自免及CCP課件

1、,自身免疫性疾病及其檢測,1,.,目錄,2,.,自身耐受(Self-tolerance),自身免疫(autoimmunity),自身免疫病(autoimmune disease，AID),3,.,4,.,自身抗體(致敏T淋巴細胞):針對自身組織器官、細胞及細胞內(nèi)成分的免疫應答過程產(chǎn)生的抗體和效應T細胞。,自身免疫,5,.,AID,LOREM,自身免疫病(AID),皮膚,血液,免疫,神經(jīng),心內(nèi),骨科,呼吸,腎內(nèi),6,.,器官特異性自身免疫?。?原發(fā)性腎上腺皮質(zhì)功能減退癥（Addison病） 橋本氏甲狀腺炎 自身免疫性溶血性貧血 非器官特異性自身免疫?。?系統(tǒng)性紅斑狼瘡 類風濕性關(guān)節(jié)炎,原發(fā)性自身

2、免疫病: 原發(fā)性肝硬化 繼發(fā)性自身免疫?。?許多疾病可伴發(fā)繼發(fā)性自身免疫病，包括感染、惡性腫瘤、自身免疫性疾病、免疫球蛋白合成不足、淋巴細胞丟失以及某些其他疾病和免疫抑制治療等。其病可以是暫時性的，也可以是持久性的。,7,.,自身免疫性疾病的共同特征,1多數(shù)自身免疫病為自發(fā)或特發(fā)，感染、藥物等外因可能有一定的影響； 2患者血液中有高效價的自身抗體或，但對外源性自身抗原應答降低； 3病理特征為免疫炎癥，出現(xiàn)大量淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞浸潤； 4病程一般較長，發(fā)作與緩解交替出現(xiàn)，僅有少數(shù)為自限性； 5有遺傳傾向； 6女性多于男性，老年多于青少年； 7自身抗體在不同的AID中有交叉和重疊； 8可

3、復制出相似的動物疾病模型。 9應用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑有效。,8,.,自身免疫性疾病的共同特征,1多數(shù)自身免疫病為自發(fā)或特發(fā)，感染、藥物等外因可能有一定的影響； 2患者血液中有高效價的自身抗體或，但對外源性自身抗原應答降低； 3病理特征為免疫炎癥，出現(xiàn)大量淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞浸潤； 4病程一般較長，發(fā)作與緩解交替出現(xiàn)，僅有少數(shù)為自限性； 5有遺傳傾向； 6女性多于男性，老年多于青少年； 7自身抗體在不同的AID中有交叉和重疊； 8可復制出相似的動物疾病模型。 9應用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑有效。,9,.,抗原方面的因素,01,免疫調(diào)節(jié)異常,02,Fas/FasL表達異常,03,

4、遺傳因素,04,10,.,1.抗原方面的因素,A.隱蔽抗原的釋放 隱蔽抗原（Sequestered antigen）：指在正常情況下，體內(nèi)和免疫系統(tǒng)相對隔離的某些自身抗原成分。主要存在于腦、甲狀腺球蛋白、眼的晶體和葡萄膜、腎上腺和精子等。,當機體受到感染、外傷或手術(shù)時，某些隱蔽抗原進入血液或淋巴液，從而激活相應淋巴細胞克隆，產(chǎn)生自身免疫和自身免疫病。,11,.,B.自身抗原發(fā)生改變 如經(jīng)過感染、輻射、藥物等，自身抗原發(fā)生修飾 肺炎支原體改變紅細胞溶血性貧血 小分子藥物吸附到血小板紫癜 IgG變性類風濕因子RFRA,1.抗原方面的因素,12,.,C.共同抗原引起的交叉反應 分子模擬：微生物與正常

5、宿主成分有相同/相似抗原表位，其誘發(fā)機體產(chǎn)生的免疫應答可攻擊人體細胞或細胞外成分。 柯薩奇病毒感染引起免疫應答共計胰島細胞糖尿病 乙型溶血性鏈球菌與人腎小球基底膜和心瓣膜有類似抗原引起急性腎小球腎炎和風濕性心臟病 EB病毒編碼蛋白與髓磷脂堿性蛋白（MBP）同源引起多發(fā)性硬化性的癥狀 熱休克蛋白（HSP）高度保守蛋白，其他物種來源HSP與人HSP有高度相似性誘導自身免疫病,1.抗原方面的因素,13,.,1.抗原方面的因素,D.表位擴展 抗原 表位擴展：免疫系統(tǒng)在對優(yōu)勢表位進行免疫應答后，可能對隱蔽表位相繼發(fā)生免疫應答。 針對自身抗原應答發(fā)生表位擴展使自身抗原不斷受到新的免疫攻擊導致疾病遷延不愈,

