生命科學(xué)部新產(chǎn)品培訓(xùn)---分子病理診斷ppt課件.ppt

1、生命科學(xué)部部門培訓(xùn),分子病理診斷技術(shù) 及應(yīng)用,李貞國(guó)藥集團(tuán)聯(lián)合醫(yī)療器械有限公司,1,病理的發(fā)展過程？,2,人體、染色體、DNA關(guān)系？,每個(gè)人體細(xì)胞內(nèi)有一個(gè)細(xì)胞核，每個(gè)細(xì)胞核內(nèi)有46條染色體，每個(gè)染色體都蘊(yùn)含著具有遺傳效應(yīng)的DNA片段，正是它們決定了我們每個(gè)不同的個(gè)體?，F(xiàn)在，讓我們一起揭開染色體和DNA的結(jié)構(gòu)與功能之謎。,3,PPT模板下載： 行業(yè)PPT模板： 節(jié)日PPT模板： PPT素材下載： PPT背景圖片： PPT圖表下載： 優(yōu)秀PPT下載： PPT教程： Word教程： Excel教程： 資料下載： PPT課件下載： 范文下載： 試卷下載： 教案下載：,目 錄,

2、1.分子病理概述,2.分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施與環(huán)境,3.病理科實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn),4.分子病理學(xué)常用檢測(cè)設(shè)備,5.推薦設(shè)備型號(hào)及預(yù)算,6.常用試劑及價(jià)格,國(guó)藥集團(tuán)聯(lián)合醫(yī)療器械有限公司,7.經(jīng)濟(jì)效益分析,4,分子病理診斷的市場(chǎng)介紹,分子病理診斷的應(yīng)用范圍,常用分子病理診斷技術(shù),分子病理診斷的現(xiàn)在和未來,5,國(guó)外廠家：羅氏診斷（瑞士）、Gen-Probe（Hoiogic）（美國(guó)）、QIAGEN（荷蘭）、BD（美國(guó)）、西門子（德國(guó)）、生物梅里埃（法國(guó)）、雅培（美國(guó)）、諾華（瑞士）、Cepheid（美國(guó)）和貝克曼庫(kù)爾特（美國(guó)） 國(guó)內(nèi)廠家：深圳華大、達(dá)安基因、科華生物、上海之江、北京博奧、廈門艾德、湖南圣

3、湘、福州泰普、廣州安必平,6,分子病理診斷的應(yīng)用范圍,腫瘤易感基因的檢測(cè)（Rb1視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤；WT1腎母細(xì)胞瘤） 腫瘤先關(guān)病毒的檢測(cè)(HPV病毒與宮頸癌發(fā)生有很大關(guān)系） 腫瘤的早期診斷：（K-ras基因突變?cè)诮Y(jié)腸癌、胰腺癌、肺癌等腫瘤中發(fā)生率高，結(jié)腸癌指導(dǎo)靶向用藥愛必妥，肺癌指導(dǎo)靶向用藥吉非替尼、埃羅替尼） 疑難腫瘤的診斷和分類（T細(xì)胞受體基因重排具有鑒別淋巴細(xì)胞增生和淋巴瘤，Bcr區(qū)基因重排可對(duì)慢性粒細(xì)胞性白血病和急性粒細(xì)胞性白血病進(jìn)行鑒別診斷，N-myc和C-myc檢測(cè)可對(duì)鑒別神經(jīng)母細(xì)胞瘤和神經(jīng)上皮瘤有應(yīng)用價(jià)值） 腫瘤的預(yù)后監(jiān)測(cè) 腫瘤個(gè)體化和預(yù)見性治療提供依據(jù) 腫瘤的預(yù)后判斷：(HER2

