藥敏試驗及藥敏試驗結(jié)果介紹.ppt

1、藥敏試驗及藥敏試驗 結(jié)果分析,一、藥敏試驗,MIC：在與微生物生長速率有關(guān)的特定時間間隔內(nèi)，通常是1824小時，能夠抑制被測菌生長的最低藥物濃度。 對倍稀釋的優(yōu)點： 操作容易 敏感株的MIC呈正態(tài)分布 區(qū)分異常(R)與敏感(S)的菌群,藥敏試驗折點的建立,1. MIC的分布 2. 藥代動力學(xué)和藥效學(xué) 定 MIC的折點 3. 臨床療效和細菌清除率 4. 抑菌圈直徑的分布 定抑菌圈折點 統(tǒng)計學(xué)的線性回歸 計算錯誤率：盡可能減少極重要誤差 (假敏感率),MIC的分布,藥代動力學(xué)和藥效學(xué),藥代動力學(xué)：藥物吸收，分布，代謝，排泄 藥效學(xué)：藥物對機體的作用 時間依賴型（TMIC：內(nèi)酰胺類，大環(huán)內(nèi)酯類 濃度

2、依賴型（AUC/MIC比率：AGS, FQ 這些參數(shù)可用于計算具有最佳藥效的給藥方案,MIC與抑菌圈直徑的線性關(guān)系,耐藥 中介 敏感,R,I,S,Log2. MIC,D 1 d2 抑菌圈直徑（mm),v,抑菌圈直徑與MIC的關(guān)系,不同國家的判定折點可能不同,原因： 用藥劑量不同，服藥的間隔不同 評價敏感時較保守 更強調(diào)檢測出耐藥株（即特定的耐藥群） 技術(shù)因素：接種、培養(yǎng)基,敏感性分類(NCCLS的定義),敏感（Susceptible） 用常規(guī)用量治療有效 常規(guī)用藥時達到的平均血藥濃度超過細菌的MIC 5倍以上。 耐藥（Resistance） 用常規(guī)用量治療不能抑制細菌的生長 MIC高于藥物在血

3、、體液中可能達到的濃度,敏感性分類（2）,中介 (Intermediate) MIC接近血、體液中藥物的濃度，治療反應(yīng)率低于敏感株 藥物生理濃集部位有效 (尿FQ) 加大用藥劑量可能有效 緩沖區(qū)：防止操作的系統(tǒng)誤差造成重大結(jié)果的判定錯誤,藥敏試驗的方法學(xué),半定量紙片擴散法 (抑菌圈直徑) MIC法： 稀釋法(肉湯、瓊脂) 自動化儀法 抗生素連續(xù)梯度法 (Etest ) 流式細胞儀,藥敏試驗方法的選擇,紙片法有獨特之處 選藥靈活、便宜、易懂 MIC法：商品肉湯法 (自動化法) 可用于厭氧菌、苛氧菌 計算機管理 快速，但可能有錯誤（如誘導(dǎo)型菌） 新藥的評價,藥敏試驗方法1（紙片擴散法,材料：浸有一

4、定Abs的干燥的園濾紙片 步驟：制備菌懸液涂平板貼紙片孵育卡尺測量抑菌圈直徑判定R、I、S 優(yōu)點：選藥靈活、便宜、一個平皿可測多個藥 缺點：影響因素多 適用于快生長菌、部分苛養(yǎng)菌,紙片擴散法影響因素,MIC 接種菌量 細菌生長率 抗生素含量、擴散性 平皿厚度 溫度，預(yù)孵育時間,紙片擴散法標準化,NCCLS：美國實驗室標準化委員會(National Committee for Clinical Laboratory Standards) 每年修訂更改 包括質(zhì)控 新藥的判定標準 特殊耐藥性的檢測,NCCLS的法規(guī),規(guī)定紙片含量、接種濃度、培養(yǎng)基、平皿厚度、判定標準、質(zhì)控 規(guī)定常規(guī)測試報告的抗生素

5、不同的藥判定標準不同 不同的菌判定標準也不同,常規(guī)測試并報告的藥物分組(1),腸桿菌科綠膿和非腸桿菌科 一 級 氨芐頭孢他啶 唑林，慶大慶大，替卡，哌拉 二級 阿米卡星阿米卡星 氨芐/舒，阿莫/克吡肟，哌酮，氨曲南 頭孢膚肟，頭霉環(huán)丙，亞胺培南，替卡/克 噻肟，曲松，環(huán)丙妥布，磺胺 亞胺培南，替卡，哌拉 三級 氨曲南，頭孢他啶頭孢曲松 卡那，奈替，妥布氯霉素，奈替 四環(huán)素，氯霉素,常規(guī)測試并報告的藥物分組(2),葡萄球菌腸球菌 一級 苯唑，青霉素青霉素，氨芐 二級 紅霉素類萬古霉素 克林，萬古 三級 氯霉素慶大,常規(guī)測試并報告的藥物分組(3),流感嗜血桿菌肺炎鏈球菌 一級 氨芐，青霉素青霉素，

