SZDBZ130-2015植物種質資源離體保存庫建設規(guī)范.pdf

ICS 07.080 C 04 SZDB/Z 深 圳 市 標 準 化 指 導 性 技 術 文 件 SZDB/Z 130-2015 植物植物種質資源種質資源離體保存庫離體保存庫建設規(guī)范建設規(guī)范 2015 -02 - 27 發(fā)布 2015- 03 - 01 實施 深圳市市場監(jiān)督管理局 發(fā) 布 SZDB/Z 1302015 I 目 次 前言 II 1 范圍 1 2 規(guī)范性引用文件 1 3 術語和定義 1 4 植物種質資源離體保存庫建設 3 5 操作規(guī)范 6 6 樣本的信息化管理 8 附錄 A （規(guī)范性附錄） 離體保存庫整體操作流程 9 附錄 B （規(guī)范性附錄） 植物種質資源樣本采集信息單. 10 附錄 C （規(guī)范性附錄） 植物種質資源離體保存信息單 11 參考文獻 12 SZDB/Z 1302015 II 前 言 本標準按照 GB/T 1.1-2009 給出的規(guī)則起草。 本標準由深圳市經(jīng)濟貿易和信息化委員會歸口。 本標準負責起草單位：深圳華大基因研究院。 本標準主要起草人：周欣 潘竟麗 王雪兵 田曉俊 侯麗麗 朱艷蘋 宋愛松 本標準為首次發(fā)布。 SZDB/Z 1302015 1 植物種質資源離體保存庫建設規(guī)范 1 范圍 本標準規(guī)定了植物種質資源離體保存庫建庫的相關術語和定義、 設施及環(huán)境的要求、 實 驗室設計、實驗室管理、植物離體保存技術等相關內容。 本標準適用于植物種質資源離體保存庫和植物遺傳資源保護類機構的建設與管理。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 僅所注日期的版本 適用于本文件。 凡是不注日期的引用文件， 其最新版本 （包括所有的修改單） 適用于本文件。 GB/T 1.1-2009 標準化工作導則 第1部分：標準的結構和編寫 GB 2894-2008 安全標志及其使用導則 GB 7000.2-2008 燈具 第2-22部分：特殊要求應急照明燈具 GB 13690-2009 化學品分類和危險性公示通則 GB 15258-2009 化學品安全標簽編寫規(guī)定 GB/T 18883-2002 室內空氣質量標準 GB 19489-2008 實驗室生物安全通用要求 GB/T 22278-2008 良好實驗室規(guī)范原則 GB/T 25915.1-2010 潔凈室及相關受控環(huán)境 第1部分：空氣潔凈度等級 GB/T 25915.4-2010 潔凈室及相關受控環(huán)境 第4部分：設計、建造、啟動 GB/T 25915.5-2010 潔凈室及相關受控環(huán)境 第5部分：運行 GB 28235-2011 紫外線空氣消毒器安全與衛(wèi)生標準 GB 50016-2006 建筑設計防火規(guī)范 GB 50052-2009 供配電系統(tǒng)設計規(guī)范 GB 50073-2013 潔凈廠房設計規(guī)范 GB 50140-2005 建筑滅火器配置設計規(guī)范 GB 50346-2011 生物安全實驗室建筑技術規(guī)范 CNAS-CL05-2009 實驗室生物安全認可準則 HJ 628-2011 生物遺傳資源采集技術規(guī)范（試行） LY/T 1882-2010 林木組織培養(yǎng)育苗技術規(guī)程 SN/T 2294.5-2011 檢驗檢疫實驗室管理 第5部分:危險化學品安全管理指南 AQ 3013-2008 危險化學品從業(yè)單位安全標準化通用規(guī)范 DB 33/T 752-2009 植物種苗組培快繁技術規(guī)程 3 術語和定義 下列術語和定義適用于本文件。 3.1 種質 germplasm 在物種繁衍過程中，從親代傳遞給子代的遺傳物質。 