4、基因陽性表達(dá)表示乳腺癌治療預(yù)后不良需要改變治療方案，指導(dǎo)靶向用藥赫賽?。?7,常用分子病理診斷技術(shù),免疫組織化學(xué)技術(shù)（IHC)-檢測(cè)蛋白質(zhì) 分子原位雜交-檢測(cè)DNA、RNA,熒光原位雜交技術(shù)（FISH)-檢測(cè)DNA、RNA 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(PCR)-檢測(cè)DNA、RNA,熒光定量PCR技術(shù)-檢測(cè)DNA、RNA DNA測(cè)序技術(shù)-檢測(cè)DNA突變,生物芯片技術(shù)-檢測(cè)DNA、RNA、蛋白質(zhì) DNA印跡技術(shù)(southern blot)-檢測(cè)DNA,微衛(wèi)星不穩(wěn)定性檢測(cè)技術(shù)（MSI),8,分子病理診斷的現(xiàn)在和未來,未來（突破）,自動(dòng)化不足（限制檢測(cè)通量） 檢測(cè)技術(shù)難以突破，產(chǎn)品同質(zhì)化嚴(yán)重,儀器一體化、自

5、動(dòng)化、操作簡(jiǎn)便 增強(qiáng)研發(fā)能力，革新技術(shù)，研發(fā)新品 二代測(cè)序技術(shù)突破提升，提高檢測(cè)速度，降低檢測(cè)成本,9,熒光原位雜交技術(shù)（FISH),原理：通過熒光標(biāo)記的DNA探針與細(xì)胞核內(nèi)的DNA靶序列雜交，在熒光顯微鏡下能原位顯示細(xì)胞核內(nèi)雜交信號(hào)的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)。 步驟：FISH樣本制備 探針的制備 探針標(biāo)記 雜交 染色體顯帶 熒光顯微鏡 檢測(cè) 結(jié)果分析 在醫(yī)院中的使用：病理科、血液科、婦產(chǎn)科、生殖中心（產(chǎn)前診斷，植入前診斷） 產(chǎn)品種類及廠家品牌：細(xì)胞類探針-白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、產(chǎn)前診斷和產(chǎn)后篩查類 實(shí)體腫瘤類探針-乳腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、肺癌、軟組織肉瘤、前列腺瘤、甲狀腺癌等方面 實(shí)驗(yàn)室基本要

6、求：環(huán)境-樣本準(zhǔn)備區(qū)、暗室（10-15平米左右） 設(shè)備-熒光顯微鏡以及熒光成像分析系統(tǒng)、水浴鍋、原位雜交儀、冰箱、離心機(jī)、恒溫箱 辦公設(shè)備-電腦、打印機(jī) 實(shí)驗(yàn)耗材-FISH探針、普通實(shí)驗(yàn)耗材 技術(shù)人員：1人,10,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),原理：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過探針與擴(kuò)增產(chǎn)物的結(jié)合釋放出熒光信號(hào)，再通過專門的儀器對(duì)信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，經(jīng)過軟件分析可以準(zhǔn)確計(jì)算出目的基因的初始數(shù)量，實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。 步驟：提取樣本核酸 反轉(zhuǎn)錄成CDNA 設(shè)計(jì)引物和探針制備 探針標(biāo)記 RT-PCR 反應(yīng)進(jìn)行 分析熒光實(shí)驗(yàn)圖 應(yīng)用范圍：臨床疾病診斷、動(dòng)物疾病檢測(cè)、食品安全、科學(xué)研究、應(yīng)用行業(yè) 檢測(cè)腫瘤的

7、項(xiàng)目：CEA(mRNA）、 AFP(mRNA）、 UPA(mRNA）、 CK19(mRNA）、CK20(mRNA）、 MDRI(mRNA） 優(yōu)點(diǎn)：特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化，可以在一個(gè)試管內(nèi)將目的基因數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至百萬倍，可從一根毛發(fā)、一滴血、一個(gè)細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增出足量的DNA進(jìn)行研究和檢測(cè)鑒定。 實(shí)驗(yàn)室基本要求：需要避光的暗室；有熒光顯微鏡觀察室 技術(shù)人員：1人,11,12,DNA一代測(cè)序技術(shù),原理：（sanger雙脫氧核苷酸末端終止法）利用DNA聚合酶，以待測(cè)單鏈DNA為模板，以dNTP為底物，設(shè)立四種相互獨(dú)立的測(cè)序反應(yīng)體系，在體系中加入不同的ddNTP作為鏈延伸終止劑。