6、紅霉素 TMP/SMZ TMP/SMZ 二級 頭孢膚肟，噻肟氧氟，四環(huán)素 他啶，氯霉素 萬古霉素 三級 阿奇，頭孢克羅氯霉素，利福平 環(huán)丙，亞胺培南利福平，四環(huán)素,預(yù)報用藥(一),測試藥菌名推測其它藥物的敏感性 苯唑西林葡萄球菌所有內(nèi)酰胺類 四環(huán)素所有（除葡多西環(huán)素，米諾環(huán)素 萄球菌和不 動桿菌 紅霉素G球菌羅紅，克拉，阿奇 克林霉素所有林可霉素,預(yù)報用藥(二),測試藥菌名推測其它藥物的敏感性 氨芐西林腸球菌青霉素 青霉素G葡萄球菌氨芐，美洛，替卡 頭孢噻吩腸桿菌科拉定，頭孢氨芐，克羅 奈啶酸s腸桿菌科所有FQs 萬古霉素s所有替考拉寧s,紙片擴散法操作規(guī)程(一),培養(yǎng)基：MH (重復(fù)性好，低

7、抑制劑，營養(yǎng)好) 厚度：4mm PH：7.27.4 pH低時，氨基糖甙,大環(huán)內(nèi)酯 pH高時，青霉素類的活性 離子濃度 (Ca 2+ , Mg 2+ ) 影響 氨基糖甙類、四環(huán)素對Pae活性 高時，抑菌圈；,紙片擴散法操作規(guī)程(二),接種： 純的新鮮菌落，0.5號麥氏比濁管 菌懸液在15分鐘內(nèi)種入平皿內(nèi) 紙片中心的間距=24mm 孵育：CO2影響Ags, Tet, Macrolides 質(zhì)控: ATCC25922, 35218 ATCC27853, ATCC25923,紙片擴散法結(jié)果的判定,1. 先看菌名（鑒定到種 2. 不同的藥物使用不同的折點 藥名菌名RS菌株1菌株2 Pip/Taz綠膿17

8、1816R30S CAZ綠膿 141816I19S 3. 同是S時，偏離敏感折點越高的藥, MIC越低，活性也越高,抑菌圈的分布,抑菌圈的分布,非NCCLS系統(tǒng)的擴散試驗,方法國家學(xué)會培養(yǎng)基評論 比較法UKBSACIso-Sensitest不校正MICs StokesUKBSACIso-Sensitest不校正MICs SFM法國SFMMH與NCCLS相近 DIN德國DINMH與NCCLS相近 SIR瑞典SMSPDMASMMIC相關(guān)值低 Neo-sensitabs丹麥、比利時MH藥片，易保存 雙歧澳大利亞Sensitest無中介,藥敏試驗的錯誤來源(一),每個系統(tǒng)特有的局限性 （快生長菌 培養(yǎng)

9、基（成分、厚度、pH、離子濃度） 各種材料的正確保存 (紙片20) 操作步驟 純菌、35、1628h 葡萄球菌、腸球菌 24h,藥敏試驗的錯誤來源(二),體內(nèi)、體外試驗的不一致性 某些菌測某些藥，結(jié)果有誤 頭孢菌素、氨基糖甙類：沙門菌、志賀菌 頭孢菌素：李斯特菌屬 頭孢菌素、氨基糖、克林、TMP/SMZ：腸球菌 Beta內(nèi)酰胺類：MRS 即使敏感，也應(yīng)報告耐藥,問題菌和耐藥機制,有些菌無標準化的藥敏試驗 棒桿菌、芽胞桿菌、氣單胞菌、巴斯德菌 某些耐藥機制需要多種檢測方法 誘導(dǎo)型：VanB, Bush I型酶 MRS的異質(zhì)型表達 ESBL 藥敏可能無法檢出新出現(xiàn)的耐藥，VISA,藥敏試驗方法2肉

10、湯稀釋法,4 816 32 64 128 256 ug/ml,混,混 清,抗生素倍比稀釋，種菌105CFU/ml ， 孵育35， 16-20h，判讀,藥敏試驗方法2肉湯稀釋法,調(diào)節(jié)離子濃度的MH肉湯 宏量肉湯法（2ml, 13x100mm ） 微量肉湯法 （ 0.1ml, 微量板） 自動化儀 優(yōu)點：準確，可靠，可用于研究 缺點： 勞動強度大 細菌生長情況不可查,藥敏試驗方法3瓊脂稀釋法,濃度 16 32 64 128 256 ug/ml,制備含對倍抗生素濃度梯度的平板，制備菌懸液， 點種菌，104/每個點，孵育，判讀結(jié)果,藥敏試驗方法3瓊脂稀釋法,優(yōu)點：金標準 精確可靠 可同時測定多株菌（40

