《化學(xué)分析方法驗(yàn)證》PPT課件.ppt

1、化學(xué)分析方法驗(yàn)證,化學(xué)分許方法驗(yàn)證成功的前提,能夠研究建立一個(gè)有水準(zhǔn)的分析方法的能力 有化學(xué)分析方法驗(yàn)證的知識(shí)和水平,化學(xué)分許方法驗(yàn)證成功的前提,有水平，經(jīng)過培訓(xùn)的實(shí)施人員 儀器性能已經(jīng)得到確認(rèn)（校準(zhǔn)，驗(yàn)證，校準(zhǔn)在有效期內(nèi)） 可靠的對(duì)照品（法定機(jī)構(gòu)提供的或有水平自己建立的） 質(zhì)量可靠的實(shí)驗(yàn)試劑,存在問題,主要表現(xiàn)在： 方法設(shè)計(jì)不科學(xué) 方法沒有充分的研究，優(yōu)化 驗(yàn)證的目的性不明確，驗(yàn)證不充分 實(shí)驗(yàn)過程不規(guī)范，驗(yàn)證通不過的處理方法錯(cuò)誤 驗(yàn)證數(shù)據(jù)不合理 忽視方法在驗(yàn)證,什么時(shí)候分析方法需驗(yàn)證,符合下列情形之一的，應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證： 1.建立或采用新的檢驗(yàn)方法 2.分析對(duì)象或檢驗(yàn)方法變更了 3.采

2、用中國(guó)藥典未收載的檢驗(yàn)方法 4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法,什么時(shí)候分析方法需驗(yàn)證（續(xù)）,對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的的檢驗(yàn)方法，應(yīng)進(jìn)行方法確認(rèn)，以保證檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。 2005版藥典中分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則（附錄XIX A）只規(guī)定了項(xiàng)目和基本方法而沒有合格標(biāo)準(zhǔn)，ICH和USP類似。,方法學(xué)驗(yàn)證,對(duì)分析方法的科學(xué)性，準(zhǔn)確性和可行性進(jìn)行驗(yàn) 證，充分表明分析方法符合測(cè)試項(xiàng)目的目的和求。,方法驗(yàn)證的目的,目的是判斷采用的分析方法是否科學(xué)，合 理，是否有效控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。,需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目,1.鑒別 目的在與判定被分析物是目標(biāo)化合物而非其他物質(zhì)。 共存，相似的化合物要分開。要考察其他成分和輔料的干擾

3、，空白試驗(yàn)一定要成陰性。,需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目,2.雜質(zhì)檢查 主要用于控制住成分以外的雜質(zhì)，如有機(jī)雜 質(zhì)，無(wú)機(jī)雜質(zhì)。 限度檢查 定量檢查,需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目,限度檢查 各種無(wú)機(jī)離子檢查等 定量檢查 定量測(cè)定： 干燥失重，水分，有關(guān)物質(zhì)， 殘留溶劑及其他特定檢測(cè)項(xiàng)目 等。,需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目,3.含量測(cè)定 除主成分外，也包括檢查項(xiàng)下的防腐劑，溶 出度等的含量測(cè)定等。,驗(yàn)證內(nèi)容,準(zhǔn)確度 精密度（重復(fù)性，中檢精密度和重現(xiàn)性） 專屬性 檢測(cè)線（LOD） 定量限（LOQ） 線性 范圍 耐用性,準(zhǔn)確度,定量方法 測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用回收 率%表示。 原料藥 已知純度的對(duì)照品或供試品 已知

4、準(zhǔn)確度的另一種方法比較 制劑 配置回收試驗(yàn)法 加樣回收試驗(yàn)法 已知準(zhǔn)確度的另一方法比較 雜質(zhì),準(zhǔn)確度,對(duì)于中藥 a. 以經(jīng)典方法的測(cè)定值作為真值，建立方法的 測(cè)定數(shù)據(jù)與之比較（該法適用于化學(xué)單體藥物） b. 以加入對(duì)照品測(cè)定的回收率表示，一般有空 白回收（制劑空白）和加樣回收的測(cè)定方法（中藥 材，復(fù)方制劑等）,準(zhǔn)確度,回收試驗(yàn)：測(cè)定值（M），空白，已知量A 的對(duì)照品測(cè)定 回收率：R= 100% 加樣回收試驗(yàn)：測(cè)定值（M），背景值（P） ，已知量的加入的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）的值（A） 回收率：R= 100% （M,P為均值）,M-空白,A,M-P,A,準(zhǔn)確度,試驗(yàn)方法：規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用九次測(cè)定

