免疫學(xué)檢驗第十三章凝集反應(yīng).ppt

1、第十三章 凝集反應(yīng),制作人：和燕,早在1896年，Widal就利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現(xiàn)象，有效地診斷傷寒病。-肥達試驗 至1903年，Landsteiner在特異性血凝現(xiàn)象的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)了人類ABO血型，并于1930年獲得了諾貝爾醫(yī)學(xué)獎。 -血型鑒定,凝集反應(yīng)的發(fā)現(xiàn),凝集反應(yīng)的定義,凝集反應(yīng)： 顆粒性抗原（細菌、紅細胞等）與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒（紅細胞、聚苯乙烯乳膠顆粒、炭粒）后，它們與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生特異性反應(yīng)，在適當電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。,可見反應(yīng)形成,陰性？,陽性？,凝集反應(yīng)的分型,凝集反應(yīng),直接凝集

2、反應(yīng),間接凝集反應(yīng),抗球蛋白試驗,第一節(jié) 直接凝集反應(yīng),直接凝集反應(yīng)： 顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。,凝集原(agglutinogen)：凝集反應(yīng)中的抗原。,凝集素(agglutinin)：凝集參與反應(yīng)的抗體,（一）玻片凝集試驗,方法評價: 定性試驗 簡便和快速 敏感度低,應(yīng)用: 菌種鑒定 血清學(xué)分型 血型鑒定,在試管內(nèi)顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。,（二）試管凝集試驗,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,棄掉0.5,試管凝集試驗原理,結(jié)果,1 2 3 4 5 6 7,菌液,結(jié)果,+,很小的凝集顆粒,混濁,-,無

3、凝集現(xiàn)象,與對照相同,+,小、部分凝集塊,中等混濁,+,大多凝集管底,輕度混濁,+,大的凝集塊,清亮,凝集程度,沉淀,上清,管底沉淀,凝集程度,方法評價： 半定量試驗 簡便、快速 敏感度低 可有假陽性,臨床應(yīng)用： 肥達試驗 外斐試驗 交叉配血試驗,第二節(jié) 間接凝集反應(yīng),間接凝集反應(yīng): 將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象.,載體,可溶性抗原,致敏,致敏顆粒,NS,凝集顆粒,間接凝集試驗示意圖,常用載體,紅細胞-間接血凝試驗,聚苯乙烯乳膠-膠乳凝集試驗,1、正向間接凝集試驗 2、反向間接凝集試驗 3、間接凝集抑制試驗 4、協(xié)

4、同凝集試驗,間接凝集反應(yīng)的類型,用抗原致敏載體-檢測抗體,正向間接凝集試驗,反向間接凝集試驗,用抗體致敏載體-檢測抗原,間接凝集抑制試驗,用抗原致敏載體-檢測抗原,間接凝集抑制試驗,待測抗原,已知抗體,特異結(jié)合,抗原抗體復(fù)合物,NS,致敏顆粒,無凝集顆粒 陽性,間接凝集抑制試驗,待測抗原,已知抗體,無結(jié)合,抗原抗體分散,NS,致敏顆粒,有凝集顆粒 陰性,SPA:SPA-IgG Fc; SPA抗體致敏-測抗原,協(xié)同凝集試驗,原理圖,IgG,SPA,SPA- IgG,待測抗原,SPA- IgG-待測抗原凝集顆粒,混合,加入,間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用,抗原的檢測 反向間接凝集試驗可用于檢測病原體的可溶性抗

5、原，也可用于檢測各種蛋白質(zhì)成分。 抗體的檢測 檢測細菌、病毒、寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗體。,抗球蛋白試驗又稱 Coombs試驗,第三節(jié) 抗球蛋白試驗,（一）直接Coombs試驗,不完全抗體,檢測紅細胞上抗體,（二）間接Coombs試驗,檢測血清中的抗紅細胞抗體,臨床應(yīng)用： 在輸血上的應(yīng)用 血型抗原抗體的檢查 對新生兒溶血性貧血性疾病的診斷 對溶血性貧血的研究 對細菌或立克次體的不完全抗體檢查,冷凝集試驗原理,抗原決定簇隱含，不能與抗體結(jié)合,混 合,暴露的抗原決定簇與抗體結(jié)合,混 合,37,4,37,膠乳凝集試驗-類風濕因子檢測,抗自身變性IgG抗體，屬于IgM類，主要存在于血清中。 約90%類風

6、濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者的RF呈陽性。 某些自身免疫病，如冷球蛋白血癥、進行性全身性硬化癥、干燥綜合征、SLE等患者都有較高的陽性率；一些其他疾病如血管炎、肝病、慢性感染也可出現(xiàn)RF。,類風濕因子RF,其病因及發(fā)病機制仍不完全明了, 機體出現(xiàn)免疫系統(tǒng)紊亂, 進而引起關(guān)節(jié)滑膜、軟骨組織慢性炎癥和破壞的自身免疫性疾病。,類風濕性關(guān)節(jié)炎RA,RF可與IgG的Fc段結(jié)合。將變性IgG包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上，此致敏膠乳在與待測血清中的RF相遇時，即可發(fā)生肉眼可見的凝集。,乳膠凝集試驗,類風濕膠乳診斷試劑 RF陰性對照 RF陽性對照 反應(yīng)板 攪拌棒,主要的試劑和器材,取陽性血清、陰性血清各1滴于反應(yīng)板上，然后分別加類風濕膠乳診斷試劑1滴。 用攪拌棒充分混勻后，輕輕搖動反應(yīng)板23min，觀察結(jié)果。,步驟,在室內(nèi)的光線下觀察，有清晰的凝集顆粒出現(xiàn)，且液體澄清者為RF陽性,結(jié)果觀察和判斷,1、凝集反應(yīng)是指細菌和紅細胞等_或載體表面包被_與相應(yīng)抗體/抗原結(jié)合后，可出現(xiàn)肉眼可見的_現(xiàn)象 2、凝集反應(yīng)的分類？ 3、直接凝集反應(yīng)包括哪兩類？ 4、間接凝集反應(yīng)的分類？原理？,復(fù)習(xí)題,小結(jié),凝集反應(yīng)是指細菌和紅細胞等顆粒性抗原或表面包被抗原/抗體的顆粒性載體與相應(yīng)抗體/抗原結(jié)合后，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。 可以分為直接凝集反應(yīng)、間接凝集反應(yīng)和抗球蛋白試驗。 直接凝集反應(yīng)主要有玻片法和試管法。 間接凝集反應(yīng)