8、在測(cè)序引物指導(dǎo)下，按照堿基配對(duì)原則，每個(gè)反應(yīng)體系中合成一系列長(zhǎng)短不一的引物延伸鏈，通過凝膠電泳后，可以讀出新合成鏈序列，由此推知待測(cè)模板鏈的序列。 步驟：測(cè)序模板的純化與定量、測(cè)序反應(yīng)、測(cè)序反應(yīng)產(chǎn)物純化與變性、上樣電泳、分析結(jié)果 應(yīng)用范圍：尋找與疾病相關(guān)的突變信息、指導(dǎo)靶向用藥、尋找致病基因、各種基因作用的破解，提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量、明白個(gè)人基因信息，選擇投保 臨床檢測(cè)項(xiàng)目：K-RAS基因突變檢測(cè)（結(jié)直腸癌、胃癌、頭頸部癌及肺癌，愛必妥類靶向治療） EGFR基因突變檢測(cè)（肺癌，易瑞沙和特羅凱靶向治療） Bcr-Ab1融合基因和C-KIT、PDGFR基因突變檢測(cè)（白血病、胃腸道間質(zhì)瘤，格列衛(wèi)靶向治療）

9、 乳腺癌化療、結(jié)直腸腺癌化療的個(gè)體化治療方案 技術(shù)人員：1-2人,13,DNA二代測(cè)序技術(shù),原理：（大規(guī)模平行測(cè)序法）單鏈DNA文庫(kù)被固定在芯片上并帶有合成引物，用不同顏色的熒光標(biāo)記四種不同的dNTP，逐一加入DNA芯片上，當(dāng)聚合酶合成互補(bǔ)鏈時(shí)，每添加一種dNTP就會(huì)釋放不同的熒光，根據(jù)捕捉的熒光信號(hào)并經(jīng)過特定的計(jì)算機(jī)軟件處理，從而獲得待測(cè)DNA的序列信息。 步驟：文庫(kù)制備 DNA芯片創(chuàng)建 進(jìn)行測(cè)序 數(shù)據(jù)分析,14,15,？哪種檢測(cè)技術(shù)才是現(xiàn)在臨床使用最廣的,16,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施與環(huán)境,1. 布局合理，實(shí)驗(yàn)室 各區(qū)域的正確劃分,3. 消防設(shè)施安全 消防通道暢通,4. 石蠟組織、DNA樣本

10、的存放,2. 水電、照明、 通風(fēng)符合 實(shí)驗(yàn)室基本要求,5. 實(shí)驗(yàn)室記錄、操作手冊(cè) 等文件存放,7. 安裝生物安全 防護(hù)措施,8. 實(shí)驗(yàn)室的清潔 日常消毒、 有相關(guān)記錄,6. 實(shí)驗(yàn)室耗材 試劑的存放 廢棄物的處理,17,病理科實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn),衛(wèi)生部【2009】31號(hào)文件（病理科建設(shè)與管理指南） 2006年6月1日實(shí)施的（醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法） 全國(guó)各省市的關(guān)于臨床病理專業(yè)質(zhì)量檢查及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 美國(guó)CAP認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn) 歐洲NordiQC認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn) 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織制定并與2003年正式發(fā)布醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的管理標(biāo)準(zhǔn)，ISO15189：2003(醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求）,18,IHC,ISH,19

11、,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,免疫組化染色,所需試劑： 機(jī)用緩沖液 機(jī)用清洗液 機(jī)用抗原修復(fù)液 一抗試劑 機(jī)用二抗檢測(cè)系統(tǒng),20,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,原位雜交,所需試劑： 原位雜交試劑盒 二甲苯 無水乙醇 PBS清洗液,21,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,熒光原位雜交 （FISH),HyChrome是一個(gè)創(chuàng)新產(chǎn)品，用于完成高溫原位變性和退火雜交探針過程。 HyChrome由一個(gè)單獨(dú)的平板加熱模塊和一個(gè)濕度箱組成：平板加熱模塊的溫度是由一個(gè)數(shù)字微處理器來控制，濕度箱為了減少脫水，最終實(shí)現(xiàn)高信號(hào)和低背景雜交。在一個(gè)模塊中完成標(biāo)本變性和雜交的溫度控制技術(shù)以及可能性已被驗(yàn)證了，該技術(shù)以及可能性保證了片