5、結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備高，中，低三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。,準(zhǔn)確度,試驗(yàn)方法（中藥） 同一樣品，制備相同濃度的6份供試品（樣品取樣量減半，以1：1比例加入對(duì)照品） 同一樣品，制備三個(gè)濃度的供試品，每個(gè)濃度分別制備三份供試液，對(duì)照品的加入方式有三種方式。,對(duì)照品的加入方式,取相同量樣品9份（一般為樣品取樣量的一半），設(shè)計(jì)三個(gè)濃度，按不同比例加入對(duì)照品。中間濃度一般按1；1比例加入，低，高濃度可選0.5：1，1.5：1的比例，加入對(duì)照品的量要適當(dāng)，保證供試品溶液的濃度（或量）在考察的線性范圍內(nèi)。 取3種不同量的樣品個(gè)三份，每個(gè)取樣量分別按1：1比例加入對(duì)照品，中間濃度已選定正常濃度，其他兩個(gè)濃度可以結(jié)合

6、范圍測(cè)定項(xiàng)目選擇低，高濃度。 按表示量計(jì)算得組分，可參訂化學(xué)藥品測(cè)定方法，取9份樣品，按0.8：1，1：1，1：1.2的比例加入對(duì)照品（樣品取樣量減半）,精密度,精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d），標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD），相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）（變異系數(shù)CV）表示。 偏差（d） d=xi-x 測(cè)量值與平均值之差 標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD） SD 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD） RSD=,精密度,重復(fù)性：在相同條件下，有同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度 在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備 不同濃度樣品各測(cè)三次 把被測(cè)濃度當(dāng)做100%，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)

7、價(jià) 中間精密度：同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間有不同的分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度（三人三機(jī)） 重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。以SD，RSD表示。,專屬性,專屬性只有其他成分（雜質(zhì)，降解物，輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試液準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)是否受相互干擾程度的度量。,專屬性,通常是通過分析含有加了雜質(zhì)，降解產(chǎn)物，有關(guān)化學(xué)物質(zhì)或安慰劑成分的樣品，將所獲的分析結(jié)果與未加前述成分之樣品的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行比較，兩組測(cè)試結(jié)果只差即為專屬性。,專屬性,鑒別反應(yīng) 應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)別 不含

8、被分析的樣品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng),專屬性,含量測(cè)定和雜志測(cè)定 色譜法和其他方法：附帶表性圖譜說(shuō)明專屬性 表明各組分的位置，分離度是否符合要求 雜質(zhì)或輔料可獲得的情況下，試樣中可加入雜志或輔料，考察測(cè)試結(jié)果是否受干擾 對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定也可相試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)間是否得到分離 色譜峰純度試驗(yàn)（二極管陣列，其他檢測(cè)器，質(zhì)譜）,專屬性,破壞性試驗(yàn) 高溫，高濕，光照，酸破壞，堿破壞，氧化破壞 注意觀察降解產(chǎn)物生成情況，分離度是否符合要求 注意掌握破壞條件，應(yīng)使主成分峰保留大約90%,檢測(cè)限,在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或含量 目視法（直觀評(píng)價(jià)，非儀器分

9、析） 可用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法，用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠的檢測(cè)出的最低濃度或量 信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠的檢測(cè)出的最低濃度或量，一般以信噪比3：1或2：1時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè) 標(biāo)準(zhǔn)差法,定量限,被測(cè)定物質(zhì)能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果仍具有一定準(zhǔn)確度和精密度的要求。 目測(cè)法（直觀評(píng)價(jià)，非儀器分析） 用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠的檢測(cè)出符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低濃度或量 信噪比法 一般以信噪比（S/N）為10：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。,檢測(cè)

10、線和定量限試驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意,A： 應(yīng)以實(shí)驗(yàn)中得到的濃度分析，而不能靠推算。 B:應(yīng)以定量濃度限為依據(jù)確定對(duì)照溶液濃度（一般擴(kuò)大2050倍）,線性,線性是指再設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比例關(guān)系的程度。 線性應(yīng)在分析需要的范圍內(nèi)進(jìn)行評(píng)價(jià) 一般以最小二乘法處理數(shù)據(jù)求的回歸曲線的斜率來(lái)表示，必要時(shí)可對(duì)響應(yīng)信號(hào)進(jìn)行數(shù)字轉(zhuǎn)換。 數(shù)據(jù)要求：至少需要五個(gè)濃度考察線性，需提供相關(guān)系數(shù)，Y截距，應(yīng)列出回歸方程數(shù)和線性圖。,范圍,范圍是指達(dá)到一定精密度，準(zhǔn)確度和線性條件下，測(cè)試方法是用的高，低限量濃度或量的區(qū)間。 范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性，準(zhǔn)確度，精密度結(jié)果和要求確定。 原料藥和制劑含量測(cè)

