(論文)HPLC法測定愈骨療傷膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量

HPLC法測定愈骨療傷膠囊中川續(xù)斷皂苷的含量卞俊，陳海飛，宣偉東（解放軍第411醫(yī)院南京軍區(qū)藥學(xué)專科中心，上海，200434）摘要 目的：采用高效液相法測定愈骨療傷膠囊中川續(xù)斷皂苷的含量。方法：色譜柱Kromasil ODS-1 C18柱（4.6mm250mm，5m），流動(dòng)相：乙腈-水（30：70），檢測波長：210nm，流速：1 mlmin-1。結(jié)果：川續(xù)斷皂苷的線性范圍是0.4g3.28g（r=0.9994，n=7），回收率103.4%，RSD=1.76%。結(jié)論：該方法簡便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為愈骨療傷膠囊的質(zhì)量控制手段。關(guān)鍵詞 愈骨療傷膠囊；HPLC；川續(xù)斷皂苷Determination of Asperosaponin in Yugu Liaoshang capsule by HPLCBIAN Jun， CHEN Hai-fei， XUAN Wei-dong ( .411 hospital of PLA， Shanghai 200434， China)ABSTRACT: OBJECTIVE To determine Asperosaponin in Yugu Liaoshang capsule by HPLC. METHODS The chromatography procedure was carried out using Kromasil ODS-1 C18 (4.6 mm250mm, 5 m) as an analytic column and a mixture of 30 volume of Acetonitrile,70 volume of water as a mobile phase at a flow rate of 1.0 mlmin-1.The detection wave length was set at 210 nm. RESULTS Asperosaponin line range was between 0.4 g and 3.28 g (r=0.9994, n=7).The average recovery rate and RSD value of Asperosaponin ware 103.4% and 1.76%. CONSLUSION The method is simple, accurate, and reliable, it and can be used for the quality assess of Yugu Liaoshang Capsule.KEY WORDS :Yugu Liaoshang Capsule； Asperosaponin ；HPLC愈骨療傷膠囊是依據(jù)解放軍411醫(yī)院傳統(tǒng)驗(yàn)方，經(jīng)現(xiàn)代提取技術(shù)、制備工藝加工制成的非標(biāo)制劑，由川續(xù)斷、骨碎補(bǔ)、自然銅、地必蟲等11味中藥組成。臨床治療骨折取得良好效果。該制劑以川續(xù)斷科川續(xù)斷屬植物川續(xù)斷（Dipsacus asper Wall ）川續(xù)斷的根為君藥，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋、續(xù)折傷、止崩漏等功效1。川續(xù)斷化學(xué)成分比較復(fù)雜，其中含有多種皂苷，其中川續(xù)斷皂苷是其主要成分2。本研究采用HPLC法檢測愈骨療傷膠囊中川續(xù)斷皂苷的含量，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，該方法簡便快速、專屬性強(qiáng)。1 儀器與試藥儀器日本島津SPD-10A高效液相色譜儀，SK2200H型超聲波清洗儀器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司），AB104-N型電子分析天平（梅特勒-扎利多上海儀器有限公司），川續(xù)斷皂苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，約20 mg，批號111685-200401），乙腈為色譜純（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）；水為蒸餾水；其它試劑為分析純，愈骨療傷膠囊（四一一醫(yī)院制劑室，批號20070804）。2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil ODS-1 C18柱（4.6 mm250 mm， 5m）；流動(dòng)相：乙腈-水（30：70）；檢測波長：210 nm，流速：1 mlmin-1。；柱溫：室溫；近樣量：20 l。