動物細胞培養(yǎng).ppt

1、,第二章 細胞工程,第一節(jié)動物細胞培養(yǎng),細胞工程是指應用細胞生物學和分子生物學的原理和方法，通過細胞水平或細胞器水平上的操作，按照人們的意愿來改變細胞內的遺傳物質或獲得細胞產品的一門綜合科學技術。,什么叫細胞工程？,1.1細胞培養(yǎng)的概念,是細胞工程中最基礎的技術，它是把機體的某一組織或器官取出，分散為單個細胞，使其在人工培養(yǎng)條件下繼續(xù)生存、生長、甚至增殖的過程。,原理：細胞增殖,補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質,1.2動物細胞培養(yǎng)的條件：,1.無菌、無毒的環(huán)境: 培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理 措施：培養(yǎng)液中加抗生素，定期更換培養(yǎng)液 2.營養(yǎng): 糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、促生長因子（維生素、激

2、素等）和動物血清 3.溫度和PH 36.50.5 7.2-7.4 4.氣體環(huán)境 O2 CO2 (95空氣 5的CO2),1.3動物細胞培養(yǎng)出過程,胚胎或幼齡動物的組織器官,細胞懸浮液,10代細胞,50細胞,無限傳代,剪碎,胰蛋白酶,洗滌、稀釋、分離,原代培養(yǎng),用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質主要是蛋白質。動物細胞培養(yǎng)適宜的PH為7.27.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們細胞增殖能力強，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)。,動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體,動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質，將細胞

3、網絡起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。,遺傳物質改變,細胞株：原代細胞一般傳至10代左右細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數細胞存活到4050代，這種傳代細胞為細胞株。 細胞系：細胞株傳代至50代后又出現細胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細胞由于遺傳物質的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。 細胞株和細胞系的區(qū)別： 細胞系的遺傳物質改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。,解答概念,原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內的細胞稱為原代細胞培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)：將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上

4、的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。,解答概念,短期和臨時性的保存可以采用一般的低溫，如哺乳動物的細胞在4左右可存活幾十天甚至幾個月。,長期的保存方法目前一般采用超低溫凍存法，即將細胞和保護劑放入-196 的液氮中進行保存。,1.4 冷凍和復蘇,復蘇：,冷凍保存：,隨時取出迅速放入37溫水中解凍,1、生物制品：酶、生長因子、疫苗、單克隆 抗體等,2、有毒物質和藥品的檢測：將待測物質加入培養(yǎng)液，根據變異細胞占全部細胞的比例來判斷該物質的毒性。,3、臨床治療：人工皮膚,4、基礎研究：細胞全能性、細胞周期及調控、癌變機理與細胞衰老的研究,1.5 動物細胞培養(yǎng)的應用,1、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質發(fā)生

5、改變的細胞（） A細胞系 B細胞株 C原代細胞 D傳代細胞,2、動物細胞工程技術的基礎是 - （ ） A.動物細胞融合 B.單克隆抗體 C.胚胎移植 D.動物細胞培養(yǎng),A,D,3、為了使用于培養(yǎng)的動物組織細胞分散開以便配制成一定濃度的細胞懸浮液，選取來的動物組織應選用下列哪種物質處理（ ） A.胃蛋白酶 B.胰蛋白酶 C.鹽酸 D.胰脂肪酶,教學反饋,B,4、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞 （ ）A.容易產生各種變異 B具有更強的全能性C.取材十分方便 D分裂增殖的能力強,D,5、在動物細胞培養(yǎng)的有關敘述中，正確的是（ ）

6、A動物細胞培養(yǎng)的目的就是為了獲得大量的細胞分泌蛋白 B動物細胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶處理使細胞分散 C細胞遺傳物質的改變發(fā)生于原代培養(yǎng)過程中 D培養(yǎng)至50代后繼續(xù)傳代的細胞是細胞株 6、在動物細胞培養(yǎng)中有部分細胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱之為（ ） A原代培養(yǎng) B傳代培養(yǎng) C細胞株 D細胞系,B,D,7、動物細胞培養(yǎng)的正確過程是（ ） A.原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞系 B. 原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞系細胞株 C.傳代培養(yǎng)細胞系原代培養(yǎng)細胞株 D. 原代培養(yǎng)細胞系傳代培養(yǎng)細胞株 8、下列與動物細胞培養(yǎng)有關的表述中，不正確的是（ ） A培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動