11、定范圍為80%-120% 制劑含量均勻度范圍為70%-130% 雜質(zhì)測(cè)定應(yīng)為被測(cè)雜質(zhì)限度的-20%到+20% 溶出度應(yīng)為測(cè)定范圍的-20%到+20%，釋放度因規(guī)定了限度范圍，應(yīng)為下限的-20%到上線的+20%，例如緩釋片1h70%，則驗(yàn)證范圍定為0-90%,耐用性,耐用性又稱粗放度，是指測(cè)試條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度。失衡連試驗(yàn)室和工作人員之間的正常情況下試驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度，如方法易受分析條件的影響，或要求苛刻，應(yīng)注明 典型的變動(dòng)包括： 1.分析溶液的穩(wěn)定性 用不同時(shí)間段的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品溶液與新制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液的對(duì)比結(jié)果來(lái)分析溶液的穩(wěn)定性 2.提取方法，溶劑，次數(shù)，時(shí)間等,耐用性,3

12、.液相色譜的典型變動(dòng)： 流動(dòng)相PH（-0.5+0.5） 流動(dòng)相組成（有機(jī)相-0.5至+0.5） 色譜柱(同一廠家三個(gè)批號(hào)，或兩個(gè)不同廠家（同固定相和填充物，尺寸）) 溫度（20-25攝氏度）和流速（-10%至+10%） 檢測(cè)波長(zhǎng)（-5nm至+5nm） 4.氣象色譜的典型變動(dòng)： 色譜住(同一廠家三個(gè)批號(hào)，或兩個(gè)不同廠家（同固定相和填充物，尺寸）) 溫度 流速,耐用性,如果測(cè)試條件要求苛刻，則建議在方法中予以寫明。,檢測(cè)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容總結(jié),分析方法驗(yàn)證注意要點(diǎn),空白樣 空白樣是指根據(jù)樣品的特性，配方和工藝過程，制備除了不含被測(cè)物外其他組成與樣品完全一致的模擬樣品 預(yù)驗(yàn)證 預(yù)驗(yàn)證是指在正式驗(yàn)證前進(jìn)行

13、的試驗(yàn)，目的是收集證據(jù)，已初步證實(shí)該檢驗(yàn)方法可達(dá)到預(yù)期要求，同時(shí)確定各個(gè)項(xiàng)目單位可接受標(biāo)準(zhǔn)。,含量測(cè)定方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn),準(zhǔn)確度 各濃度下的平均回收率應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。 中藥一般應(yīng)滿足以下規(guī)定：回收率計(jì)算值在95%-105%范圍，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）薄層掃描法5% 精密度 1.重復(fù)性：6份供試液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0% 2.中間精密度：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%,含量測(cè)定方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn),專屬性 空白對(duì)照應(yīng)無(wú)干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0 檢測(cè)限 定量限,含量測(cè)定方法驗(yàn)證的可接受

14、標(biāo)準(zhǔn),線性 回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。 耐用性 主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰的雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離，各條件下的含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%,分析方法的確認(rèn),方法確認(rèn)是一種簡(jiǎn)化了的方法驗(yàn)證，目的是為了確認(rèn)藥典方法或其它已經(jīng)驗(yàn)證的方法是否適用于實(shí)際使用的環(huán)境。 各國(guó)藥典和行業(yè)法規(guī)收載的檢驗(yàn)方法 從外部引入的已經(jīng)檢驗(yàn)的檢驗(yàn)方法 以往老產(chǎn)品的檢驗(yàn)方法，原廠無(wú)力或無(wú)法進(jìn)行方法傳遞。 方法確認(rèn)一般應(yīng)進(jìn)行準(zhǔn)確度，重復(fù)性，專屬性測(cè)試。,分析方法傳遞,分析方法傳遞（轉(zhuǎn)移）是指一方將已經(jīng)驗(yàn)證的方法傳送（轉(zhuǎn)移）給另一方的過程。 方法傳遞主要進(jìn)行在不同的實(shí)驗(yàn)室在一定時(shí)限內(nèi)對(duì)同一份樣品的重現(xiàn)性測(cè)試的結(jié)果比對(duì)。,系統(tǒng)適用性試驗(yàn),對(duì)一些儀器的測(cè)試方法，在進(jìn)行方法驗(yàn)證時(shí)，有必要將分析設(shè)備，電子儀器與實(shí)驗(yàn)操作，被測(cè)試樣品等一起當(dāng)做完整的系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估。系統(tǒng)適用性便是對(duì)整個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估的指標(biāo)。 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)參數(shù)的設(shè)置需根據(jù)被驗(yàn)證方法類型而定。,系統(tǒng)適用性試驗(yàn),含量測(cè)定方法可接受的標(biāo)準(zhǔn) 主峰的峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，主峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。