6、優(yōu)勢表位：初始接觸時就刺激免疫應答 隱蔽表位：后續(xù)免疫應答中刺激免疫應答,14,.,2.免疫調(diào)節(jié)異常,A.淋巴細胞旁路活化 正常情況下，針對自身抗原的Th細胞或克隆被排除，或功能受到抑 制，故不能輔助效應T、B細胞發(fā)生自身免疫 交叉抗原或藥物與自身抗原結(jié)合，可通過其新的抗原決定簇激活相應的新的Th,導致自身免疫病,15,.,2.免疫調(diào)節(jié)異常,B.調(diào)節(jié)性T細胞亞群異常 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞異常（Treg 細胞不僅抑制正常T淋巴細胞的激活,而且對B淋巴細胞、巨噬細胞及樹突狀細胞的功能也具有 調(diào)節(jié)作用,在免疫應答中發(fā)揮重要的負調(diào)節(jié)作用。） CD8 +CD28-抑制性T細胞異常（負責細胞接觸

7、） Tr1 調(diào)節(jié)性 T細胞 異常（負責細胞接觸和分泌細胞因子IL-10） Th3調(diào)節(jié)性T 細胞異常（分泌細胞因子TGF- ） 調(diào)節(jié)性T細胞發(fā)生異常不能有效抑制自身反應T細胞引起自身免疫病,16,.,2.免疫調(diào)節(jié)異常,C.多克隆刺激劑旁路激活,自身反應性T、B細胞可通過多克隆激活劑（如人類皰疹病毒EBV或細菌內(nèi)毒素）直接被激活,TH,T或B,多克隆激活劑（如 EBV、細胞內(nèi)毒素）,自身免疫病,無輔助信號,自身抗原,耐受TH,17,.,2.免疫調(diào)節(jié)異常,D. Th1和Th2細胞功能失衡 在適應性免疫應答中,Th1 與Th2 細胞處于相對平衡狀態(tài), 因為Th1 細胞 分泌的IFN-對Th2 細胞的分

8、化成熟有抑制作用,而Th2 細胞分泌的IL-4 對Th1 細胞有抑制作用。 許多疾病的發(fā)生和結(jié)局都與Th1/ Th2 細胞失衡有關(guān), 一些自身免疫疾病與Th1 細胞過多有關(guān)，如多發(fā)性硬化癥MS，胰島素依賴性糖尿病, 而一些過敏性疾病與Th2 細胞過多有聯(lián)系 ，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡。,18,.,2.免疫調(diào)節(jié)異常,E. 協(xié)同刺激分子異常表達 除免疫細胞對抗原提呈細胞（APC）表面抗原肽復合物識別外，還需兩細胞間輔助刺激因子的相互作用才能激活免疫細胞。（ B7主要表達于某些抗原提呈細胞表面，可提供T細胞活化的協(xié)同刺激信號；CTLA-4與B7結(jié)合后誘導T細胞無反應性，參與免疫反應的負調(diào)節(jié) 。） B7分子異

9、常表達提供活化第二信號功能激活淋巴細胞自身免疫病 CTLA-4分子異常表達不能抑制活化信號2激活淋巴細胞自身免疫病,19,.,2.免疫調(diào)節(jié)異常,F. MHC-類分子異常表達 某些自身免疫病受累器官細胞表面會異常表達或高表達 MHC-類抗原分子，這些細胞可能具有向Th細胞提成自身抗原的潛能，導致自身免疫病。 提呈自身抗原激活自身反應性淋巴細胞引起自身免疫病,20,.,3.Fas/FasL表達異常,Fas屬TNFR /NGFR家族成員，F(xiàn)asL為受體，二者結(jié)合可誘導細胞凋亡 Fas/FasL基因缺陷，由于細胞凋亡機制受損，T、B細胞克隆增殖 失控，易發(fā)生AID。 Fas/FasL基因過度表達，如I

