現(xiàn)代生物技術(shù)復(fù)習(xí)題-楊曉達(dá)部分.doc

楊曉達(dá)部分一 緒論、凍干技術(shù)和酶法合成1. 什么是生物技術(shù)和生物技術(shù)藥物？生物技術(shù)：（楊版）指利用微生物（如細(xì)菌和酵母等）或者生物產(chǎn)物（如酶等），來完成獨特的工業(yè)和制造業(yè)的過程。應(yīng)用于生產(chǎn)特殊藥物、合成激素、或者大量糧食，也包括有機(jī)廢物的轉(zhuǎn)化等。 （曾版&教材版）生物技術(shù)是應(yīng)用自然科學(xué)及工程學(xué)原理，依靠微生物、動物、植物體作為反應(yīng)器，將物料進(jìn)行加工以提供產(chǎn)品來為社會服務(wù)的技術(shù)，他是微生物學(xué)、生物化學(xué)和化學(xué)工程等多學(xué)科密切相關(guān)的交叉學(xué)科生物技術(shù)藥物：系指應(yīng)用基因工程、細(xì)胞工程、蛋白質(zhì)工程等生物技術(shù)獲得微生物、細(xì)胞及各種動物和人源的組織和液體等生物材料，制備用于人類疾病的預(yù)防、治療和診斷的藥物。2. 生物技術(shù)的核心和關(guān)鍵技術(shù)是什么？生物技術(shù)的核心是生物轉(zhuǎn)化關(guān)鍵技術(shù)包括生物轉(zhuǎn)化技術(shù)、基因工程技術(shù)、工業(yè)生物反應(yīng)器技術(shù)、冷凍干燥技術(shù)等。（楊課件上標(biāo)key字樣的）3. 什么是合成生物學(xué)？未來的影響有哪些？基于系統(tǒng)生物學(xué)的遺傳工程，從基因片段、人工堿基DNA分子、基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)與信號傳導(dǎo)路徑到細(xì)胞的人工設(shè)計與合成，將工程學(xué)原理與方法應(yīng)用于遺傳工程與細(xì)胞工程等生物技術(shù)領(lǐng)域通過聯(lián)合不同的成分部分創(chuàng)造新功能、通過工程學(xué)提高對于現(xiàn)有生物系統(tǒng)的認(rèn)識，在未來50年內(nèi)引發(fā)第三次工業(yè)革命4. 青蒿素的前體藥物的生物制備過程如何？5. 基于細(xì)胞的生物制備的基本流程如何？6. 基于生物酶的生物制備的基本流程如何？7. 什么是代謝工程改造？通過影響酶的活性、運輸性質(zhì)和常規(guī)功能干預(yù)細(xì)胞代謝活動8. 基因工程在生物技術(shù)中的作用有哪些？提高產(chǎn)量和生產(chǎn)率、生產(chǎn)新化合物、擴(kuò)大酶的底物范圍、發(fā)展可以替代傳統(tǒng)化學(xué)方法的新的生物合成途徑改良細(xì)胞性能9. 工業(yè)生物制備和實驗室條件的差別是什么？實驗室：小型反應(yīng)器，旋轉(zhuǎn)器和搖瓶工業(yè)生物制備：工業(yè)生物反應(yīng)器，大容量，更高的培養(yǎng)基多相性，更大的湍流強(qiáng)度和局部切變應(yīng)力（往屆復(fù)習(xí)資料里說）通過更長的混合時間所引起的培養(yǎng)媒介的多相性，來使微生物和細(xì)胞的局部環(huán)境變化達(dá)到一個更寬的范圍。此外，通過增加反應(yīng)器的規(guī)模，湍流強(qiáng)度和局部切變應(yīng)力也會被加強(qiáng)。這種局部等級的強(qiáng)烈變動會引起對微生物和細(xì)胞的應(yīng)激10. 什么是冷凍干燥，其過程是什么？為什么是是生物技術(shù)產(chǎn)品制備的基本關(guān)鍵技術(shù)？冷凍干燥技術(shù)是把含有大量水分的物料預(yù)先進(jìn)行降溫，凍結(jié)成固體，在真空條件下，使冰直接升華，以水蒸汽的形式除去，從而得到干燥品德一種技術(shù)。可以避免常規(guī)干燥過程中熱不穩(wěn)定的生物制品在高溫條件下變質(zhì)。凍干箱空箱降溫-40-50，放入產(chǎn)品預(yù)凍。油泵抽真空。第一步加熱，溫度不超過共熔點，使冰大量升華。第二步加熱，以提高干燥程度，一般溫度控制在40以下1冷凍至固體2抽真空3升溫，大劑量水升華除去4升溫，進(jìn)一步升華，結(jié)合水、吸附水除去（可能會畫圖分析）11. 生物制備對酶特性的要求有哪些？高效性、專一性、更穩(wěn)定、耐熱，抗抑制、抗蛋白酶水解、抗原性減少或消除。（所謂專一性）有一定的區(qū)域和立體選擇性，但對底物的要求不要太高，選擇性不要太強(qiáng)，能夠催化不同的底物。12. 