SZDB/Z 1302015 2 3.2 植物種質資源 plant germplasm resource 在自然演變過程中形成的，能在一定環(huán)境作用下，通過世代演替?zhèn)鬟f給后代，并發(fā)育為 具有各種形狀特征植物的可遺傳的物質資源的總稱。 3.3 種質保存 germplasm conservation 利用天然或人工創(chuàng)造的適宜環(huán)境， 借以保存種質資源， 使個體中所含有的遺傳物質保持 其遺傳完整性，并且有高的生活力，能通過繁殖將其遺傳特性傳遞下去。 3.4 離體 in vitro 與“活體”（in vivo）相對的意義，指器官、組織、細胞和原生質體離開母體的狀態(tài)。 3.5 植物組織培養(yǎng) plant tissue culture 植物的組織培養(yǎng)，又稱離體培養(yǎng)。指在無菌條件下，將離體的植物器官（如根、莖、葉、 花、果實、種子等）、組織（如形成層、胚乳、皮層等）、細胞（體細胞和生殖細胞）或原 生質體等，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，在人工控制條件下，使之生長、分化并發(fā)育、再生 成完整小植株的培養(yǎng)技術。 3.6 離體保存 in vitro conservation 對離體培養(yǎng)的小植株、器官、組織、細胞或原生質體等材料，采用一些方法延緩或停止 其生長，需要時可立即恢復其生長，并再生植株的方法。 3.7 離體保存庫 in vitro conservation library 規(guī)范化和系統(tǒng)化進行離體保存和實驗操作的植物種質資源機構或實體。 3.8 常溫保存 room temperature conservation 在 25 2下，通過改變培養(yǎng)基成分和光照條件使離體培養(yǎng)物生長緩慢的保存方法。 3.9 低溫保存 low temperature conservation 通過低溫降低離體培養(yǎng)物生長速度的保存方法。 3.10 珍稀瀕危植物 rare and endangered plant 列入 瀕危野生動植物種國際貿易公約 CITES附錄和 國家重點保護野生植物名錄 （第 一批）（1999）中的植物。 3.11 無菌操作室 clean chamber 無菌操作室亦叫接種室，是進行外植體滅菌，培養(yǎng)材料接種，培養(yǎng)物繼代轉移，芽條生 根以及其它無菌操作的場所。 3.12 培養(yǎng)室 culture room 培養(yǎng)材料和組培苗在人工控制溫度、相對濕度和光照等條件下培養(yǎng)和生長的場所。 3.13 ISO 8 級 ISO class 8 國際空氣潔凈度分級標準中，當1m3空氣中最大允許粒子數(shù)（粒徑0.5m）不超過3 520 000個時，空氣潔凈度定義為ISO 8級。亦相當于中國空氣潔凈度標準中的十萬級。 SZDB/Z 1302015 3 3.14 外植體 explant 用于植物組織培養(yǎng)的離體植物器官、組織、細胞以及原生質體等起始培養(yǎng)材料。 3.15 接種 inoculation 在無菌條件下將植物材料接種到具有各種發(fā)育導向作用培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)的過程。 3.16 誘導培養(yǎng) induction culture 使用一定的誘導因子獲得目標生物的培養(yǎng)過程。 3.17 繼代培養(yǎng) subculture 把保存的植物材料，接種到新鮮的培養(yǎng)基上繼續(xù)保存的過程。 3.18 增殖培養(yǎng) multiplication culture 將誘導產生的芽、苗、愈傷組織、原球莖或胚狀體等培養(yǎng)材料重新分割，接種到新鮮培 養(yǎng)基中進一步擴大培養(yǎng)的過程。 