10、型糖尿病發(fā)病過程中產(chǎn)生的IL-1 和NO，使胰島細胞表達Fas，激活的CTL表達FasL，F(xiàn)as/FasL使胰島細胞 受損。,21,.,4.遺傳因素,AID有家族遺傳傾向，與HLA某些基因型檢出率呈正相關(guān)，HLA與自身免疫性疾病的關(guān)系舉例：,22,.,4.遺傳因素,與自身免疫性疾病相關(guān)的其他基因： 補體成分C1q和C4基因缺陷清除免疫復合物的功能減弱易發(fā)生SLE； CTLA-4基因缺陷易發(fā)生糖尿病，甲狀腺疾病和原發(fā)性膽管硬化； DNA酶基因缺陷易導致SLE； 血清淀粉樣蛋白SAP基因缺陷易導致SLE。,23,.,抗血細胞表面抗原的抗體引起的自身免疫性疾病,1.自身免疫性溶血性貧血（autoim

11、mune hemolytic anemia, AIHA） 體內(nèi)出現(xiàn)抗紅細胞自身抗體，Coombs試驗陽性。紅細胞壽命縮短。 2.免疫性血小板減少性紫癜（immunologic thromabacytopenic purpura, ITP） 血清中存在抗血小板抗體，使血小板壽命縮短。,24,.,抗細胞表面受體抗體引起的自身免疫病,1.重癥肌無力（myasthenia gravis, MG） 2.毒性彌漫性甲狀腺腫（Graves disease）,25,.,細胞外抗原的自身抗體引起的自身免疫病,1.抗腎小球基底膜腎炎 肺出血腎炎綜合征（又稱Good pasture 綜合征） 由于肺泡基底膜與腎小球

12、基底膜有共同抗原，可檢測到抗腎小球基底膜型膠原抗體 臨床特點：反復咯血，痰內(nèi)有含鐵血黃素，伴有血尿，蛋白尿等,26,.,自身抗體免疫復合物引起的自身免疫性疾病,1.系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic disease erythematosus, SLE） 是一種累及多器官、多系統(tǒng)的小血管及結(jié)締組織病。,自身細胞核抗原,IgG型自身抗體,復合物沉積于腎小球、關(guān)節(jié)和其它器官的細胞壁,中性粒細胞損傷,27,.,2.類風濕性關(guān)節(jié)炎 （rheumatoid arthritis, RA）,是一種以侵蝕性關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的全身性自身免疫性疾病。 病理表現(xiàn)為關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥，并出現(xiàn)關(guān)節(jié)的軟骨和骨破壞，最終導致

13、關(guān)節(jié)畸形和功能喪失。,感染、炎癥 變性IgG(自身抗原) 抗變性IgG抗體（RF） 免疫復合物（變性IgGRF） 沉積于關(guān)節(jié)滑膜等部位 激活補體，引起病變,28,.,3.干燥綜合征（Sjogren Syndrome,SS）,分泌腺功能異常導致皮膚和粘膜的干燥，淚腺和唾液腺最常被侵犯，從而產(chǎn)生口干和眼干。 病毒：與EB病毒、巨細胞病毒、HIV病毒有關(guān)。 機制：抑制性T細胞減少，細胞免疫異常。,29,.,自身抗體：是指抗自身細胞內(nèi)、細胞表面和細胞外抗原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗體(譜)。,自身抗體 免疫球蛋白 補體 淋巴細胞 細胞因子,自身免

14、疫性疾病的主要實驗檢測內(nèi)容：,30,.,自身免疫性疾病的重要標志 高滴度存在于自身免疫性疾病患者 與疾病的活動性相關(guān) 參與免疫病理性損傷,自身抗體的特性：,31,.,自身抗體檢測的臨床意義：,32,.,以類風濕性關(guān)節(jié)炎為例：,2009年ACR和歐洲抗風濕病聯(lián)盟（EULAR）標準,該標準對關(guān)節(jié)受累情況、血清學指標、滑膜炎持續(xù)時間和急相時相反應物共4個部分進行評分，總得分6分以上可診斷為RA。,33,.,1.類風濕因子（RF）：抗變性IgG Fc的自身抗體，有IgM型，IgG和IgA型，IgM型RF被認為是主要類型。 測定方法： 膠乳顆粒凝集實驗，速率散射比濁法，ELISA法 特點： RF在RA、