舉例說明酶法合成手性氨基酸（舉例）？13. 為什么需要酶固定化，有哪些方法？原因：（往屆資料說）提高效率、提高穩(wěn)定性、易于分離、可重復(fù)使用（貌似是課堂筆記說）酶穩(wěn)定性差，易變性失活；酶和底物只能反應(yīng)一次，難于回收利用，成本高且難于連續(xù)化生產(chǎn)；反應(yīng)液中混入酶蛋白，使產(chǎn)品的分離純化復(fù)雜化 固定方法：（教材版）載體結(jié)合法：a物理吸附法：是以固體表面物理吸附為依據(jù)，使酶與水不溶性載體相接觸而達(dá)到酶吸附的目的b離子吸附法：通過離子效應(yīng)，將酶分子固定到含有離子交換基團(tuán)的固相載體上c螯合法：利用螯合作用將酶直接螯合到表面含過渡金屬化合物的載體上，具有較高的操作穩(wěn)定性d共價結(jié)合法：通過酶分子上的官能團(tuán)，與載體表面上的反應(yīng)基團(tuán)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)形成共價鍵的固定方法 共價交聯(lián)法：通過雙功能或多功能試劑在酶分子間或酶分子和載體間形成共價鍵的連接方法 包埋法：將酶包埋在高聚物凝膠網(wǎng)格中或高分子半透膜中的固定方法。前者又稱凝膠包埋法，后者則稱微囊法二 免疫分析法14. 什么是抗體？其結(jié)構(gòu)特征是什么？怎么由基因編碼一個抗體？抗體：機(jī)體在抗原物質(zhì)刺激下，由B細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白兩條重鏈兩條輕鏈，兩個Fab段一個Fc段，VL、CL，VH、CH段2個基因決定一個蛋白質(zhì)15. 什么是抗原決定簇？一個抗原分子是否只有一個抗原決定簇？決定抗原性的特殊化學(xué)基團(tuán)一個抗原分子上可能有數(shù)個抗原決定簇每個抗原決定簇至少誘生一種專一性抗體 蛋白質(zhì)抗原的決定簇含有六個以上氨基酸 16. 抗體與抗原結(jié)合的特異性如何？為何有如此高的特異性？與抗原的結(jié)合力強(qiáng)，高度專一性17. 抗體有哪些應(yīng)用？18. 什么是抗體的Fab片段和Fc片段？其結(jié)構(gòu)分別是如何？19. 什么是單抗和多抗？分別是如何制備的？哪一種抗體的特異性高？為什么？多克隆抗體（polyclonal antibody）指由不同B細(xì)胞產(chǎn)生的針對多種抗原決定簇的多種抗體混合物，如免疫血清。制備：抗原做成乳劑，注入實驗動物體內(nèi)，多次免疫后，得到傳統(tǒng)的抗血清單克隆抗體（ monoclonal antibody）指由一種 B 細(xì)胞生產(chǎn)，針對某一抗原決定簇的單一抗體。制備：抗原注入實驗動物體內(nèi)，形成雜交瘤細(xì)胞，用ELISA方法分離鑒定合適的雜交瘤細(xì)胞，培養(yǎng)該細(xì)胞得到抗體20. 什么是抗體庫？抗體庫技術(shù)是將某種動物的所有抗體可變區(qū)基因克隆在質(zhì)?；蚴删w中表達(dá)，利用不同的抗原篩選出攜帶特異抗體基因的克隆，從而獲得相應(yīng)的特異性抗體。21. 什么是單鏈抗體？什么是ScFv？如何制備單鏈抗體？單鏈抗體有何應(yīng)用？在重鏈與輕鏈之間加上一段連接肽，連成一條單鏈如果僅是兩條鏈的可變區(qū)，稱為ScFv 22. 什么是二抗？二抗與一抗如何結(jié)合的？如何選擇使用二抗？ 二抗的Fab段VL部位結(jié)合于一抗的Fc段23. 什么是Protein A？Protein A結(jié)合于抗體的什么部位？Fc段24. 什么是免疫分析？有哪些特點免疫分析：利用抗原與抗體之間高特異性反應(yīng)實現(xiàn)對抗體、抗原或相關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測的分析方法。高靈敏，高特異性，高準(zhǔn)確性25. 有哪些主要類型的免疫分析？根據(jù)標(biāo)記物的不同，可分為：放射免疫分析法（RIA）、熒光免疫分析法（FIA）、酶免疫分析法（EIA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）重要方法：FIA、RIA、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、免疫染色法、免疫印跡法（Western blot）等26. 免疫分析有幾種實驗設(shè)計方式？