)備用。要求所采的子實體菌蓋邊緣稍卷或已接近平展。,（）裝置與滅菌 用0.2新潔爾滅清洗干凈個1000毫升燒杯和個培養(yǎng)皿，烘干水分后將培養(yǎng)皿放入燒杯底部。切取菌蓋長達(dá)厘米上層或中層的一朵子實體，用藥棉蘸75酒精輕擦菌蓋和菌柄后，將菌褶朝下放入燒杯中的培養(yǎng)皿中如有插菇鋼絲架更好。此操作完成后在燒杯口沿上蓋好用無菌水潤濕的層沙布，上面再蓋一層白紙，用皮筋扎口，以次類推連同個同樣處理的燒杯一起放入接種箱。接種箱中另放入3040支P

12、DA試管培養(yǎng)基，接種鏟、鑷子酒精燈等工具，用10毫升甲醛加克高錳酸鉀混合后對接種箱進行熏蒸消毒滅菌。,（）接種與培養(yǎng) 放入接種箱用于孢子分離的平菇，經(jīng)過812小時后就有孢子彈出，一般放晝夜培養(yǎng)皿中就有厚厚一層白色孢子印，這時要及時進行接種。一朵菇體彈射的孢子量可接種10支以上試管種，接種完成后貼上標(biāo)簽放入25左右的恒溫箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，前34天為孢子定植期，外表看不出任何變化，7天以后孢子開始萌發(fā)并在四周長出白色絨毛狀菌絲體，1618天左右菌絲布滿培養(yǎng)基面，即得純菌絲母種，如有污染管應(yīng)及時棄除。,原種擴接 選取10支菌絲潔白、粗壯、生長整齊的試管種進行原種的擴接，另外20支純菌絲母種等做完

13、出菇試驗后再作留種及相關(guān)處理。一支試管種可接瓶原種，每支試管接完要進行火焰干熱滅菌后再擴接另一支試管。接種完畢后取出菌種瓶放入25左右恒溫箱培養(yǎng)，菌絲滿瓶后10天左右進行出菇試驗。,出菇試驗 一般接種1020袋即可，接種后在適宜溫度下發(fā)菌，菌絲長滿后移到出菇最佳條件下進行觀察。對菌絲生長速度快，吃料能力強，出菇早，朵形好，轉(zhuǎn)潮快，產(chǎn)量高，質(zhì)量好的菌種可用于擴大培養(yǎng)，投入栽培生產(chǎn)。,第四節(jié) 食用菌菌種的保存,無論是母種、原種或栽培種，如果未及時使用，其菌絲就會很快衰老，降低生產(chǎn)力，影響產(chǎn)量和質(zhì)量。因此，菌種必須進行適當(dāng)?shù)谋４?，其目的是防止退化，確保菌種純一，防止雜菌感染。 菌種保存的基本原理，主

14、要是通過采用低溫、干燥與缺氧的條件，以中止菌種的繁殖，降低其新陳代謝，使之處于休眠狀態(tài)。,1.斜面低溫保存法 將斜面菌種，置于冰箱內(nèi)，在4左右低溫下保存，以后每隔23個月轉(zhuǎn)管移接一次。這種保存方法適于大多數(shù)食用菌菌種。但草菇菌種在5以下很快死亡；所以草菇的菌種，不必放在冰箱中，置于室溫保存即可。 為了延長保存時間，試管口處要用塑料薄膜包扎，以防培養(yǎng)基干固。在農(nóng)村沒有冰箱設(shè)備的，可把母種試管，用石蠟封口，再用塑料薄膜包封，沉放于清涼的井底保存。,2.液體石蠟保存法 食用菌的菌絲體都可用此法保存，方法簡單，只在斜面菌種試管內(nèi)，注入一層已滅過菌的液體石蠟，注入量以高出斜面1厘米為宜，使菌種與空氣隔絕

15、，降低其新陳代謝的活動，然后在棉塞外包以塑料薄膜，直立存放于室內(nèi)干燥處或低溫下保存，一般可保存一年以上。 使用液體石蠟菌種時，只要用接種計從斜面上挑取少許菌體，放在新鮮的培養(yǎng)基上；經(jīng)過培養(yǎng)，即可應(yīng)用，原種則重新蠟封，繼續(xù)保存。,3.木屑試管菌種保存法 用雜木屑按原種的培養(yǎng)基配制裝入大號試管，容量為管高的三分之二，擦凈管口塞緊棉塞，用牛皮紙包扎管口后高壓滅菌，然后移入母種，在2528下培養(yǎng)，待長滿菌絲后，立即移到低溫干燥環(huán)境保存、或埋于尿素、硝酸銨或地洞中保存，效果更好，并能延長保存時間。,4.冷凍干燥保藏法 這種方法采用真空、干燥、低溫等手段，使菌種新陳代謝活動處于相對靜止?fàn)顟B(tài)，在低溫下快速冷

16、凍，又在低溫下真空干燥，而使菌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與成分保持原來狀態(tài)而保存菌種。,還有沙土保存法、液氮超低溫保藏法、濾紙片保存法、菌絲球生理鹽水保藏法、麥粒保藏法、干孢子真空保藏法等。這里不一一介紹。要根據(jù)自己的工作需要及具體條件而定，一邊保存，一邊還要分離，復(fù)壯，做好選育工作，延續(xù)菌種的憂良性能。,原種和栽培種培養(yǎng)好后，應(yīng)立即用于擴接栽培種或栽培生產(chǎn)，不宜保存過久，時間越長，生活力越差，也越容易感染雜菌。若因特殊情況不能及時使用，原種瓶口用牛皮紙包好，置414條件下可保藏一年左右。栽培種短期保存也可放于陰涼、干燥通風(fēng)的室內(nèi)，但種瓶不宜堆疊過高，以免堆內(nèi)發(fā)熱，加速菌絲老化。,如何防止食用菌菌種退化,菌種退化會