3.19 壯苗培養(yǎng) strong seedlings culture 在繼代培養(yǎng)過程中，隨著增殖系數(shù)的提高，有的增殖材料會出現(xiàn)生長勢減弱，不定芽短 小細弱，無法進行生根培養(yǎng)，或移栽成活率低的現(xiàn)象，通過選擇適宜的細胞分裂素和生長素 的種類及不同濃度配比，實現(xiàn)增殖和壯苗的過程。 3.20 生根培養(yǎng) rooting culture 外植體經(jīng)繼代培養(yǎng)后形成無根的芽， 進一步接種于生根培養(yǎng)基上誘導生根， 形成完整植 株的過程。 3.21 組培苗 plantlet 利用植物組織、器官、細胞等作為外植體，通過植物組織培養(yǎng)技術產生的植物種苗。 4 植物種質資源離體保存庫建設 4.1 離體保存方法 本標準適用于離體保存庫采用常溫和低溫保存法保存植物種質資源。 4.2 設施、設備與環(huán)境 4.2.1 空調、通風和凈化 通風系統(tǒng)應符合GB/T 18883的規(guī)定， 氣流由“清潔”空間向“污染”空間流動， 最大限 度減少室內回流與渦流。離體保存庫空調系統(tǒng)應符合GB 19489的規(guī)定，有足夠的溫度和濕 度控制能力。離體保存庫空調凈化系統(tǒng)應符合GB 50346的規(guī)定，有利于實驗室系統(tǒng)設置和 節(jié)能運行。 4.2.2 照明系統(tǒng) 離體保存庫，應符合 GB 19489 的規(guī)定，實驗室核心工作區(qū)的照度不低于 350 lx，其它 區(qū)域不低于 200 lx。 SZDB/Z 1302015 4 4.2.3 備用電源 實驗室的供電系統(tǒng)應符合 GB 50052 和 GB 19489 的規(guī)定。應急照明不得少于 30 min， 需安裝后備電池或者與后備發(fā)電機相連，并符合 GB 7000.2 的規(guī)定。 4.2.4 安全設施 離體保存庫的安全設施應符合 GB 19489 中的規(guī)定，包括門禁、監(jiān)控、報警和危險處理 系統(tǒng)。 4.3 實驗室設計 4.3.1 實驗區(qū)域 離體保存庫實驗區(qū)域的設計應符合GB 19489的規(guī)定，實驗區(qū)域應包括制備室、洗滌室、 滅菌室、處理室、更衣室、無菌操作室、培養(yǎng)室、觀察室和溫室等區(qū)域。每個區(qū)域標識潔凈 和風險級別，組培室間用彩鋼板隔斷包圍。 4.3.2 制備室 制備室的功能是完成藥品準備和培養(yǎng)基配制， 主要設施設備包括操作臺、 水池、 藥品柜、 防塵柜、冰箱、電子天平、pH酸度計、蒸餾水器、微波爐等。制備室要求寬敞明亮，通風 干燥，便于多人同時操作，配備給水排水設施。 4.3.3 洗滌室 洗滌室的功能是完成各種培養(yǎng)器具的洗滌、干燥和保存，主要設施設備包括操作臺、水 池和落水架。洗滌室要求通風、防潮，地面應耐濕并排水良好。 4.3.4 滅菌室 滅菌室的功能是完成培養(yǎng)基、 無菌水和器械的滅菌， 要求主要設施設備為高壓蒸汽滅菌 鍋和干燥滅菌器。針對滅菌室要求電源安全，設漏電保護裝置。 4.3.5 更衣室 更衣室是供人員出入無菌操作室和培養(yǎng)室， 穿脫工作服的場所， 主要設施設備包括紫外 燈、衣柜和鞋柜。更衣室的建設和布局應符合GB/T 25915.4的規(guī)定。 4.3.6 無菌操作室 無菌操作室，也稱接種室，主要用于對植物外植體進行消毒、接種、培養(yǎng)物轉移和試管 苗繼代等其它無菌操作，主要設施設備包括超凈工作臺、紫外燈、空調、接種器械和滅菌接 種儀器。 無菌操作室要求封閉性好， 應設在不易受潮的地方； 地面和墻壁應密閉光滑、 防水、 耐腐蝕，易于清潔和消毒；配置拉動門，以減少開關門時的空氣流動，防止空氣對流。無菌 操作室室內空氣潔凈度應達到GB/T 25915.1中ISO 8級（十萬級）潔凈度，設計、建設和運 行應符合GB/T 25915.4、GB/T 25915.5和GB 50073的規(guī)定。 