a用標(biāo)記抗體與待測抗原結(jié)合，再加捕獲抗體（二抗），檢測復(fù)合物濃度（ELISA雙夾心法）b用標(biāo)記抗體與待測抗原結(jié)合，再加捕獲抗原與剩余抗體結(jié)合，檢測捕獲抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物濃度c加入抗體與標(biāo)記抗原，通過標(biāo)記抗原與待測抗原的競爭結(jié)果，推斷待測抗原濃度（RIA法）27. 抗體標(biāo)記有哪些種類和方法？放射性同位素標(biāo)記、熒光標(biāo)記（有機(jī)分子熒光標(biāo)記，綠色熒光蛋白標(biāo)記，稀土熒光標(biāo)記）、酶標(biāo)記、通用標(biāo)記28. 什么是RIA，其分析方法的原理和要點有哪些？放射免疫分析是以放射性同位素為示蹤物，與免疫反應(yīng)相結(jié)合的一種分析方法。其基本原理是利用待測抗原和標(biāo)記抗原同特異性抗體之間存在著競爭性的結(jié)合，通過對竟?fàn)幒笫Ｓ鄻?biāo)記抗原及標(biāo)記抗原-抗體復(fù)合物的測定推斷待測抗原要點：1制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：恒量的Ag*（標(biāo)記抗原）、Ab加入反應(yīng)管中，加入待測抗原標(biāo)準(zhǔn)品（已知濃度），37或4溫育，加入分離劑分離結(jié)合抗原抗體復(fù)合物及游離抗原，測定以總放射性為分母，測定Ag*Ab為分子，計算結(jié)合%，以結(jié)合率為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 2待測抗原用同上發(fā)法測定結(jié)合率，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線求濃度29. 什么是ELISA？其分析原理和要點是什么？Enzyme Linked Immunosorbent Assay酶聯(lián)免疫吸附法使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達(dá)到很高敏感度。常見方法用途及主要步驟：（一） 雙抗體夾心法 雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。（2）加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。（3）加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。（4）加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。根據(jù)同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物，即可用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中的抗體。（二） 雙位點一步法 在雙抗體夾心法測定抗原時，如應(yīng)用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測定時可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步（圖15-5）。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應(yīng)時間，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測定抗原的ELISA提高到新水平。 在一步法測定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)（hookeffect），類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測抗原濃度相當(dāng)高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。30. 什么是熒光偏振免疫分析？原理是什么？ 熒光偏振免疫分析法(fluorescence polarization immunoassay，F(xiàn)PIA)是一種定量免疫分析技術(shù)，其基本原理是熒光物質(zhì)經(jīng)單一平面的藍(lán)偏振光(485nm)照射后，吸收光能躍入激發(fā)態(tài)，隨后回復(fù)至基態(tài)，并發(fā)出單一平面的偏振熒光(525nm)。