小吞噬細(xì)胞的吞噬功能檢測(cè).ppt

1、吞噬細(xì)胞的吞噬作用,新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握吞噬作用的原理和方法 掌握顯微鏡油鏡的使用方法 掌握瑞氏染色的方法,實(shí)驗(yàn)原理,血液中的多形核白細(xì)胞是一種小吞噬細(xì)胞，其細(xì)胞漿內(nèi)含有多種酶類，對(duì)侵入體內(nèi)的細(xì)菌具有強(qiáng)大的吞噬和消化功能，是機(jī)體非特異性免疫的重要組成部分。 意義：在某些情況下，小吞噬細(xì)胞也參與某些超敏反應(yīng)和自身免疫疾病的組織損傷和炎癥過程，因此，測(cè)定小吞噬細(xì)胞的功能可在一定程度上反映機(jī)體的免疫狀態(tài)，也可作為判定療效的一種指標(biāo)。,大吞噬細(xì)胞（單核巨噬細(xì)胞） 小吞噬細(xì)胞（中性粒細(xì)胞）,吞噬細(xì)胞 分類,大吞噬細(xì)胞,來源： 單核巨噬細(xì)胞 存在部位： 血液（單核細(xì)胞) 全身結(jié)締組織及小

2、血管的基底 膜組織（巨噬細(xì)胞） 功能基礎(chǔ)：富含溶酶體及線粒體 功能： 吞噬病原微生物（寄生蟲等），死亡細(xì)胞。 反應(yīng)時(shí)間及壽命：反應(yīng)時(shí)間長（48h），壽命長。,小吞噬細(xì)胞,來 源： 中性粒細(xì)胞 存在部位： 血液 、 炎癥部位（全身） 功能基礎(chǔ)：溶酶體，過氧化物酶及殺菌物質(zhì)。 功 能：主要吞噬化膿菌 反應(yīng)時(shí)間及壽命：反應(yīng)時(shí)間快,數(shù)分鐘到幾小時(shí)，壽命短.平均數(shù)小時(shí),吞噬示意圖,吞噬過程,實(shí)驗(yàn)材料,無菌肉湯 白葡菌液 注射器 瑞氏染液 PBS緩沖液 解剖器材 玻片、顯微鏡等,實(shí)驗(yàn)方法,1.誘導(dǎo)：實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)給小白鼠腹腔注射無菌肉湯2ml，誘導(dǎo)漿液滲出 2. 注射：給小白鼠腹腔內(nèi)注射白葡菌液1ml，讓小

3、鼠活動(dòng) 3. 取樣： 注射后35 分鐘處死小白鼠，抽取腹腔液涂片 4.染色：標(biāo)本干燥后瑞氏染液染色,瑞氏染色,5.瑞氏染色：滴加34滴瑞氏染液于標(biāo)本上，以完全蓋住標(biāo)本為宜。 30秒后滴兩倍體積的緩沖液，吹吸均勻。 3分鐘后甩去玻片上的染液，吸水紙吸干。 油鏡鏡檢,油鏡下見中性粒細(xì)胞胞漿呈淡蘭色，核分葉、紫紅深染，白葡菌呈蘭色?？梢娭行粤＜?xì)胞胞漿內(nèi)吞噬有很多白葡菌。,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,注射菌液時(shí)不要注射到皮下或腹腔臟器內(nèi)，注射后輕揉腹部，使液體在腹腔內(nèi)分散均勻 注意掌握好染色時(shí)間,注意事項(xiàng),巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞,大吞噬（示教片）,顯微鏡油鏡的使用,油鏡頭的識(shí)別,油鏡頭上常刻有白色環(huán)圈，或標(biāo)有“油”字、

4、“oil”、100/1.30 等。 使用油鏡可放大1000倍,原理,使用油鏡觀察時(shí)，需加香柏油，因?yàn)橛顽R需要進(jìn)入鏡頭的光線多，但油鏡的透光孔最小，這樣進(jìn)入的光線就少，物體不易看清楚。同時(shí)又因自玻片透過的光線，由于介質(zhì)（玻片空氣接物鏡）密度（玻片：n=1.52，空氣：n=1.0）不同而發(fā)生了折射散光，因此射入鏡頭的光線就更少，物體更看不清楚。,原理,采用一種和玻片折光率相接近的介質(zhì)如香柏油，加于標(biāo)本與玻片之間，使光線不通過空氣，這樣射入鏡頭的光線就較多，物象就可看得清楚。,原理,使用方法,先用低倍鏡找到視野 a將光線調(diào)至最強(qiáng)程度（聚光器提高，光圈全部開放）。 b轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使載物臺(tái)下降，滴香柏油1小滴（不要過多，不要涂開）于接物鏡正下方標(biāo)本上。 c轉(zhuǎn)動(dòng)接物鏡轉(zhuǎn)換盤，使油鏡頭于鏡筒下方。 d俯身鏡旁側(cè)面在肉眼的觀察下，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使油鏡頭徐徐浸入香柏油內(nèi)，輕輕接觸玻片為止。 e慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使載物臺(tái)徐徐下降至見到標(biāo)本的物象為止。 f轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)節(jié)器，使視野物象達(dá)到最清晰的程度。 g左手徐徐移動(dòng)推進(jìn)器，并轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)節(jié)器以觀察標(biāo)本。 h標(biāo)本觀察完畢后，