4.3.7 培養(yǎng)室 環(huán)境與設施 培養(yǎng)室主要設施設備包括培養(yǎng)架（控溫控光控濕）、光照培養(yǎng)箱、紫外燈、空調、加濕 器、 除濕機、 溫濕度計和自動控時器等。 組培室室內空氣潔凈度應達到GB/T 25915.1中ISO 8 SZDB/Z 1302015 5 級（十萬級）潔凈度，設計、建設和運行應符合GB/T 25915.4、GB/T 25915.5和GB 50073的 規(guī)定。 培養(yǎng)架 培養(yǎng)架由金屬制成，最低一層離地高10 cm，培養(yǎng)架長度和高度依據(jù)實際情況而定。 溫度 培養(yǎng)室應具備溫度調節(jié)功能， 針對常溫保存和低溫保存的需求設置不同的溫度， 不同溫 度要求的培養(yǎng)室應具有獨立空間。 低溫保存培養(yǎng)室的數(shù)量根據(jù)所涉及材料種類對低溫限制生 長的特定溫度要求而設定，各特定溫度的變化范圍為2。 濕度 培養(yǎng)室室內濕度根據(jù)不同材料設定相對應的濕度范圍。 光照 日光燈固定在培養(yǎng)架的側面或擱板的下面，每層設置的日光燈數(shù)視具體的培養(yǎng)物而定， 光照強度為2000-3000 lx?？刂乒庹諘r間應安裝定時開關裝置，一般培養(yǎng)的光照需要為每天 10 h -16 h，亦可根據(jù)實際情況設置光照時間。 面積 培養(yǎng)室面積根據(jù)需求而定， 可根據(jù)溫度和光照不同要求建立多個獨立培養(yǎng)室， 每個獨立 培養(yǎng)室空間不小于20 m2，便于對條件進行均勻控制。 4.3.8 觀察室 觀察室供工作人員和參觀人員在不進入培養(yǎng)室的情況下， 觀察組培室整體狀況使用。 在 室內相鄰隔間之間設置透明玻璃窗，窗戶應采用非開啟式并密封。 4.3.9 溫室 溫室是用來對組培苗進行煉苗和移栽的場所，由鋼架、玻璃或塑料采光板建造而成。主 要設備包括苗床、遮陽網(wǎng)、噴灌系統(tǒng)、二氧化碳機等。溫室要求環(huán)境清潔，具備控溫、控濕、 遮蔭、防蟲和采光良好等條件。 4.3.10 實驗室布局 離體保存庫實驗室布局基本要求包括： 應根據(jù)實驗操作程序排列實驗室， 使各環(huán)節(jié)連接 轉移方便；無菌操作室和培養(yǎng)室應設在與外界環(huán)境隔離性好的區(qū)域，保證其無菌環(huán)境。在保 障這兩個前提要求的情況下，實驗室可視情況自由設計。 4.4 人員管理 離體保存庫應有足夠的與其功能相適應的技術和管理人員， 人員需受過與從事工作相關 的專業(yè)教育及技術培訓，并符合WHO 實驗室生物安全生物手冊及 GB 19489 的規(guī)定。 離體保存庫要建立實驗室人員工作職責和操作守則等規(guī)章制度。 4.5 安全管理 4.5.1 生物安全 SZDB/Z 1302015 6 離體保存庫的樣本采集、 操作和保存的過程如涉及生物安全問題， 在開展前應通過生物 安全評審委員會的評審，并符合 CNAS-CL05 的規(guī)定。 4.5.2 化學安全 離體保存庫要符合 GB 1369 的規(guī)定，在使用到有毒有害物質的工作區(qū)域，應符合 AQ 3013 的規(guī)定。危險化學品安全應符合 SN/T 2294.5 的規(guī)定。 4.5.3 紫外線安全 離體保存庫的紫外線滅菌燈的安裝、檢測和使用應符合 GB 28235 的規(guī)定。 4.5.4 設施安全 離體保存庫的設施及儀器設備應滿足實驗室科研工作的需求。 除此之外， 針對設施和儀 器設備的安全應建立維護系統(tǒng)，定期進行設施的維護和檢查。 4.5.5 消防安全 離體保存庫防火系統(tǒng)的規(guī)劃和設計應符合 GB 19489 和 GB 50016 的規(guī)定。離體保存庫 滅火器的配置應符合 GB 50140 的規(guī)定。 4.5.6 安全標志 離體保存庫中相關安全標志的設計應符合 GB 15258 及 GB 2894 的規(guī)定。 