GB5413.27-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測定.pdf

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5413.272010中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 2010-03-26 發(fā)布 2010-06-01 實(shí)施食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測定 National food safety standard Determination of fatty acids in foods for infants and young children, milk and milk products GB 5413.272010 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T 21676-2008 乳與乳制品 脂肪酸的測定 氣相液相色譜法、GB/T 5413.27-1997 嬰幼兒配方食品和乳粉 DHA、EPA的測定、GB/T 5413.4-1997 嬰幼兒配方食品和乳粉 亞油酸的測定。 本標(biāo)準(zhǔn)與原標(biāo)準(zhǔn)相比，主要變化如下： 第一法為乙酰氯甲醇甲酯化法； 將GB/T 21676-2008、 GB/T 5413.27-1997、 GB/T 5413.4-1997合并為本標(biāo)準(zhǔn)第二法氨水乙醇提取法。 本標(biāo)準(zhǔn)中附錄A為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： GB/T 5413.4-1997； GB/T 5413.27-1997； GB/T 21676-2008。 GB 5413.272010 1 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測定，第二法不適用于含有被包埋脂肪酸的測定。 2 規(guī)范性引用文件 本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 第一法 乙酰氯甲醇甲酯化法 3 原理 乙酰氯與甲醇反應(yīng)得到的鹽酸甲醇使試樣中的脂肪和游離脂肪酸甲酯化，用甲苯提取后，經(jīng)氣相色譜儀分離檢測，外標(biāo)法定量。 4 試劑和材料 除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。 4.1 無水碳酸鈉。 4.2 甲苯：色譜純。 4.3 乙酰氯。 4.4 乙酰氯甲醇溶液（體積分?jǐn)?shù)為 10 %）：量取 40 mL 甲醇于 100 mL 干燥的燒杯中，準(zhǔn)確吸取 5.0 mL 乙酰氯（4.3）逐滴緩慢加入，不斷攪拌，冷卻后轉(zhuǎn)移并定容至 50 mL 干燥的容量瓶中。臨用前配制。 注：乙酰氯為刺激性試劑，配制乙酰氯甲醇溶液時(shí)應(yīng)不斷攪拌防止噴濺，注意防護(hù)。 4.5 碳酸鈉溶液：準(zhǔn)確稱取 6 g 無水碳酸鈉（4.1）于 100 mL 燒杯中，加水溶解，轉(zhuǎn)移并用水定容至100 mL 容量瓶中。 4.6 脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度99 %，脂肪酸種類參見附錄 A 中的表 A.1。 4.7 脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)工作液： 按試樣中各脂肪酸含量及所要分析脂肪酸的種類配制適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，用甲苯定容并分別保存于10 以下的冰箱中，有效期三個(gè)月。 5 儀器和設(shè)備 GB 5413.272010 2 5.1 天平：感量為 0.01 g 和 0.1 mg。 5.2 恒溫?zé)崴〔邸?5.3 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速5000 轉(zhuǎn)/分鐘。 5.4 氣相色譜儀，帶 FID 檢測器。 5.5 冷凍干燥儀。 5.6 氮吹儀。 5.7 螺口玻璃管（帶有聚四氟乙烯做內(nèi)墊的螺口蓋）：15 mL。 5.8 離心管：50mL。 6 分析步驟 6.1 試樣處理 6.1.1 試樣含水量大于 5 %時(shí)，冷凍干燥至含水量小于 5 %。 6.1.2 稱取試樣 0.5 g（精確到 0.1 mg）于 15 mL 干燥螺口玻璃管（5.7）中，加入 5.0 mL 甲苯（4.2） 。 6.1.3 稱取無水奶油試樣 0.2 g（精確到 0.1 mg）于 15 mL 干燥螺口玻璃管（5.7）中，加入 5.0 mL甲苯（4.2） 。 6.2 甲酯化提取 6.2.1 試樣測定液的制備 在試樣（6.1.2或6.1.3）中加入10 %乙酰氯甲醇溶液6.0 mL（4.4） ，充氮?dú)夂螅o螺旋蓋，振蕩混合后于80 1 水浴中放置2 h，期間每隔20 min取出振搖一次，水浴后取出冷卻至室溫。