體外診斷試劑分類和常見產(chǎn)品技術(shù)原理及應(yīng)用ppt課件.ppt

1、體外診斷試劑的分類和基本原理,洛陽惠爾納米科技有限公司,1,體外診斷試劑和器械在國(guó)外統(tǒng)一稱為體外診斷醫(yī)療器械。 屬于醫(yī)療器械的一部分。 在我國(guó)，體外診斷試劑是指：可單獨(dú)使用或與儀器、器具、設(shè)備或系統(tǒng)組合使用, 在疾病的預(yù)防、診斷、治療監(jiān)測(cè)、預(yù)后觀察、健康狀態(tài)評(píng)價(jià)以及遺傳性疾病的預(yù)測(cè)過程中, 用于對(duì)人體樣本( 各種體液、細(xì)胞、組織樣本等) 進(jìn)行體外檢測(cè)的試劑、試劑盒、校準(zhǔn)品( 物) 、質(zhì)控品( 物)等。,概念,2,根據(jù)國(guó)家管理類別：按照產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)程度的高低，體外診斷試劑依次分為第三類、第二類、第一類產(chǎn)品。 不同類的產(chǎn)品在審查、批準(zhǔn)后頒發(fā)醫(yī)療器械注冊(cè)證書上由不同的機(jī)構(gòu)進(jìn)行： 第三類由國(guó)家食品藥品監(jiān)督

2、管理局審查、批準(zhǔn)； 第二類由省級(jí)食品藥品監(jiān)督管理局審查、批準(zhǔn)； 第一類由市級(jí)食品藥品監(jiān)督管理局審查、批準(zhǔn)。,體外診斷試劑的分類（一）,3,第三類產(chǎn)品：,1與致病性病原體抗原、抗體以及核酸等檢測(cè)相關(guān)的試劑； 2與血型、組織配型相關(guān)的試劑； 3與人類基因檢測(cè)相關(guān)的試劑； 4與遺傳性疾病相關(guān)的試劑； 5與麻醉藥品、精神藥品、醫(yī)療用毒性藥品檢測(cè)相關(guān)的試劑； 6與治療藥物作用靶點(diǎn)檢測(cè)相關(guān)的試劑; 7與腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)相關(guān)的試劑; 8與變態(tài)反應(yīng)（過敏原）相關(guān)的試劑。,4,除已明確為第三類、第一類的產(chǎn)品，其他為第二類產(chǎn)品，主要包括： 1用于蛋白質(zhì)檢測(cè)的試劑； 2用于糖類檢測(cè)的試劑； 3用于激素檢測(cè)的試劑； 4

3、用于酶類檢測(cè)的試劑； 5用于酯類檢測(cè)的試劑； 6用于維生素檢測(cè)的試劑； 7用于無機(jī)離子檢測(cè)的試劑； 8用于藥物及藥物代謝物檢測(cè)的試劑； 9用于自身抗體檢測(cè)的試劑； 10用于微生物鑒別或藥敏試驗(yàn)的試劑； 11用于其他生理、生化或免疫功能指標(biāo)檢測(cè)的試劑。,第二類產(chǎn)品：,5,1微生物培養(yǎng)基（不用于微生物鑒別和藥敏試驗(yàn)）； 2樣本處理用產(chǎn)品，如溶血?jiǎng)?、稀釋液、染色液等?*注：第二類產(chǎn)品中的某些產(chǎn)品，例如蛋白質(zhì)、糖類、激素、酶類等的檢測(cè)，如果用于腫瘤的診斷、輔助診斷、治療過程的監(jiān)測(cè)，或用于遺傳性疾病的診斷、輔助診斷等，則按第三類產(chǎn)品注冊(cè)管理。在藥物及藥物代謝物檢測(cè)的試劑中，如果該藥物屬于麻醉藥品、精神

4、藥品或醫(yī)療用毒性藥品范圍，則按第三類產(chǎn)品注冊(cè)管理。,第一類產(chǎn)品：,6,按照受理和審評(píng)分為：按照藥品受理和審評(píng)的和按照 醫(yī)療器械受理審評(píng)的。 一、按藥品受理和審評(píng)的體外診斷試劑： *1.ABO血型定型試劑（盒） *2.乙型肝炎表面抗原（HBsAg）試劑（盒） *3.丙型肝炎病毒（HCV）抗體試劑（盒） *4.人類免疫缺陷病毒HIV抗原/抗體診斷試劑（盒） *5.梅毒螺旋體抗體試劑（盒） 6.放免試劑(盒) 注：*號(hào)的品種，預(yù)期用途為血源篩查時(shí)按藥品受理和審評(píng)，為臨床診斷時(shí)，按第三類醫(yī)療器械進(jìn)行管理。,體外診斷試劑的分類（二）,7,二、 按醫(yī)療器械受理和審評(píng)的體外診斷試劑 ： 1、臨床血液學(xué)和體液