7、物血清 B原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右便會出現生長停滯 C動物細胞培養(yǎng)一般能夠傳到4050代，但其遺傳物質發(fā)生了改變 D動物細胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質和獲得大量自身健康細胞,A,C,9、下圖是動物細胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據此圖回答,(1)容器A中放置的是動物器官或組織。它一般取自_。 (2)容器A中的動物器官或組織首先要進行的處理是_，然后用 酶處理，這是為了使細胞分散開來。這樣做的目的是_. (3)培養(yǎng)首先在B瓶中進行。瓶中的培養(yǎng)基成分有 _ _等。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，一般傳到第 代，有許多細胞衰老死亡，到這時的培養(yǎng)稱為_. (4)為了把B瓶中的細胞分裝到C瓶中，用_ 處理，然后

8、配置成_，再分裝。 (5)在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現細胞全部死亡。原因是_。,幼齡動物的器官或組織、動物胚胎,剪碎,胰蛋白,使每個細胞能與培養(yǎng)液接觸,葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清,10,原代培養(yǎng),胰蛋白酶,細胞懸浮液,細胞沒有發(fā)生瘤變,知識能力化,1為了使用于培養(yǎng)的動物組織細胞分散開以便配制成一定濃度的細胞懸浮液，選取來的動物組織應選用下列哪種物質處理 A.胃蛋白酶 B.胰蛋白酶 C.鹽酸 D.胰脂肪酶 2下列與動物細胞培養(yǎng)有關的表述中，不正確的是 （ ） A培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等 B原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右便會出現生長停滯 C動物

9、細胞培養(yǎng)一般能夠傳到4050代，但其遺傳物質發(fā)生了改變 D動物細胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質和獲得大量自身健康細胞 3動物細胞培養(yǎng)的細胞來自于（ ） A任何個體的細胞B只能取自幼齡動物的組織細胞C只能取自動物胚胎細胞 D胚胎或幼齡動物的器官和組織細胞,4動物細胞工程常用的技術手段中，最基礎的是 （ ） A.動物細胞培養(yǎng) B.動物細胞融合 C.單克隆杭體 D.胚胎、核移植 5在動物細胞培養(yǎng)中有部分細胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱之為: A原代培養(yǎng) B傳代培養(yǎng) C細胞株 D細胞系 6衛(wèi)生部2005年4月6日發(fā)布了蘇丹紅危險性報告評估，報道中提到蘇丹紅一號是一種人工色素(工業(yè)染料)，

10、它在人體內代謝生成相應的胺類。科研人員欲采用一定的技術手段探究蘇丹紅是否對人體有危害，你認為采取下列哪種技術手段最合適： A動物細胞融合 B動物細胞培養(yǎng) C胚胎移植 D核移植,7下列有關動物細胞培養(yǎng)的敘述，不正確的是 A.用于培養(yǎng)的細胞大都取自胚胎或幼齡動物的器官或組織 B.將所取的組織先用胰蛋白酶等進行處理使其分散成單個細胞 C.在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液 D.動物細胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細胞就會衰老死亡 8用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞 （ ） A.容易產生各種變異 B具有更強的全

11、能性 C.取材十分方便 D分裂增殖的能力強,（無菌處理和添加抗生素、更換培養(yǎng)液）,與體內相同。合成培養(yǎng)基：糖、氨基酸、促生長因子（血清、血漿）、無機鹽、微量元素等,（3637、7.27.4）,（O2、CO2-維持培養(yǎng)液PH）,1.2動物細胞培養(yǎng)的條件：,動物細胞培養(yǎng)的過程:,1.2 動物細胞培養(yǎng)過程,胚胎或幼齡動物的組織器官,細胞懸液,10代細胞,50細胞,剪碎,胰蛋白酶,洗滌、稀釋、分離,原代培養(yǎng),用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質主要是蛋白質。動物細胞培養(yǎng)適宜的PH為7.27.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。,比老齡動物的組織細胞增殖能力強，有絲分裂旺盛。分化程度越低，繁殖能力越強，越容易培養(yǎng)。,動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體,動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質，將細胞網絡起來