將反應(yīng)后的樣液轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，分別用3.0 mL碳酸鈉溶液（4.5）清洗玻璃管三次，合并碳酸鈉溶液（4.5）于50 mL離心管（5.8）中，混勻，5000 轉(zhuǎn)/分鐘離心約5 min。取上清液作為試液，氣相色譜儀測定。 6.2.2 標(biāo)準(zhǔn)測定液的制備 準(zhǔn)確吸取脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.7）0.5 mL于15 mL螺口玻璃管（5.7）中，加入4.5 mL甲苯，其他操作步驟同6.2.1。 6.3 色譜參考條件 色譜柱：固定液100 %二氰丙基聚硅氧烷，100 m 0.25 mm，0.20 m，或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。 載氣：氮?dú)狻?載氣流速：1.0 mL/min。 進(jìn)樣口溫度：260 。 分流比：30：1。 檢測器溫度：280 。 柱溫箱溫度：初始溫度140 ，保持5 min，以4 /min升溫至240 ，保持15 min。 進(jìn)樣量：1.0 L。 6.4 試樣溶液的測定 GB 5413.272010 3 分別準(zhǔn)確吸取1.0 L脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)測定液（6.2.2）及試樣測定液（6.2.1）注入色譜儀，平行測定次數(shù)不少于兩次，以色譜峰峰面積定量。 7 分析結(jié)果的表述 7.1 試樣中各脂肪酸的含量的計(jì)算 試樣中各脂肪酸的含量按公式（1）計(jì)算： 100stdijstdisi=mAFmAXi （1） 式中： X i 試樣中各脂肪酸的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g） ； Asi 試樣測定液中各脂肪酸的峰面積； mstdi在標(biāo)準(zhǔn)測定液的制備（6.2.2）中吸取的脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)工作液中所含有的標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量, 單位為毫克（mg） ； Fj 各脂肪酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的換算系數(shù)，參見附錄 A 中的表 A.1； Astdi 標(biāo)準(zhǔn)測定液中各脂肪酸的峰面積； m 試樣的稱樣質(zhì)量，單位為克（g） 。 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 7.2 試樣中總脂肪酸的含量計(jì)算 試樣中總脂肪酸的含量按公式（2）計(jì)算： =iTotalFAXX（2） 式中： XTotal FA試樣中總脂肪酸的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g） ； Xi 試樣中各脂肪酸的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g） 。 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 7.3 試樣中某個(gè)脂肪酸占總脂肪酸的百分比（%）的計(jì)算 試樣中某個(gè)脂肪酸占總脂肪酸的百分比（%）Y 按公式（3）計(jì)算： 100TotalFAi=XXY或100jsijsi=FAFAY（3） 8 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10 %。 9 其他 本方法最低檢出限參見附錄A中的表A.1。 GB 5413.272010 4 第二法 氨水乙醇提取法 10 原理 乳與乳制品中的脂肪經(jīng)皂化處理后生成游離脂肪酸，在三氟化硼催化下進(jìn)行甲酯化反應(yīng)，經(jīng)甲酯化后的脂肪酸通過氣相色譜柱分離，以氫火焰離子化檢測器檢測，外標(biāo)法定量。 11 試劑和材料 除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。 11.1 甲醇：色譜純。 11.2 乙醚。 11.3 石油醚：沸程 30 60 。 11.4 乙醇（體積分?jǐn)?shù)95 %）。 11.5 氨水（體積分?jǐn)?shù)為 25 %）。 11.6 正己烷（C6H14）：色譜純。 11.7 高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）：128 U/mg。 11.8 三氟化硼甲醇溶液（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 14 %）。 11.9 飽和氯化鈉溶液：溶解 360 g 氯化鈉于 1.0 L 水中，攪拌溶解，澄清備用。 