5、學(xué)檢驗(yàn)試劑 2、臨床化學(xué)檢驗(yàn)試劑 3、臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)試劑 。 4、微生物學(xué)檢驗(yàn)試劑 5、組織細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)試劑 6、變態(tài)反應(yīng)、自身免疫診斷檢驗(yàn)試劑（盒） 7、遺傳性疾病檢驗(yàn)試劑 8、分子生物學(xué)檢驗(yàn)試劑 9、其它檢驗(yàn)試劑（盒）,體外診斷試劑的分類（二）,8,按照技術(shù)方法分： 1.比色法（顏色反應(yīng)）；2.分光光度法； 3.凝集法；4.散射法（沉淀反應(yīng)）； 5.透射比濁法（沉淀反應(yīng)）； 6.速率法、終點(diǎn)法（產(chǎn)物或底物量）； 7.標(biāo)記技術(shù)；8.生物親和；9.免疫技術(shù)； 10.發(fā)光技術(shù)；11.熒光技術(shù)；12. 放射技術(shù)； 13.形態(tài)分析； 14.流式細(xì)胞；15.電泳技術(shù)；,體外診斷試劑的分類（三）,9,按照

6、技術(shù)方法分： 16.克隆技術(shù)；17.酶技術(shù)；18.基因技術(shù)； 19.聚合酶鏈反應(yīng)-PCR（分子生物技術(shù)）； 20.雜交技術(shù)（分子生物技術(shù)）； 21.印跡技術(shù)； 22.層析技術(shù)； 23.色譜技術(shù)； 24.質(zhì)譜技術(shù)； 25.溶出法； 26.伏安法； 27.多技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用，如：酶聯(lián)免疫、免疫比濁、放射免疫、免疫化學(xué)發(fā)光、免疫層析、熒光雜交、免疫組化、流式熒光、電極溶出伏安法等。,體外診斷試劑的分類（三）,10,在實(shí)際應(yīng)用中，單一技術(shù)往往不能滿足檢測(cè)需要，因此，診斷試劑會(huì)聯(lián)合使用多種技術(shù)。常見的體外診斷產(chǎn)品： 1.生化分析儀、生化試劑； 2.酶標(biāo)儀、酶免試劑； 3.免疫化學(xué)發(fā)光儀及試劑； 4.膠體金（

7、乳膠、熒光）免疫層析試劑； 5.血細(xì)胞分析儀、細(xì)胞檢測(cè)試劑； 6.尿液分析儀、尿液檢測(cè)試劑（試紙）； 7.（血?dú)猓╇娊赓|(zhì)分析儀、電解質(zhì)試劑； 8.細(xì)菌、微生物培養(yǎng)及鑒定試劑； 9.免疫組化染色液、液基細(xì)胞試劑、免疫印跡試劑 10.PCR儀及試劑； 11.血型試劑； 12.流式細(xì)胞儀。 12.微量元素（原子吸收法）,常見的體外診斷產(chǎn)品技術(shù)原理及應(yīng)用,11,生化分析儀、生化試劑,全自動(dòng)生化分析儀； 肝功類、腎功類等 比色法、比濁法、散射法、速率法、終點(diǎn)法,12,酶標(biāo)儀、酶免試劑,酶標(biāo)儀：比色計(jì)； 酶免試劑：酶聯(lián)免疫法比色法 抗原抗體特異性結(jié)合、酶作為標(biāo)記物和催化物，加入底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，放入比色計(jì)

8、進(jìn)行比色。,13,化學(xué)發(fā)光儀及試劑,以酶為催化劑，通過氧化反應(yīng)，使底物發(fā)光。 過氧化物酶（HRP )促發(fā)光，底物魯米諾 堿性磷酸酶(AP )促發(fā)光，底物螺旋金剛烷環(huán)氧化物苯磷酸酯（AMPPD),14,非酶促化學(xué)發(fā)光及電化學(xué)發(fā)光,非酶促化學(xué)發(fā)光：以吖啶酯、過氧化氫為發(fā)光系統(tǒng)，不需要酶的催化。儀器成本高，技術(shù)復(fù)雜，尚未國(guó)產(chǎn)化（Abbott) 電化學(xué)發(fā)光：氧化反應(yīng)是通過電極上的電化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生，標(biāo)記物為三氯聯(lián)吡啶釕。儀器成本高，技術(shù)復(fù)雜，尚未國(guó)產(chǎn)化。（Roche）,15,膠體金（乳膠、熒光）層析試劑,膠體金免疫層析法：將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合