15、SLE、PSS等多種自身免疫性疾病患者中均可被檢出； RF滴度與RA患者臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，IgM-RF效價80IU/ml并伴有嚴重關(guān)節(jié)功能障礙時通常提示患者預后不良。 IgG-RF與RA患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)癥狀密切相關(guān)，常伴隨IgM-RF同時出現(xiàn)，在正常人及非RA患者中很難檢出。 IgA-RF與RA患者關(guān)節(jié)癥狀的嚴重程度及骨質(zhì)破壞有顯著相關(guān)性。 特異性僅79，敏感性約為60。,類風濕性關(guān)節(jié)相關(guān)自身抗體：,34,.,2.抗角蛋白抗體（AKA）：靶抗原為上皮細胞特異性分泌的絲聚蛋白，僅能識別瓜氨酸化，蛋白質(zhì)的瓜氨酸化在細胞分化和凋亡過程中青島必不可少的生理生化調(diào)節(jié)作用，對RA診斷具有高度特異

16、性，陽性率為30-55%，特異性為95-99%。高滴度可預示較嚴重的RA類型。 3.抗核周因子（APF):靶抗原為頰黏膜上皮細胞胞質(zhì)內(nèi)透明角質(zhì)顆粒。RA患者APF陽性率達為50%，特異性為95%左右。檢測方法：間接免疫熒光法（IIF）。 4.抗聚角蛋白微絲蛋白抗體（AFA）：靶抗原為人表皮細胞胞質(zhì)內(nèi)聚角蛋白微絲蛋白，大小為43KD，檢測方法：免疫印跡法和酶聯(lián)吸附法，可用于RA的診斷，但不能完全代替APF、AKA檢測，三者相互補充可以提高RA早期診斷率。,35,.,5.環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗- CCP抗體） 以人工合成的由分子內(nèi)的二硫鍵形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的瓜氨酸肽為抗原（圖1）。Anti-CCP獨立于RF

17、，對RA具有較高的特異性，誤診率明顯低于RF，應用環(huán)瓜氨酸肽(CCP)為包被抗原的ELISA檢測試劑對RA診斷的特異性提高到96-98，而其敏感性無改變。且對RA的關(guān)節(jié)損害具有很大的預測價值，從而對RA預后意義重大。,瓜氨酸化：精氨酸正電荷丟失導致三維結(jié)構(gòu)的變化；可能的CCP結(jié) 構(gòu)。PAD，肽基精氨酸去亞胺基酶。,36,.,6.抗瓜氨酸化的波形蛋白抗體（Anti-Sa）和抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體（Anti-MCV） 抗Sa抗體對RA的特異性高達98，但敏感性有限，僅22%- 40%,抗Sa抗體對RA嚴重的臨床階段的預后有意義。此外，抗Sa抗體對RA的診斷具有84-99的預測值，同關(guān)節(jié)外癥狀、

18、嚴重的關(guān)節(jié)受累密切相關(guān)。用于RA診斷的檢測抗MCV抗體的 ELISA試劑盒已經(jīng)市場化，其診斷的特異性和敏感性同抗CCP抗體的類似。,37,.,各自身抗體檢測RA的對比,38,.,39,.,40,.,酶聯(lián)免疫：三明博峰生物科技有限公司 深圳市賽爾生物技術(shù)有限公司 杭州中翰盛泰生物技術(shù)有限公司 深圳市賽爾生物技術(shù)有限公司 有效期10個月。 上海北加生化試劑有限公司 上?？菩律锛夹g(shù)股份有限公司 蘇州浩歐博生物醫(yī)藥有限公司 北京正旦國際科技有限責任公司 上海榮盛 北京熱景生物技術(shù)有限公司,膠體金滲濾法；上海北加生化試劑有限公司,上轉(zhuǎn)發(fā)光，熱景,抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體檢測試劑盒(膠體金法) 上海榮盛生物藥業(yè)有限公司 上海科新生物技術(shù)股份有限公司 北京熱景生物技術(shù)有限公司,41,.,抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（