11.10 氫氧化鉀甲醇溶液（0.5 mol/L）：稱取 2.8 g 氫氧化鉀，用甲醇（11.1）溶解，并稀釋定容至100 mL，混勻。 11.11 焦性沒食子酸甲醇溶液（10 %）：將 1.0 g 焦性沒食子酸溶于 10 mL 甲醇中配制成 10 %焦性沒食子酸甲醇溶液備用。 11.12 脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度99 %，貯存于10 以下的冰箱中，脂肪酸種類參見附錄 A 中的表 A.1。 11.13 脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液： 按試樣中各脂肪酸含量及所要分析脂肪酸的種類適當(dāng)配制其濃度，正己烷定容并貯存于10 以下的冰箱中，有效期三個(gè)月。 12 儀器和設(shè)備 12.1 天平：感量為 0.1 mg。 12.2 抽脂管：100 mL 磨口具塞試管，抽脂管干燥、恒重。 12.3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。 12.4 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速5000 轉(zhuǎn)/分鐘。 12.5 恒溫水浴鍋。 12.6 氣相色譜儀，帶 FID 檢測器。 13 分析步驟 GB 5413.272010 5 13.1 試樣制備 預(yù)先將需冷藏的試樣從冰箱中取出，放至室溫。 13.1.1 液態(tài)試樣 稱取10 g（精確到0.1 mg）試樣于抽脂管中，待測。 13.1.2 固態(tài)試樣 13.1.2.1 含淀粉試樣 稱取試樣 1.0 g（精確到 0.1 mg）至抽脂管中（12.2），加入 0.1 g 高峰氏淀粉酶（11.7），加入10 mL 45 50 的水， 混合均勻后， 用氮?dú)馀懦恐锌諝猓?蓋上瓶塞， 置 45 1 烘箱內(nèi) 30 min，取出。 13.1.2.2 不含淀粉試樣 稱取試樣 1.0 g（精確到 0.1 mg）至抽脂管（12.2）中，加入 65 1 的水 10 mL 溶解試樣，振搖，使樣品完全分散。 于上述試樣（13.1.1和13.1.2）中加入2 mL氨水（11.5），于65 1 水浴鍋中放置15 min，取出輕搖，冷至室溫。 13.1.3 無水奶油 稱取試樣0.2 g（精確到0.1 mg）于磨口燒瓶中，按13.3所述進(jìn)行皂化酯化。 13.2 脂肪提取 在制備好的樣品中加入10 mL乙醇（11.4），混勻。加入25 mL乙醚（11.2），加塞振搖1 min。加入25 mL石油醚 （11.3） ， 加塞振搖1 min， 靜置、 分層， 有機(jī)層轉(zhuǎn)入磨口燒瓶中。 再加入25 mL乙醚 （11.2）及25 mL石油醚（11.3），加塞振搖1 min，靜置、分層，有機(jī)層轉(zhuǎn)入磨口燒瓶中，再重復(fù)操作一次。合并抽提液于磨口燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干。 13.3 皂化酯化 在濃縮物（13.2）或無水奶油（13.1.3）中加入1.0 mL焦性沒食子酸甲醇溶液（11.11）。濃縮干燥之后再加入10 mL氫氧化鉀甲醇溶液（11.10）置于80 1 水浴上回流5 min10 min。再加入5 mL三氟化硼甲醇溶液（11.8），繼續(xù)回流15 min，冷卻至室溫，將燒瓶中的液體移入50 mL離心管中，分別用3 mL飽和氯化鈉溶液（11.9）清洗燒瓶三次，合并飽和氯化鈉溶液于50 mL離心管，加入10 mL正己烷（11.6），振搖后，以5000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5 min，取上清液作為試液，供氣相色譜儀（12.6）測定。 注：三氟化硼甲醇溶液為強(qiáng)腐蝕性試劑，使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)。 13.4 色譜參考條件 色譜柱：固定液100 %二氰丙基聚硅氧烷，100 m 0.25 mm，0.20 m，或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。 載氣：氮?dú)狻?載氣流速：1.0 mL/min。 進(jìn)樣口溫度：260 。 分流比：30：1。 檢測器溫度：280 。 柱溫箱溫度：初始溫度140 ，保持5 min，以4 /min升溫至240 ，保持15 min。 進(jìn)樣量：1.0 L。 13.5 測定 GB 5413.272010 6 分別準(zhǔn)確吸取1.0 L脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（11.13）及試液（13.3）注入色譜儀，平行測定次數(shù)不少于兩次，以色譜峰峰面積定量。 