高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量

1、高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,實(shí)驗(yàn)10 泡菜的腌制和亞硝酸的測(cè)定,第三部分 :生物技術(shù)在食品 加工中的應(yīng)用,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,1.進(jìn)行泡菜的腌制 2.測(cè)定泡菜中亞硝酸的含量,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,泡菜是一種以濕態(tài)發(fā)酵方式加工制成的浸制品，為泡酸菜類的一種。泡菜制作容易，成本低廉，營(yíng)養(yǎng)衛(wèi)生，風(fēng)味可口，利于貯存。在我國(guó)四川、東北、湖南、湖北、河南、廣東、廣西等地民間均有自制泡菜的習(xí)慣。目前較受歡迎的是川味和韓味泡菜，在許多風(fēng)味餐館里，都有其蹤影，它鮮嫩清脆，可以增進(jìn)食欲，幫助消化與吸收。如果自己在家也做一些這樣的泡菜，做為每

2、天飯前小菜，或以它配菜，烹成各種菜肴，不失為一件美事。但是泡菜含亞硝酸鹽具制癌作用危害身體健康，所以不易多吃,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,一、泡菜的制作,1、泡菜制作基礎(chǔ)知識(shí) （1）乳酸菌 乳酸菌是異養(yǎng)厭氧型細(xì)菌，在無(wú)氧條件下，將葡萄糖分解成乳酸。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌，乳酸桿菌常用于制作酸奶。,（2）亞硝酸鹽 亞硝酸鹽(包括亞硝酸鉀和亞硝酸鈉)為白色粉末，易溶于水。當(dāng)人體攝入的亞硝酸鹽總量達(dá)到0.30.5g時(shí)，會(huì)引起中毒，達(dá)3g時(shí)會(huì)引起死亡。,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,（3）腌制條件 腌制過(guò)程中，要注意控制腌制的時(shí)間、溫度和食鹽的用量。 溫度過(guò)高

3、、食鹽用量不足10、腌制時(shí)間過(guò)短，容易造成細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。一般在腌制10天后，亞硝酸鹽的含量開始下降。,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,火候好、無(wú)裂紋、無(wú)砂眼、壇沿深、蓋子吻合好,（4）泡菜壇的選擇：,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,（2） 添加的調(diào)味品，如花椒、八角等。 （3） 白酒。 （4） 食糖和鹽。,4、步驟 （1）各種菜洗凈并切成34cm長(zhǎng)的小塊。,2、設(shè)備及用品：泡菜罐、菜刀及菜板 3、材料 （1） 各種蔬菜均可，一般用白菜、洋白菜、黃瓜、柿子椒、胡蘿卜、白蘿卜等。,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,（2）將泡菜壇洗凈，并用熱水洗壇

4、內(nèi)壁兩次。 （3）將各種蔬菜、鹽水、糖及調(diào)味品放入壇，混合均勻。如果希望發(fā)酵快些，可將蔬菜在開水中浸1分鐘后入壇，再加上一些白酒。 （4）將壇口用水封好，防止外界空氣進(jìn)入。 （5）腌制1周左右開壇食用，也可隨時(shí)加入新鮮蔬菜，不斷取用。 （6）如果加一些已經(jīng)腌制過(guò)的泡菜汁更好，相當(dāng)于接種已經(jīng)擴(kuò)增的發(fā)酵菌，可減少腌制時(shí)間。,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,發(fā)酵前期：蔬菜剛?cè)雺瘯r(shí)，表面帶入的微生物，主要是以不抗酸的大腸桿菌和酵母菌等較為活躍，它們進(jìn)行異型乳酸發(fā)酵和微弱的酒精發(fā)酵產(chǎn)生較多的乳酸、酒精、醋酸和二氧化碳等，二氧化碳以氣泡從水槽內(nèi)放出，逐漸使壇內(nèi)形成嫌氣狀態(tài)。,發(fā)酵產(chǎn)物中除乳酸外

5、，還有其他，如乙醇、CO2等稱異型乳酸發(fā)酵,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,發(fā)酵中期：由于前期乳酸的積累，pH下降，嫌氣狀態(tài)的形成，乳酸桿菌活躍進(jìn)行活躍的同型乳酸發(fā)酵，乳酸積累pH達(dá)3.53.8.大腸桿菌、酵母菌、霉菌等的活動(dòng)受到抑制。這一期為完全成熟階段，泡菜有酸味且清香品質(zhì)最好。,發(fā)酵后期：繼續(xù)進(jìn)行乳酸發(fā)酵，乳酸積累達(dá)1.2以上時(shí)，乳酸桿菌的活性受到抑制，發(fā)酵速度逐漸變緩甚至停止。,發(fā)酵產(chǎn)物中只有乳酸，稱為同型乳酸發(fā)酵,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,總結(jié)實(shí)驗(yàn)流程,原料加工,修整、洗滌、晾曬、切分成條狀或片裝,加鹽,鹽水冷卻,泡菜鹽水,加入調(diào)味料裝壇,發(fā)酵,成品,測(cè)