偏振熒光的強(qiáng)弱程度與熒光分子的大小呈正相關(guān)，與其受激發(fā)時轉(zhuǎn)動的速度呈反相關(guān)。FPIA最適宜檢測小至中等分子物質(zhì)，常用于藥物、激素的測定。 熒光偏振免疫分析常用于測定半抗原的藥物濃度。反應(yīng)系統(tǒng)內(nèi)除待測抗原外，同時加入一定量用熒光素標(biāo)記的小分子抗原，使二者與有限量的特異性大分子抗體競爭結(jié)合。當(dāng)待測抗原濃度高時，經(jīng)過競爭反應(yīng)，大部分抗體被其結(jié)合，而熒光素標(biāo)記的抗原多呈游離的小分子狀態(tài)。由于其分子小，在液相中轉(zhuǎn)動速度較快，測量到的熒光偏振程度也較低。反之，如果待測抗原濃度低時，大部分熒光素標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合，形成大分子的抗原抗體復(fù)合物，此時檢測到的熒光偏振程度也較高。熒光偏振程度與待測抗原濃度呈反比關(guān)系。我們測定待測抗原標(biāo)準(zhǔn)品后制標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過檢測反應(yīng)系中偏振光的大小，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可以精確地得知樣品中待測抗原的相應(yīng)含量。31. 什么是時間分辨熒光免疫分析？用什么標(biāo)記物？ 時間分辨熒光免疫分析（Timeresolved Fluoroimmunoassay,TRFIA）是一種非同位素免疫分析技術(shù)，它用鑭系元素標(biāo)記抗原或抗體，根據(jù)鑭系元素螯合物熒光壽命很長的特點，用時間分辨技術(shù)測量熒光，同時檢測波長和時間兩個參數(shù)進(jìn)行信號分辨，可有效地排除非特異熒光的干擾，極大地提高了分析靈敏度。與FPIA相比克服了酶標(biāo)不穩(wěn)定，化學(xué)發(fā)光僅能一次，易受環(huán)境干擾的缺點。解離增強(qiáng)鑭系元素?zé)晒饷庖叻治觯―ELFIA）是時間分辨熒光免疫分析中的一種。它用具有雙功能基團(tuán)結(jié)構(gòu)的螯合劑，使其一端與銪（Eu）連接，另一端 與抗體/抗原分子上的自由氨基連接，形成EU標(biāo)記的抗體/抗原，經(jīng)過免疫反應(yīng)之后生成免疫復(fù)合物。由于這種復(fù)合物在水中的熒光強(qiáng)度非常弱，因此加入一種增 強(qiáng)劑，使Eu3+從復(fù)合物上解離下來，自由Eu3+同增強(qiáng)劑中的另一種螯合劑螯合形成一種膠態(tài)分子團(tuán)，這種分子團(tuán)在紫外光的激發(fā)下能發(fā)出很強(qiáng)的熒光，信號增強(qiáng)了百萬倍。因為這種分析方法使用了解離增強(qiáng)步驟，因此稱為解離增強(qiáng)鑭系元素?zé)晒饷庖叻治觥?2. 什么是免疫細(xì)胞/組織染色？ 用標(biāo)記（一般采用熒光、冷光物質(zhì)或者酶標(biāo)記）的抗體對細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)的抗原進(jìn)行定性，定位或定量檢測。經(jīng)過組織化學(xué)的呈色反應(yīng)而呈現(xiàn)醒目的陽性色彩，用顯微鏡，熒光顯微鏡或電子顯微鏡觀察。凡是能作為抗原、半抗原的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)，多肽、核酸、酶、激素、磷脂、多糖、受體及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體在組織、細(xì)胞內(nèi)應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法可準(zhǔn)確的定位。33. Western Blot的原理和要點是什么？（教材版）免疫印跡法（Western Blot）是將凝膠電泳與固相免疫結(jié)合，把用電泳分區(qū)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固相載體，再用酶免疫、放射免疫或染色等技術(shù)測定。該法能分離分子大小不同的蛋白質(zhì)并確定其分子量，常用于檢測多種病毒的抗體或抗原。免疫印跡法分三個階段進(jìn)行.第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE):抗原等蛋白樣品經(jīng)SDS處理后帶陰電荷,在聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極泳動,分子量越小,泳動速度就越快.