5 操作規(guī)范 5.1 整體操作流程 離體保存庫整體操作流程遵循附錄A的要求進行。 5.2 樣本采集 5.2.1 采集程序 國內植物樣本采集程序應參照HJ628的規(guī)定進行。若采集國家重點保護野生植物的樣 本，應按照相關法律法規(guī)的規(guī)定，向相關主管部門提出申請，獲批后方可采集。在自然保護 區(qū)內采集樣本，應向保護區(qū)管理機構提出申請，獲批后方可采集。境外采集需依據(jù)瀕危野 生動植物種國際貿易公約CITES附錄進行報關和檢驗檢疫。 5.2.2 樣本采集 采集無病蟲害、無污染且具備優(yōu)異性狀材料。 5.2.3 采集信息登記 采集樣本應進行詳細的檔案記錄，記錄的內容應至少包括：采集編號、樣本類型、科學 分類、植物習性、采集地、生境和采集者信息。植物樣本采集信息按照附錄B填寫，并錄入 數(shù)據(jù)庫。 5.3 外植體的選擇、消毒與接種 5.3.1 外植體的選擇 SZDB/Z 1302015 7 可采集植物的器官、 組織、 細胞或者原生質體等作為外植體。 外植體面積根據(jù)植物種類、 器官和目的來確定，一般葉片和花瓣面積為0.5 cm2，莖尖、莖段、根、子葉、鱗莖和胚珠 等其它培養(yǎng)材料的面積為0.5 cm2-1.0 cm2，如果是胚胎培養(yǎng)或脫毒培養(yǎng)的材料，則應更小于 0.5 cm2-1.0 cm2。 5.3.2 外植體消毒 消毒前先對植物組織進行修整，去掉不需要的部分。然后將外植體流水下沖洗30 min。 消毒時在超凈工作臺上操作，75%酒精表面消毒10-30 s，無菌水洗滌2-3次，采用2%次氯酸 鈉浸泡10-15 min或用0.1%升汞浸5-10 min，無菌水洗滌3-5次。 消毒時根據(jù)材料的大小、 幼嫩、 質地等差異， 選擇適宜的消毒劑種類、 濃度和消毒時間。 消毒的最佳效果應以最大限度地殺死材料上的微生物，而又對材料的損傷最小為宜。 5.3.3 接種 將經(jīng)過消毒處理的外植體，接種在合適的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。外植體接種操作流程、注 意事項和安全管理應參照DB33/T 752規(guī)定進行。 5.3.4 離體培養(yǎng) 在無菌條件下，將外植體培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上，在人工控制條件下，使之生長、 分化、并發(fā)育再生。 5.4 常溫保存 5.4.1 組織培養(yǎng) 按照常規(guī)組織培養(yǎng)方法進行外植體誘導培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)。培養(yǎng)室 操作和培養(yǎng)基配置應參照DB33/T 752和LY/T 1882規(guī)定進行。 5.4.2 保存材料 繼代培養(yǎng)產生的材料用作植物離體保存的材料。 5.4.3 保存數(shù)量 每份種質保存10瓶以上，每瓶1-10個繁殖材料。 5.4.4 保存條件 溫度25 2，相對濕度適宜，光照強度1500 lx-3000 lx，光照時間每天10 h -16 h。 5.5 低溫保存 5.5.1 保存材料 保存材料為5.4.2繼代培養(yǎng)產生離體材料。 5.5.2 組織培養(yǎng) 將保存材料接種到常規(guī)繼代培養(yǎng)基進行保存。 5.5.3 保存數(shù)量 保存數(shù)量同5.4.3。 SZDB/Z 1302015 8 5.5.4 保存條件 保存溫度（5-18） 2，相對濕度適宜，光照強度1500 lx-3000 lx，光照時間每天8 h -12 h。 5.5.5 恢復生長 將試管苗轉接至繼代培養(yǎng)基上，于25 2溫度培養(yǎng)，常溫培養(yǎng)條件，即可恢復生長。 5.6 保存信息登記 植物離體保存庫中保存的種質資源材料應進行詳細的檔案記錄，記錄的內容應至少包 括：編號、保存材料、繼代情況、保存數(shù)量、保存方法、保存者信息等。