2.2 對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液制備精密稱取川續(xù)斷皂苷對照品適量，加甲醇溶解，制成每1 ml含川續(xù)斷皂苷對照品1 mg的溶液，即得對照品溶液；精密稱取膠囊內(nèi)容物0.03 g，加入甲醇15 ml后稱其質(zhì)量，超聲30 min，放冷并補(bǔ)其失重，0.45 m微孔濾膜過濾，即得供試品溶液；取處方比例及工藝制備缺川續(xù)斷的陰性樣品，同供試品溶液制備的方法制得陰性對照溶液。在該色譜條件下，陰性對照應(yīng)無干擾。色譜圖見圖1。2.3 線性關(guān)系考察取對照品溶液用甲醇稀釋為0.164、0.109、0.082、0.0547、0.041、0.0273、0.0205mg/ml進(jìn)樣，每次進(jìn)樣20l。按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積為Y軸，濃度為X軸進(jìn)行線性回歸得到回歸方程：y=867560x（r=0.9994，n=7）。以上結(jié)果表明在0.4g3.28g范圍內(nèi)，川續(xù)斷皂苷顯良好線性關(guān)系。2.4 精密度考察取對照品溶液用甲醇稀釋成高（0.082 mg/ml）、中（0.041mg/ml）、低（0.0205mg/ml）3種濃度的溶液，每個(gè)濃度重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣20l，按圖1專屬性實(shí)驗(yàn)圖譜 A-陰性對照；B-愈骨療傷膠囊；C-川續(xù)斷皂苷對照品Fig.1 HPLC of specific testA-blank sample; B-sample; C-refercence 上述色譜條件測定峰面積。低、中、高濃度峰面積RSD分別為1.88%，1.66%和1.36%。2.5 重現(xiàn)性考察精密稱取愈骨療傷膠囊五份，照供試品制備方法平行處理，按上述色譜條件測定峰面積。其RSD為1.37%。2.6 加樣回收率取已知含量的愈骨療傷膠囊9份，分別精密加入1ml濃度為0.164g/ml的川續(xù)斷皂苷對照品，按供試品溶液制備處理，測定，計(jì)算加樣回收率，平均回收率為103.4%，RSD=1.76%。說明回收率達(dá)到良好效果。2.7 穩(wěn)定性考察取愈骨療傷膠囊1份，按供試品溶液制備方法制備，在0、2、4、6、8、10時(shí)進(jìn)樣，每次進(jìn)樣20l，得RSD=0.7%。說明在10h內(nèi)川續(xù)斷皂苷穩(wěn)定性良好。2.8 樣品含量測定精密稱取3個(gè)批次的愈骨療傷膠囊內(nèi)容物，按照供試品的處理方法平行處理，上清液過濾待進(jìn)樣，按上述色譜條件測定峰面積，計(jì)算含量。3個(gè)批次的愈骨療傷膠囊中川續(xù)斷皂苷的含量分別為1.52%，1.64%，1.68%。3 討論實(shí)驗(yàn)過程中，在190nm-400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描發(fā)現(xiàn)，川續(xù)斷皂苷在210nm處有最大吸收峰，故選用210nm作為檢測波長。供試品溶液選擇多種方法進(jìn)行制備，包括正丁醇萃取、加水超聲、加乙腈超聲、加熱回流等方法，發(fā)現(xiàn)正丁醇萃取的方法重現(xiàn)性較差，而水和乙腈作為溶劑時(shí)則含量測定偏低。甲醇超聲的制備方法不僅有較好的重現(xiàn)性，而且方法簡單、快速，因此選擇該法作為供試品的制備方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HPLC法對愈骨療傷膠囊內(nèi)容物中川續(xù)斷皂苷進(jìn)行定量分析，具有較好的準(zhǔn)確度和靈敏度，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性高。本方法可用于愈骨療傷膠囊中川續(xù)斷皂苷的定性及定量研究，為愈骨療傷膠囊的質(zhì)量控制建立了分析方法。REFERENCES1 Ch. P(2005) Vol （中國藥典2005年版.一部）S. Beijing: Chemical Industry Press，2005: 2312 Zhang Y W，XUE Z. The chemical components resesrch of Dipsacus asper WallJ .Acta Pharm sin(藥學(xué)學(xué)報(bào)) ，1991，26（9）：676-681HPLC法測定愈骨療傷膠囊中川續(xù)斷皂苷的含量卞俊，陳海飛，宣偉東（解放軍第411醫(yī)院南京軍區(qū)藥學(xué)?？浦行?，上海，200434）摘要 愈骨療傷膠囊以川續(xù)斷為君藥，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋、續(xù)折傷、止崩漏等功效。本研究采用HPLC法測定川續(xù)斷的主要成分川續(xù)斷皂苷的含量，對愈骨療傷膠囊的質(zhì)量進(jìn)行有效的控制。供試品溶液選擇多種方法進(jìn)行制備，包括正丁醇萃取、加水超聲、加乙腈超聲、加熱回流等方法，其中甲醇超聲的制備方法不僅有較好的重現(xiàn)性，而且方法簡單、快速，因此選擇該法作為供試品的制備方法。檢測的條件為色譜柱：Kromasil ODS-1 C1