11、株） 細菌生長情況可查 缺點： 測多個藥時勞動強度大 制備平皿費時費力,藥敏試驗方法4E test 法,細菌生長區(qū),E test 塑料 條,橢圓形 細菌生長 抑制區(qū),256 128 8 016,判讀抑菌濃度 （MIC ug/ml),藥敏試驗方法4E test 法,優(yōu)點 連續(xù)濃度梯度，與瓊脂稀釋法相關(guān)性好 影響因素少，穩(wěn)定性高 操作簡單，省時 缺點：昂貴 用途：快生長菌，苛養(yǎng)菌，厭氧菌，酵母菌， 分枝桿菌,評價藥物體外抗菌活性的指標,MIC50, MIC90, MIC 均值， MIC 范圍，R，I，S MIC50/ MIC90：MIC從小到排列，位于第50 / 90百分位菌株的MIC值 單純比較

12、MIC50，MIC90是片面的，還要同時看平均MIC及MIC范圍 同時結(jié)合R，I，S，（不同藥物血濃度不同，安全范圍不同,抗生素,細 菌,人 體,RESISTANCE,PHARMACODYNAMICS,INFECTION,IMMUNITY,SIDE EFFECTS,PHARMACOKINETICS,抗生素、細菌、人體,Slide no,40,Time above MICCorrelation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility)of an organism,Time above MIC,Time,Antibiotic conce

13、ntration (ug/ml),2,Drug A,Drug B,A,B,Drug A present at concentration of 2 ug/ml for 50% of dosing interval Drug B present at concentration of 2 ug/ml for 30% of dosing interval,4,6,8,0,Relationship between Time above MIC and efficacy in animal infection models,0,20,40,60,80,100,0,20,40,60,80,100,Tim

14、e above MIC (%),Penicillins,Cephalosporins,Mortality after 4 days of therapy (%),Craig. Diagn Microbiol Infect Dis 1996; 25:213217,Slide no,42,Antibiotic concentration,MIC,Time,Area under the curve over MIC,24-hr AUC/MIC is correlated with outcome of infection, the magnitude required for success and

15、 MIC at which this occurs becomes the PD breakpoint,24-hr AUC/MICCorrelation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility)of an organism,Slide no,43,The relationship between time above MIC90and bacteriological cure in S. pneumoniae (red) andH. influenzae (blue) in otitis media and sinusitis,Ot

16、itis media Sinusitis,Time Above MIC (% of dosing interval),Bacteriological cure (%),0,20,40,60,80,100,0,20,40,60,80,100,Craig, ECCMID 2000, Stockholm, Sweden,抗生素選擇時需考慮的因素,藥物,感染部位濃度,對細菌MIC,結(jié)果,微生物學(xué) 抗菌機制 抗菌譜,藥代動力學(xué) 吸收、分布、代謝、排泄 給藥方案,藥效學(xué) 時間/濃度依賴型 殺菌劑/抑菌劑 組織滲透 抗菌時效,臨床效果 細菌清除 患者依從性 耐受性 耐藥產(chǎn)生,抗生素治療失敗的主要原因,抗生素

17、藥效學(xué)與藥代動力學(xué)關(guān)系研究,PK/PD藥代條件下的藥效 PARAMETERS：PK：Cmax、AUC、T1/2 PD：MIC PK/PD：AUC/MIC Cmax/MIC TMIC,抗生素藥效學(xué)與藥代動力學(xué)關(guān)系研究,抗生素PK/PD分類,抗生素藥效學(xué)與藥代動力學(xué)關(guān)系研究,PK/PD研究的應(yīng)用 給藥方案的制定與優(yōu)化,抗菌藥物合理應(yīng)用的藥理學(xué)考慮,藥動學(xué)/藥效學(xué)參數(shù)與抗菌效力（動物模型）,參數(shù) 藥物 高于MIC時間青、頭孢、碳青烯、氨曲、大 環(huán)、克林 24h AUC/MIC氨基糖苷、氟喹酮、阿奇 峰值/MIC 四環(huán)、萬古、鏈陽 氨基糖苷、氟喹酮,第一大類： 時間依賴殺菌作用 （持續(xù)后效應(yīng)-無或輕、中度） -L Abx（P、Cef、氨曲、碳烯類），克林和大環(huán)（紅、克）、四環(huán) 在MIC4-5倍時殺菌率即處于飽合 殺菌范圍主要依賴于接觸時間 超過MIC時間是與臨床療效相關(guān)的主要參數(shù),氨基糖苷類屬于濃度依賴性抗生素 體內(nèi)外研究證明Cmax/MIC為10左右為最佳治療參數(shù) 對革蘭陽性、陰性菌均具有PAE（0.757.5hr）。,第二大類:氨基糖苷類一日一次給藥,低濃度易誘導(dǎo)適應(yīng)性耐藥 高濃度不易選擇耐藥 高劑量少次數(shù)給藥