植物樣本保存信息 按照附錄C填寫，并錄入數(shù)據(jù)庫。 5.7 包裝與運輸 5.7.1 采集材料的包裝與運輸 從野外采集的植物材料如果不能當天及時進行外植體處理， 應裝在采樣袋中， 再放置在 有膠體冰袋的容器中進行包裝與運輸。外包裝應有標簽標明材料名稱、產地、日期等信息。 運輸可選用公路或航空運輸。一般情況下公路12 h能送達的可選用公路運輸，其它可選用航 空運輸，要求需在采集處理后不超過24 h送達。 5.7.2 組培材料的包裝與運輸 組培材料的包裝運輸應符合DB33/T 752規(guī)定進行。 6 樣本的信息化管理 離體保存庫應有統(tǒng)一、 完整的信息管理系統(tǒng)， 用于樣本信息的記錄與儲存并滿足樣本追 蹤、檢索的需求。此系統(tǒng)宜與其他相關的數(shù)據(jù)系統(tǒng)兼容或關聯(lián)，以便共享樣本信息和數(shù)據(jù)， 并根據(jù)不同工作人員的職責設置相應的權限進行記錄和修改，確保信息安全。 離體保存庫的信息管理系統(tǒng)應建立安全保障， 防止黑客入侵、 計算機病毒傳播和數(shù)據(jù)損 壞等意外情況，并應進行每月一次定期的維護和備份，以應對信息和數(shù)據(jù)的意外損壞，及時 進行異地備份和歷史備份。 SZDB/Z 1302015 9 A 附 錄 A （規(guī)范性附錄） 離體保存庫整體操作流程 圖A.1 給出了植物種質資源離體保存庫的整體操作流程 圖A.1 植物種質資源離體保存庫操作流程 SZDB/Z 1302015 10 附 錄 B （規(guī)范性附錄） 植物種質資源樣本采集信息單 表B.1 給出了植物種質資源樣本采集信息單的格式。 表B.1 植物種質資源樣本采集信息單 采集編號 (Collection Number) 樣本類型（Types of Samples） 莖尖（Stem Tip） 莖段（Stem Segment）根尖（Root Tip） 根段（Root Segment） 葉片(Leaf) 葉柄(Petiole) 鱗莖(Bulb) 塊莖(Tuber) 塊根(Root Tuber) 種子(Seed) 花瓣(Petal) 花粉(Pollen) 子葉(Cotyledon) 胚(Embryo) 其他（Other） 科學分類(Scientific classification) 界Kingdom 科Family 種Species 門Phylum 亞科Subfamily 亞種Subspecies 綱Class 族Tribe 變種Variety 目Order 屬Genus 栽培品種Cultivar 植物習性(Plant habit) 喬木 Arbor 灌木 Shrub 半灌木 Semi Shrub （草質/木質）藤本 Vine （一年生/ 多年生/寄生/腐生/水生）草本 Herb 附生植物 Epiphytic 其他Other 采集地信息(Locality) 國家Country 省/直轄市Province 地級市City 縣/區(qū)City 具體地點Place 經(jīng)度Longitude 緯度Latitude 海拔Altitude 生境信息(Habitat) 地形(Landform) 平地Flat area 山坡Hillside 山頂Hill-top 山脊Mountain ridge 陡崖 Cliffs 峽谷 Gorge 河谷 River valley 溪谷 Dale 河漫地 River overland 濕地 Wetland 其他 Other 土地利用(Land use) 原始林Virgin forest 次生林Secondary forest 人工林Plantation 草地Grassland 耕地Cultivated land 園地Field 土壤質地 (Soil texture) 粘土Clay 粘壤土Clay loam 壤土Loam 沙壤土Sandy loam 砂土Sand 采集者信息(Collector