此階段分離效果肉眼不可見(只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶).第二階段為電轉(zhuǎn)移:將在凝膠中已經(jīng)分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上,選用低電壓(100V)和大電流(12A),通電45min轉(zhuǎn)移即可完成.此階段分離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見.第三階段為酶免疫定位:（此處采用酶標(biāo)顯色法）將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜(相當(dāng)于包被了抗原的固相載體)依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二抗體作用后,加入能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物,使區(qū)帶染色.常用的HRP底物為3,3-二氨基聯(lián)苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈藍(lán)紫色).陽性反應(yīng)的條帶清晰可辨,并可根據(jù)SDS-PAGE時加入的分子量標(biāo)準(zhǔn),確定各組分的分子量答題要點:(我總結(jié)歸納的)1SDS-PAGE法使蛋白質(zhì)按分子大小不同分離2用電轉(zhuǎn)移法將已分離的條帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上3加入染色標(biāo)志抗體、酶標(biāo)抗體顯色或者一抗特異結(jié)合，標(biāo)志二抗顯色三 ADMET研究34. 什么是ADMET研究，在藥物發(fā)現(xiàn)中的作用是什么？有什么特點?A：Absorption：藥物從作用部位進(jìn)入體循環(huán)的過程D：Distribution ：藥物吸收后通過細(xì)胞膜屏障向各組織、器官或者體液進(jìn)行轉(zhuǎn)運的過程M：Metabolism（Biotransformation）：藥物在體內(nèi)受酶系統(tǒng)或者腸道菌叢的作用而發(fā)生結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化的過程E：Excretion：藥物以原型或者代謝產(chǎn)物的形式排出體外的過程T：Toxcity：藥物對機(jī)體的毒性ADMET就是對藥物的吸收、分布、代謝、排泄和毒性進(jìn)行全面的研究。其中ADME是藥物代謝動力學(xué)（Pharmacokinetics,PK）的研究內(nèi)容作用：藥物篩選（Drug screening）藥物設(shè)計（Drug design）藥物合成（Drug synthesis）評價制劑（Drug formulation/Biopharmaceutics）中草藥研究（TCM herbs research）特點：1基于細(xì)胞或生物大分子的分析方法：小樣品、高內(nèi)涵和高通量分析能力；能夠闡明藥物性質(zhì)的分子機(jī)理；建立結(jié)構(gòu)-藥物性質(zhì)定量構(gòu)效關(guān)系2人源材料的應(yīng)用35. 什么是BCS？ BCS（biopharmacertics classification system）即生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng) FDA制定的BCS評價指南，主要包括下列三個方面：藥物的生物滲透能力（permeability）、藥物的溶解能力（Solubility）、制劑的快速溶出能力(Immediate Release)。這些性質(zhì)符合要求的藥物/制劑可以在藥審時得到生物豁免36. 藥物消化道吸收的機(jī)制有哪些？經(jīng)細(xì)胞連接的被動擴(kuò)散、穿細(xì)胞被動擴(kuò)散、代謝轉(zhuǎn)化、外流、藥物轉(zhuǎn)運分為細(xì)胞旁路通道和經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)運通道又分為被動擴(kuò)散、主動轉(zhuǎn)運、促進(jìn)擴(kuò)散、膜孔轉(zhuǎn)運、胞飲和吞噬37. 