12、子之間溫度的可變性和一個(gè)好的再現(xiàn)性,所需試劑： 一抗探針 二抗試劑 蛋白酶 變性液 二甲苯 無水乙醇 PBS清洗液,22,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,DM2500,熒光顯微鏡部分 數(shù)碼成像系統(tǒng)部分 細(xì)胞染色體核型分析軟件 熒光原位雜交分析軟件,23,熒光定量 PCR儀,顯示器,核酸 電泳儀,椅子,空 氣 流 向,擴(kuò)增和分析區(qū),金屬浴,水槽,離心機(jī),生物安全柜,冰 箱,椅子,空 氣 流 向,樣本制備區(qū),廢液缸,振蕩器,天平,離心機(jī),椅子,試劑準(zhǔn)備區(qū),空 氣 流 向,專用走廊,普通 PCR儀,凝膠成像系統(tǒng),核酸提取儀,DNA測(cè)序儀,24,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,核酸提純儀,博日GenePure 核

13、酸提純儀 采用磁珠分離技術(shù)，提取過程自動(dòng)化 多選擇性試劑盒可以從多種樣品材料中分離純化高純度的核酸 省時(shí)、省力、高效、準(zhǔn)確,25,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,PCR擴(kuò)增儀,博日GeneMax,所需試劑： PCR MIX 引物 雙蒸水,26,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,生物安全柜,高效循環(huán)空氣過濾器 自適應(yīng)壓力調(diào)整功能 微機(jī)控制 大屏幕液晶顯示 配重前窗 環(huán)境安全 配備有紫外燈 照明系統(tǒng),27,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,離心機(jī),產(chǎn)品特征： 適應(yīng)于DNA的分離、提純及后處理清潔工作 最大轉(zhuǎn)速達(dá)15000rpm 無需手動(dòng)，自動(dòng)關(guān)門 運(yùn)行安靜，無碳刷感應(yīng)電機(jī) 溫度范圍：從-20度 到 40度，保證樣品的生

14、物活性 適用于0.25ml到500ml的樣品 運(yùn)行時(shí)間：9h59min，連續(xù)離心,貝克曼 Allegra 25R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī),28,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,熒光定量PCR儀,采用熒光實(shí)時(shí)檢測(cè)方式，實(shí)現(xiàn)在同一管內(nèi)同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)，無須后處理 先進(jìn)的熱電制冷技術(shù)，保證了超高速的熱循環(huán)系統(tǒng)加熱，制冷迅速、穩(wěn)定 穩(wěn)定、準(zhǔn)確的 136梯度功能，確保 PCR 條件更優(yōu)化 ，SOAK 的恒溫功能，實(shí)現(xiàn)了 PCR 試劑的低溫保存 l對(duì) PCR 擴(kuò)增全過程進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè) 線型范圍大，可達(dá)到 10 個(gè)數(shù)量級(jí)的起始 DNA 拷貝數(shù)無需梯度稀釋 無需開啟 PCR 反應(yīng)管，可避免在 PCR 期間及 PCR

15、之后產(chǎn)物污染，確保結(jié)果準(zhǔn)確 多色熒光檢測(cè)，在單一反應(yīng)中取得更多信息 自動(dòng)化的熱蓋技術(shù)，無需手動(dòng)開/閉，保證熱蓋在不同高度試管使用時(shí)的壓力 可打印多個(gè)或單個(gè)樣本 先進(jìn)的模塊底部熒光檢測(cè)技術(shù)，受發(fā)明專利保護(hù) l支持 RS232、USB、Bluetooth 接口,博日LineGene9600,所需試劑： 待測(cè)樣本核酸提取試劑盒 待測(cè)樣本濃度測(cè)定 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 熒光定量PCR試劑盒 其他試劑,29,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,ABI Step OnepPlus,熒光定量PCR儀,性價(jià)比極高的三色/48孔(StepOne)或四色/96孔(StepOnePlus)系統(tǒng) 基于使用壽命長(zhǎng)的LED的光學(xué)系統(tǒng)，可以

