DB地方標(biāo)準(zhǔn)--DB33T 538-2005 飼料中卡巴氧的測定 高效液相色譜法.doc

db33/t 2005浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布2005-03-18實(shí)施2005-02-17發(fā)布飼料中卡巴氧的測定 高效液相色譜法determination of carbadox in feedstuffs high-performance of liquid chromatographydb33/t 5382005db33浙江省地方標(biāo)準(zhǔn)ics 65.120b 46備案號：1db33/t 5382005前 言本標(biāo)準(zhǔn)在參閱了國外文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上，采用凈化小柱純化，再用高效液相色譜儀(配紫外檢測器)進(jìn)行測定。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省飼料監(jiān)察所負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：施杏芬、金海麗、宣士榮、張志健、陳勇、朱聰英、周劍萍。i飼料中卡巴氧的測定 高效液相色譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中卡巴氧的測定-高效液相色譜法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中卡巴氧的測定。本標(biāo)準(zhǔn)最低檢測濃度為0.5mg/kg。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。gb/t 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法gb/t 14699.1 飼料采樣方法3 方法原理試樣中的卡巴氧先用三氯甲烷+甲醇溶液提取，通過液液萃取、hlb小柱凈化，再用甲醇洗脫。以甲醇+水作為流動相，用高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)測定，外標(biāo)法定量。4 試劑和材料4.1 除特殊說明外，本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑均為分析純，水為三級水，色譜用水為一級水，符合gb/t 6682中用水規(guī)定。4.2 三氯甲烷。4.3 甲醇(色譜純)。4.4 氫氧化鈉。4.5 氯化鈉。4.6 磷酸二氫鉀。4.7 (0.1mol/l氫氧化鈉+10%氯化鈉)混合液： 稱取4.0g naoh和100gnacl溶于蒸餾水中，再用蒸餾水定容至1000ml。4.8 1mol/l磷酸二氫鉀溶液：稱取136 g kh2po4溶于蒸餾水中，再用蒸餾水定容至1000ml。4.9 三氯甲烷+甲醇溶液(v+v)=3+1。4.10 色譜凈化柱：hlb小柱60mg/3ml。4.11 冰醋酸。4.12 0.45m濾膜：有機(jī)濾膜。5 儀器、設(shè)備5.1 實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備。5.2 真空泵(0.1mpa)。5.3 恒溫水浴鍋。5.4 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5.5 旋渦混合儀。5.6 超聲波提取器。5.7 高效液相色譜儀(配紫外檢測器)。6 試樣的制備按gb/t 14699.1采樣，選取有代表性的飼料樣品至少500，四分法縮減至100，磨碎，全部通過0.42孔徑分析篩，混勻，裝入密閉容器中，避光低溫保存?zhèn)溆谩? 分析步驟7.1 條件檢驗(yàn)過程應(yīng)在避光條件下快速進(jìn)行。7.2 提取準(zhǔn)確稱取10g(精確至0.001 g)混勻的試樣于250ml錐形瓶中，加2 g左右的硅藻土。在錐形瓶中加入100ml左右的三氯甲烷+甲醇溶液(4.8)，常溫超聲20分鐘，冷卻至室溫。用60ml玻璃砂芯漏斗(孔徑為3)過濾到500ml抽濾瓶中，把抽濾瓶中的濾液倒入另一250ml錐形瓶中；再取40ml三氯甲烷+甲醇溶液（分兩次，每次20ml）于有試樣的錐形瓶，振搖，抽濾，濾液合并至250ml錐形瓶中。將錐形瓶放于蒸汽浴上，蒸發(fā)溶液至近干。加20ml三氯甲烷于棕色錐形瓶把殘?jiān)D(zhuǎn)移至150ml分液漏斗，再用少量三氯甲烷洗滌錐形瓶(2-3次)，洗液合并到150ml分液漏斗。在分液漏斗中加入20.0ml(0.1mol/l氫氧化鈉+10%氯化鈉)混合液（4.6），振搖2分鐘(邊振搖邊放氣)，靜置分層，棄去三氯甲烷層。再用三氯甲烷洗滌水相2次，每次用量20ml，洗滌后棄去。加4.0ml 1mol/l磷酸二氫鉀溶液（4.7）于水相中，搖勻，備用。7.3 純化先分別用3ml 甲醇和3ml水對hlb小柱進(jìn)行活化，取備用液（7.1）5.0ml上小柱，用3ml水淋洗小柱（擠干），加5.0ml 甲醇洗脫(擠干)。收集洗脫液于小試管中(加蓋)，旋渦混勻，洗脫液過0.45m 濾膜(4.11)，上機(jī)測定。7.4 卡巴氧標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備（應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用）7.4.1 卡巴氧標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取20mg卡巴氧標(biāo)準(zhǔn)品(精確至0.00002 g)于100 ml棕色容量瓶中，用三氯甲烷+甲醇溶液常溫超聲溶解，冷卻。用三氯甲烷+甲醇溶液定容并搖勻。此溶液濃度為200g/ml。7.4.2 卡巴氧標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別吸取貯備液0.1ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0 ml于10ml棕色容量瓶中，用甲醇定容，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液系列濃度分別為2g/ml、10g/ml、20g/ml、30g/ml、40g/ml。過0.45m濾膜(4.11)，上機(jī)測定。7.5 測定7.5.1 高效液相色譜條件色譜柱：c18 (5m，4.6250mm)；檢測波長：308nm；流動相：甲醇+水=3+7，每1000ml混合液中加2 ml冰乙酸；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣體積：20l。7.5.2 上機(jī)測定卡巴氧標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試液(上機(jī)液)分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積進(jìn)行計算。7.6 結(jié)果的計算與表述7.6.1 計算公式結(jié)果按式(1)計算： x=cv2 (1)1式中：x-試樣中卡巴氧含量，mg/kg；c-試液(上機(jī)液)中卡巴氧的濃度，g/ml；v1-試液(上