9、墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，當(dāng)移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí)，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測(cè)帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條，使用十分方便。,16,膠體金免疫層析法反應(yīng)示意圖,17,HIV膠體金類快速診斷試劑檢測(cè)結(jié)果,18,第三類）免疫印跡試劑,免疫印跡試劑盒: 風(fēng)濕病自身抗體檢測(cè)試劑盒（免疫印跡法）,19,免 疫 印 跡 法 示 意 圖,20,（第四類）蛋白芯片（微陣列）類試劑,蛋白芯片（微陣列）：丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒（蛋白芯片法）； 多腫瘤標(biāo)志物檢

10、測(cè)試劑盒（蛋白芯片法）,21,（第五類）單抗類試劑,血型定型類試劑：血型定型試劑盒（單克隆抗體） 免疫組化：ImmuChem免疫組化試劑盒（單抗） 免疫比濁：血清載脂蛋白A1免疫比濁試劑盒 乳膠凝集：D-dimer二聚體乳膠凝集試劑盒,22,（第六類）多抗類試劑,血型定型類試劑：血型定型試劑盒（人血清/馬血清） 免疫組化：癌胚抗原檢測(cè)試劑盒（多抗） 免疫比濁：-微球蛋白測(cè)定試劑盒（免疫比濁法） 乳膠凝集：沙門氏菌乳膠凝集試劑盒,23,抗原,抗原：指進(jìn)入有免疫活性的組織（宿主）而引發(fā)免疫應(yīng)答的物質(zhì)。或雖不能引發(fā)免疫，但可以同抗體結(jié)合的物質(zhì)。 蛋白質(zhì)，多糖，核酸，糖脂，青霉素 全抗原性具有多個(gè)抗原

11、決定族,24,抗體,宿主對(duì)體內(nèi)存在的外來分子，微生物或其他因子的應(yīng)答而產(chǎn)生的蛋白質(zhì)（免疫球蛋白，丙種球蛋白） 根據(jù)抗體性質(zhì)：多克隆抗體，單克隆抗體 根據(jù)抗體分子結(jié)構(gòu)：IgA, D, E, G, M,25,IgG,IgM,抗體模式圖,26,單克隆抗體,由一株淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，針對(duì)一種抗原決定族 抗原免疫小鼠-取脾臟-與瘤細(xì)胞融合-克隆篩選-單克隆抗體細(xì)胞株 擴(kuò)增細(xì)胞-注射入小鼠腹腔-采腹水-純化抗體,27,流 程,雜交瘤技術(shù),28,多克隆抗體,針對(duì)多個(gè)抗原決定族 抗原免疫動(dòng)物-采集動(dòng)物血清 純化抗體,29,（第七類）診斷血清（菌液）,診斷血清：侵襲性大腸埃希氏菌診斷血清； 志賀氏菌屬四種混合多價(jià)血清

12、 診斷菌液：傷寒沙門菌菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原診斷菌液,30,（第八類）血球凝集類試劑,抗體致敏血球：破傷風(fēng)抗體診斷試劑（血凝法）； 白喉抗體診斷試劑（血凝法）,31,（第九類）核酸擴(kuò)增類試劑,熒光PCR：乙型肝炎病毒核酸定量測(cè)定試劑盒 PCR-ELISA：結(jié)核分支桿菌檢測(cè)試劑盒（核酸擴(kuò)增酶聯(lián)免疫法） PCR-毛細(xì)管電泳：性染色體多倍體（分型與突變）檢測(cè)試劑盒； PCR-電泳：-地中海貧血基因診斷試劑盒（gap-PCR法） 轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增（TMA）：沙眼衣原體與結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)試劑盒,32,PCR基本原理示意圖,33,PCR,過氧化物酶聯(lián)物,96孔酶標(biāo)法,加樣,分析,觀察 數(shù)據(jù),PCR產(chǎn)物

13、的檢測(cè)96孔酶標(biāo)法,34,（第十類）基因芯片（微陣列）類試劑,基因芯片（微陣列）：-地中海貧血基因芯片診斷試劑盒 PCR-雜交：人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)試劑盒（PCR-反向雜交法）,35,（第十一類）探針放大（原位雜交）類試劑,bDNA類：HIV-1 bDNA 檢測(cè)試劑盒； mRNA檢測(cè)試劑盒(生物素原位雜交法),36,探針放大類試劑-支鏈DNA技術(shù),病毒的RNA釋放后加入微孔板中板孔中包被有可與病毒特異結(jié)合的一系列靶探針（Target Probe），另一系列靶探針的一端可標(biāo)記在游離的病毒核酸鏈上，另一端可與bDNA結(jié)合bDNA信號(hào)放大加入酶標(biāo)記物對(duì)結(jié)合的bDNA進(jìn)行標(biāo)記經(jīng)過清洗后加入底物進(jìn)行