6、定亞硝酸鹽含量,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,1、加入白酒有什么作用？,白酒可抑制泡菜表面雜菌的生長(zhǎng)，它也是一種調(diào)味劑，可增加醇香感。,思考：,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,2、用水封閉壇口起什么作用？不封閉有什么結(jié)果？,水封閉壇口起著使壇內(nèi)與壇外空氣隔絕的作用，空氣中21是氧氣，這是最簡(jiǎn)易的造成無(wú)氧環(huán)境的方法。這樣，壇內(nèi)可利用蔬菜中天然存在的乳酸菌進(jìn)行乳酸發(fā)酵。如不封閉，則會(huì)有許多需氧菌生長(zhǎng)，蔬菜會(huì)腐爛。,3、為什么泡菜壇內(nèi)有時(shí)會(huì)長(zhǎng)一層白膜，這層白膜是怎么形成的？,形成白膜是由于產(chǎn)膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厭氧微生物，泡菜發(fā)酵液營(yíng)養(yǎng)豐富，其表面氧氣含量也很豐富，適

7、合酵母菌的繁殖。,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,4、為什么日常生活中要多吃新鮮蔬菜，不吃存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、變質(zhì)的蔬菜？,有些蔬菜，如小白菜和蘿卜等含有豐富的硝酸鹽。當(dāng)這些蔬菜放置過(guò)久時(shí)發(fā)生變質(zhì)（發(fā)黃、腐爛）或者煮熟后存放太久時(shí)，蔬菜中的硝酸鹽會(huì)被微生物還原成亞硝酸鹽，危害人體健康。,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,二、亞硝酸鹽含量的測(cè)定,1、測(cè)定亞硝酸鹽含量的原理 在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，再與N-1萘基乙二胺鹽酸鹽形成玫瑰紅色產(chǎn)物。將經(jīng)過(guò)反應(yīng)顯色后的待測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)液比色，即可計(jì)算出樣品中的亞硝酸鹽含量。,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝

8、酸鹽含量,2、材料與器具 泡菜、對(duì)氨基苯磺酸、 N-1萘基乙二胺鹽酸 鹽、氯化鈉、氫氧化鈉、氫氧化鋁、氯化鎘、 氯化鋇、亞硝酸鈉、蒸餾水、移液管、容量瓶、 比色管、榨汁機(jī)等,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,3、步驟,（1）配置溶液 對(duì)氨基苯磺酸溶液：稱取0.4克對(duì)氨基苯磺酸，溶解于100ml體積分?jǐn)?shù)為20的鹽酸中，避光保存(4mg/ml)。 N-1萘基乙二胺鹽酸鹽溶液：稱取0.2克N-1萘基乙二胺鹽酸鹽，溶解于100ml的水中，避光保存(2mg/ml) 。 亞硝酸鈉溶液：稱取0.10克于硅膠干燥器中干燥24小時(shí)的亞硝酸鈉，用水溶解至500ml，再轉(zhuǎn)移5 ml溶液至200 ml容量瓶

9、，定容至200ml(5ug/ml),高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,（2） 配制標(biāo)準(zhǔn)液 用移液管吸取0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml、1.50ml亞硝酸鈉溶液，分別置于50ml比色管中，再取1支比色管作為空白對(duì)照。并分別加入2.0ml對(duì)氨基苯磺酸溶液，混勻，靜置35分鐘后，再分別加入1.0ml N-1萘基乙二胺鹽酸鹽溶液，加蒸餾水至50ml，混勻，觀察亞硝酸鈉溶液顏色的剃度變化。,提取劑：分別稱取50克氯化鎘、氯化鋇，溶解于1000ml蒸餾水中，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至1。氫氧化鋁乳液和2.5mol/l的氫氧化鈉溶液。,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝

10、酸鹽含量,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,（3） 制備樣品處理液 將3壇樣品做好標(biāo)記后，分別稱取0.4千克泡菜，榨汁過(guò)濾得200ml汁液。取其中100 ml至500ml容量瓶中，加200ml蒸餾水、 100ml提取劑，混勻，再加入40ml氫氧化鈉溶液，用蒸餾水定容至500ml后，立即過(guò)濾。將60ml濾液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，加入氫氧化鋁（吸附脫色）乳液，定容至100ml，過(guò)濾。,（4）比色 吸取40ml透明澄清的濾液，轉(zhuǎn)移到50ml比色管中，將比色管做好標(biāo)記。按步驟2的方法分別加入對(duì)氨基苯磺酸溶液和N-1萘基乙二胺鹽酸鹽溶液，并定容至50ml，混勻，靜置15,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制

11、作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,分鐘后，觀察樣品顏色的變化，并與標(biāo)準(zhǔn)顯色液比較，找出與標(biāo)準(zhǔn)液最相近的顏色，記錄對(duì)應(yīng)的亞硝酸鈉含量，并計(jì)算。每隔2天測(cè)一次，將結(jié)果記錄下來(lái)。,泡菜腌制過(guò)程中亞硝酸鹽含量的變化,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析和討論選錄,三只泡菜壇中的亞硝酸鹽含量變化的絕對(duì)數(shù)量雖然不同，但整體的變化趨勢(shì)卻基本相同。在腌制后的第五天，三只泡菜壇中亞硝酸鹽的含量都達(dá)到最高峰（1、2、3號(hào)壇中的亞硝酸鹽分別達(dá)到 0.6mg/kg、0.2mg/kg、0.8mg/kg），,高二生物 實(shí)驗(yàn)：制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量,在腌制后的前6天內(nèi)，泡菜中的亞硝酸鹽含量就可以達(dá)到最高峰。而第9天后泡菜中的亞硝酸鹽含量開始有明顯下降。這可能是由于泡菜在開始腌制時(shí)，壇內(nèi)環(huán)境有利于某些細(xì)菌的繁殖