information) 姓名Name 單位Unit 部門Department 電話Telephone Email 日期Date SZDB/Z 1302015 11 附 錄 C （規(guī)范性附錄） 植物種質資源離體保存信息單 表C.1給出了植物種質資源離體保存信息單的格式 表C.1 植物種質資源離體保存樣本信息單 編號 保存編號 采集編號 保存材料 科 屬 種 繼代情況 繼代次數(shù) 繼代時間 保存數(shù)量 瓶數(shù) 每瓶份數(shù) 保存方法 常溫保存 溫度（） 濕度（RH） 光照強度（lx） 光照時間（h/d） 低溫保存 溫度（） 濕度（RH） 光照強度（lx） 光照時間（h/d） 保存者信息 姓名 單位 部門 電話 Email 日期 SZDB/Z 1302015 12 參 考 文 獻 1 李勝，李唯植物組織培養(yǎng)原理與技術M北京：化學工業(yè)出版社2007：1-252 2 李浚明，朱登云植物組織培養(yǎng)教程M第 3 版北京：中國農業(yè)大學出版社2008： 1-348 3 連勇，陳國忠，沈文，徐涵植物組織與細胞離體培養(yǎng)技術M北京：中國科學技術 出版社2011：1-80 4 鞏振輝，申書興植物組織培養(yǎng)M，第 2 版北京：化學工業(yè)出版社2013：1-175 5 劉進平，莫饒，吳繁花，韓平原，莫廷輝，賴杭桂組培工廠及植物組織培養(yǎng)實驗室 的安全管理J農業(yè)與技術，2005，25（1） ：125-126，129 6 周紅玲，鄭加協(xié)，陳石頭植物種質資源限制生長保存研究進展J中國園藝文摘， 2010，10：66-68 7 劉迎春 馬鈴薯種質資源離體保存的研究D 呼和浩特， 內蒙古農業(yè)大學， 2009， 1-18 8 陳紅俊福州和泉州野生蕉 ISSR 分析及其離體保存初步研究D福州，福建農業(yè)大 學，2012，1-38 9 傅伊牽幾種野生百合離體保存技術的研究D北京，北京林業(yè)大學，2012，1-36 10 傅立國.中國植物紅皮書（第一冊） M.北京：科學出版社，1991. 11 中華人民共和國野生植物保護條例. 1996 年 9 月 30 日中華人民共和國國務院令第 204 號發(fā)布，自 1997 年 1 月 1 日起施行. 12 國家重點保護野生植物名錄（第一批） .國務院于 1999 年 8 月 4 日批準了國家重 點保護野生植物名錄(第一批) ，自發(fā)布之日起施行。 13 汪松，解焱主編.中國物種紅色名錄M. 高等教育出版社, 2004. 14 國家環(huán)境保護局，中國科學院植物研究所編.中國珍稀瀕危保護植物名錄M. 科學出 版社, 1987. 15 瀕危野生動植物種國際貿易公約(CITES). /eng/disc/what.php 16 瀕危野生動植物種國際貿易公約附錄. /eng/disc/species.php 17 Normah, M.N., Kean, C.W., Vun, Y.L. & Mohamed-Hussein, Z.A. 2011. In vitro conservation of Malaysian biodiversity achievements, challenges and future directions. In vitro Cellular and Developmental Biology Plant 47: 26-36. 18 Reed B.M., F. Engelmann, E. Dulloo & J.M.M. Engels (eds.). 2004. Technical guidelines for the management of field and in vitro germplasm collections. IPGRI/FAO/SGRP, Rome. 19 IUCN Red List of Threatened Species. / Rodrigues, A.S.L., Pilgrim,