16、檢測(cè)多種熒光染料，用于基因表達(dá)分析、病原體定量檢測(cè)、SNP(單核苷酸多態(tài)性)基因分型、以及陰性/陽性分析等多種實(shí)驗(yàn) 可以進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)模式和快速模式PCR反應(yīng)，快速模式可以在40分鐘內(nèi)完成PCR反應(yīng) LCD觸摸屏和支持USB存儲(chǔ)，使得系統(tǒng)配置更靈活，并且可以實(shí)現(xiàn)無PC操作 具有獨(dú)特的VeriFlexTM加熱塊，極大地提高了系統(tǒng)的功能和溫控的精度,30,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,核酸電泳儀,外形尺寸（LWH）：242132105mm 凝膠板規(guī)格(LW)：8580mm 試樣格：12、15齒，1.0、2.0mm厚 重量：約1Kg 緩沖液總?cè)萘浚杭s500m 適用于鑒定、分離、制備DNA以及測(cè)定其分子量。有冷

17、卻裝置，可做雙排膠。此型號(hào)適用PCR電泳或RNA電泳。,北京六一電泳儀,31,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,核酸凝膠成像系統(tǒng),暗箱式，無需暗室，可全天候使用 抽屜式燈箱互換，使用方便，防止污染 具有實(shí)時(shí)預(yù)覽、自動(dòng)對(duì)焦功能 紫外濾光鏡：EB專用超多層鍍膜濾光鏡（M520.75） *兼容tif、jpg、bmp、gif等諸多圖像格式 高清晰度130萬像素?cái)z像頭，高品質(zhì)成像質(zhì)量，遙控電動(dòng)變焦，智能化控制 專用拍攝軟件與分析軟件一體操作，使“觀察、拍攝、分析一氣呵成 通過USB接口與計(jì)算機(jī)連接，不觸動(dòng)計(jì)算機(jī)內(nèi)部硬件，便于維護(hù)和保修 紫外/白光轉(zhuǎn)換屏。 用途：主要用于核酸、蛋白質(zhì)電泳觀察、照像和實(shí)驗(yàn)結(jié)果科學(xué)分

18、析。,32,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,DNA一代測(cè)序儀,ABI 3730XL,sanger 法,毛細(xì)管電泳分離,電腦熒光檢測(cè),數(shù)據(jù)分析可得到DNA堿基序列,性能特點(diǎn)：,毛細(xì)管規(guī)格: 96道毛細(xì)管 毛細(xì)管長(zhǎng)度: 50cm 凝膠的規(guī)格: POP-7液體分離膠 配套的試劑: 基因測(cè)序(BigDye3.1v和5Sequence buffer) 基因分型(Liz120, Liz500, ROX500) 基因測(cè)序及分型的運(yùn)行時(shí)間 時(shí)間：96樣本 2h 通量：（94-96）/384*12 優(yōu)點(diǎn)： 方法可靠、準(zhǔn)確度高,且已形成規(guī)模化 缺點(diǎn)： 測(cè)定通量低，成本高 讀長(zhǎng)：700-900bp,33,分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)設(shè)備,DNA二代測(cè)序儀,Illumina GA,循環(huán)芯片技術(shù),技術(shù)特點(diǎn)： 測(cè)序通量高：每個(gè)測(cè)序反應(yīng)能達(dá)到3G以上的數(shù)據(jù)通量； 準(zhǔn)確率高： 98.5%，同時(shí)也有效地解決了多聚重復(fù)序列的讀取問題； 低成本：比傳統(tǒng)毛細(xì)管測(cè)