14 分析結(jié)果的表述 14.1 試樣中各脂肪酸含量計(jì)算 試樣中各脂肪酸的含量按公式（4）計(jì)算： 100stdiistdisii=mAFVCAX（4） 式中： Xi 試樣中各脂肪酸的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g）； Asi試樣溶液中各脂肪酸甲酯的峰面積； Cstdi 脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液中各脂肪酸甲酯的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）； V 13.3中加入正己烷的體積：單位為毫升（mL）； Astdi 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中各脂肪酸甲酯的峰面積； Fi 各脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的換算系數(shù)，參見附錄A中的表A.1； m 試樣的稱樣量，單位為克（g）。 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 14.2 試樣中總脂肪酸的含量計(jì)算 試樣中總脂肪酸的含量按公式（5）計(jì)算： =iXXTotalFA（5） 式中： XTotal FA試樣中總脂肪酸的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g）； Xi 試樣中各脂肪酸的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g）； 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 14.3 試樣中某個(gè)脂肪酸占總脂肪酸的百分比（%）的計(jì)算 試樣中某個(gè)脂肪酸占總脂肪酸的百分比（%）Y 按公式（6）計(jì)算： 100TotalFAi=XXY或100isiisi=FAFAY（6） 15 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15 %。 16 其他 本方法檢出限參見附錄A中的表A.1。 GB 5413.272010 7 附 錄 A （資料性附錄） 脂肪酸的典型氣相色譜圖及換算系數(shù) A.1 37種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液典型圖譜 37種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液典型圖譜見圖A.1。 注：不同的色譜柱可能導(dǎo)致各種脂肪酸出峰時(shí)間不同，應(yīng)以實(shí)驗(yàn)室單標(biāo)校正的出峰順序?yàn)闇?zhǔn) 圖 A.1 37種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液典型氣相色譜圖 A.2 各脂肪酸種類、檢出限及脂肪酸甲酯或脂肪酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的換算系數(shù)一覽表 各脂肪酸種類、檢出限及脂肪酸甲酯或脂肪酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的換算系數(shù)一覽表見表A.1。 表A.1 各脂肪酸種類、檢出限及脂肪酸甲酯或脂肪酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的換算系數(shù)一覽表 序號(hào) 脂肪酸名稱 檢出限（mg/100 g） Fi轉(zhuǎn)換系數(shù) Fj轉(zhuǎn)換系數(shù) 1 丁酸 （C4:0） 0.5 0.8627 0.8742 2 己酸 （C6:0） 0.5 0.8923 0.9016 3 辛酸 （C8:0） 0.5 0.9114 0.9192 4 葵酸 （C10:0） 0.5 0.9247 0.9314 5 十一碳酸 （C11:0） 0.5 0.9300 0.9363 6 月桂酸 （C12:0） 0.5 0.9346 0.9405 7 十三碳酸 （C13:0） 0.5 0.9386 0.9442 8 肉豆蔻酸 （C14:0） 0.5 0.9421 0.9473 9 肉豆蔻油酸（C14:1n5） 0.5 0.9417 0.9470 10 十五碳酸 （C15:0） 0.5 0.9453 0.9502 11 十五碳一烯酸 （C15:1n5） 0.5 0.9449 0.9499 12 棕櫚酸 （C16:0） 0.5 0.9481 0.9529 13 棕櫚油酸 （C16:1n7） 0.5 0.9477 0.9525 14 十七碳酸 （C17:0） 0.5 0.9507 0.9552 15 十七碳一烯酸（ C17:1n7） 0.5 0.9503 0.9549 16 硬脂酸 （C18:0） 0.5 0.9530 0.9573 17 反式油酸 （C18:1n9t） 0.5 0.9527 0.9570 GB 5413.272010 8 表A.1（續(xù)） 序號(hào) 脂肪酸名稱 檢出限（mg/100 g） Fi轉(zhuǎn)換系數(shù) Fj轉(zhuǎn)換系數(shù) 18 油酸 （C18:1n9c） 0.5 0.9527 0.9571 19 反式亞油酸（C18: 2n6t） 0.5 0.9524 0