14、反應(yīng)，測(cè)定反應(yīng)強(qiáng)度。,37,（第十二類）普通生化類試劑（十萬級(jí)要求）（包括酶類化學(xué)試劑、凝血試劑類等試劑）,酶類化學(xué)試劑:丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）測(cè)定試劑盒； 堿性磷酸酶（ALP）測(cè)定試劑盒 凝血試劑:凝血酶原時(shí)間（PT）測(cè)定試劑盒； 組織纖溶酶原激活物（t-PT）測(cè)定試劑盒,38,普通生化類試劑(十萬級(jí)要求)（1）,原理： 臨床普通生化類試劑是一類用于測(cè)定人血液、尿液等中各項(xiàng)生化指標(biāo)的試劑。含有各種非特異性蛋白成分，要求在十萬級(jí)潔凈環(huán)境中生產(chǎn)。檢測(cè)方法均為比色法，方法學(xué)原理均為顯色反應(yīng)。 產(chǎn)品涉及： 1、酶類：含酶、輔酶與牛血清白蛋白等、劑型為干粉或液體。 2、血凝類：試劑組分中含有其他活

15、性類組分（如兔腦粉等）。 生產(chǎn)工藝：原材料稱量、溶解、定容、中試、分裝、組裝、成品檢驗(yàn)。 關(guān)鍵控制點(diǎn)：原料稱量、配制、物料平衡。 細(xì)則要求：應(yīng)在10萬級(jí)凈化環(huán)境中進(jìn)行生產(chǎn)操作。,39,（第十三類）普通生化類試劑（清潔環(huán)境）（包括一般化學(xué)試劑、血?dú)怆娊赓|(zhì)類、血液分析儀用試劑類等）,一般化學(xué)試劑：無機(jī)離子（鋁、鎘等）測(cè)定試劑盒； 白蛋白測(cè)定試劑盒（BCG法）； 總膽固醇測(cè)定試劑盒（COD-CE-PAP法） 血?dú)怆娊赓|(zhì):電解質(zhì)分析儀隨機(jī)試劑；生化分析儀用稀釋液、沖洗液 血液分析儀用試劑: 血液分析儀用稀釋液、溶血?jiǎng)?40,普通生化類試劑（清潔環(huán)境）,原理：與普通生化試劑（十萬級(jí)要求）類相同。 產(chǎn)品涉

16、及：無機(jī)離子檢測(cè)、血?dú)怆娊赓|(zhì)類、血液分析儀用試劑類等試劑。 工藝要求：除生產(chǎn)可在清潔環(huán)境中進(jìn)行操作外，生產(chǎn)工藝和關(guān)鍵控制點(diǎn)與普通生化試劑（十萬級(jí)要求）類相同。,41,（第十四類）干化學(xué)類試劑,干化學(xué)試劑（條、卡或盒）：干化學(xué)尿液分析試紙條； 尿微量白蛋白（UALB）測(cè)試卡,42,干化學(xué)類試劑,原理：以濾紙為載體，將各種試劑組分浸漬后干燥，作為試劑層，固定在支持物上，試紙上的各測(cè)試塊與被測(cè)樣品中的成分發(fā)生酶化學(xué)反應(yīng)，使試紙塊發(fā)生不同的顏色變化，顏色深淺與樣品中的成份含量成正比，再由光電耦合元件對(duì)測(cè)試塊的顏色進(jìn)行判讀，達(dá)到測(cè)定樣品中化學(xué)成分含量的目的。 生產(chǎn)工藝主要環(huán)節(jié)： 特定試劑的配制、試劑條的

17、浸潤(rùn)、干燥、切割、分包裝等；,43,（第十五類）藥敏類試劑,藥敏紙片（卡）：抗生素藥敏紙片；隨機(jī)專用藥敏試劑（盒）（卡）,44,藥敏類試劑,原理：是將抗菌藥物吸收到特定的紙片中，然后置于已接種待測(cè)定菌的固體培養(yǎng)基上，抗菌藥物通過向培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散，抑制敏感細(xì)菌的生長(zhǎng)，從而出現(xiàn)抑菌環(huán)（帶）。由于藥物擴(kuò)散的距離越遠(yuǎn)，達(dá)到該距離的藥物濃度越低，故可以根據(jù)抑菌環(huán)的大小，判斷細(xì)菌對(duì)藥物的敏感度。通過藥物敏感試驗(yàn)，我們可以找出針對(duì)于某些致病菌的敏感藥物，從而對(duì)臨床中的細(xì)菌性疾病的治療提供指導(dǎo)。 工藝： 配抗生素溶液 浸泡 干燥（凍干或烘干） 分包裝 紙 打 孔 藥敏紙片的關(guān)鍵工藝是紙片的浸泡，它直接影響產(chǎn)品質(zhì)量。,45,（第十六類）培養(yǎng)基類,馬丁干粉培養(yǎng)基；人胚胎干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基,46,培養(yǎng)基,培養(yǎng)基（Medium）是供微