什么是Caco-2模型？如何從Papp判斷藥物的吸收能力？Caco-2細(xì)胞模型是一種人克隆結(jié)腸腺癌細(xì)胞，結(jié)構(gòu)和功能類似于分化的小腸上皮細(xì)胞，具有微絨毛等結(jié)構(gòu)，并含有與小腸刷狀緣上皮相關(guān)的酶系。可以用來進(jìn)行模擬體內(nèi)腸轉(zhuǎn)運的實驗。（答題到此即可，以下為背景知識）在細(xì)胞培養(yǎng)條件下，生長在多孔的可滲透聚碳酸酯膜上的細(xì)胞可融合并分化為腸上皮細(xì)胞，形成連續(xù)的單層，這與正常的成熟小腸上皮細(xì)胞在體外培育過程中出現(xiàn)反分化的情況不同。細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)研究表明，Caco-2細(xì)胞與人小腸上皮細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上相似，具有相同的細(xì)胞極性和緊密連接。胞飲功能的檢測也表明，Caco-2細(xì)胞與人小腸上皮細(xì)胞類似。由于Caco-2細(xì)胞性質(zhì)類似小腸上皮細(xì)胞，因此可以在這段時間進(jìn)行藥物的跨膜轉(zhuǎn)運實驗。作用：1研究藥物吸收的潛力2研究藥物轉(zhuǎn)運的機(jī)制，包括吸收機(jī)制和排除機(jī)制3研究藥物、營養(yǎng)物質(zhì)、植物性成分的腸道代謝判斷方法：Papp（表觀滲透系數(shù)）Papp2*10-6屬于吸收好的藥物如Testosterone(睪酮):1.0*10-5cm/s Propranolol（普奈洛爾）:2.86*10-5cm/sPapp10-6屬于吸收差的藥物如Mannitol(甘露醇):1.0*10-7 cm/s Atenolol（阿替洛爾）:4.55*10-7 cm/s38. 血腦屏障與消化道屏障有何異同？同：1消化道屏障和血腦屏障的組成中均有毛細(xì)血管及基底膜的結(jié)構(gòu)2屏障中細(xì)胞間的緊密連接是屏障的重要內(nèi)容3轉(zhuǎn)運機(jī)制類似，都具有外排4作用屏障的作用均為有選擇性的從一側(cè)到另一側(cè)轉(zhuǎn)運相關(guān)物質(zhì)，阻止有害物質(zhì)進(jìn)入BBBIB路徑阻止有害物質(zhì)從毛細(xì)血管腔側(cè)到腦內(nèi)側(cè)阻止有害物質(zhì)從腸腔側(cè)進(jìn)入毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)從毛細(xì)血管腔側(cè)起依次為為單層毛細(xì)血管壁，基底膜，星狀膠質(zhì)細(xì)胞從腸腔側(cè)其則包括腸道菌群、分泌性免疫球蛋白、腸道相關(guān)淋巴組織、膽鹽、激素和胃酸、腸粘液、腸粘膜上皮、以及毛細(xì)血管壁等。毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接毛細(xì)血管缺少一般毛細(xì)血管所具有的孔腸上皮細(xì)胞間的緊密連接一層基底膜包繞在毛細(xì)血管壁的腦腔側(cè)基底膜之外更有許多星形膠質(zhì)細(xì)胞的血管周足把腦毛細(xì)血管約85的表面包圍起來，并與血管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用，增強(qiáng)防御功能內(nèi)皮細(xì)胞的選擇透過和外排作用上皮細(xì)胞選擇透過和外排作用BBB的屏障作用更加嚴(yán)格，結(jié)構(gòu)更加復(fù)雜，選擇透過的范圍非常小39. 藥物排出有幾個途徑，決定性因素分別是什么？主要途徑是經(jīng)腎排出和經(jīng)膽汁排出，另外還有經(jīng)淚液、唾液、乳汁和呼吸道排出等決定性因素：腎排泄：（楊課件版）PPB和Papp（生物藥劑書版）藥物脂溶性、PKa、血漿蛋白結(jié)合率，尿液PH、尿量等膽汁排泄：腸肝循環(huán)：分子量300以上并有極性基團(tuán)的藥物主要從從肝進(jìn)入膽汁排泄。膽汁排泄對于因為極性太強(qiáng)而不能在腸內(nèi)重吸收的有機(jī)陰離子和陽離子是重要的消除機(jī)制。從膽汁排泄進(jìn)入小腸的藥物中，某些具有脂溶性的藥物可被重吸收，葡糖苷酸結(jié)合物則可被腸道微生物的-葡糖苷酸酶所水解并釋放出原形藥物，然后被重吸收，這就是肝腸循環(huán)。 （生物藥劑書版）分子量、極性、取代基以及解離狀態(tài)和脂溶性，種屬差異、代謝狀況、蛋白質(zhì)結(jié)合