禽流感、哈獸研傾情相送.ppt

禽 流 感 病 毒,-哈爾濱獸醫(yī)所 組員：王馥梅、郭瑩瑩、郭利敏 孫芬芬、王亞欣、張美晶 許傲天、黃文強、高立,流感病毒的命名,病毒粒子特點,禽流感病毒是正粘病毒科流感病毒屬的一個成員。病毒顆粒呈球形、桿狀或長絲狀，為多形性。,直徑為80一120 nm，表面有一層棒狀和蘑菇狀的纖突，前者對紅細胞有凝集性，稱血凝素（HA），后者有能將吸附在細胞表面上的病毒粒子解脫下來的作用，稱神經(jīng)氨酸酶（NA）。纖突的一端鑲嵌在病毒的脂囊膜，囊膜下面有一層膜蛋白，緊緊地包裹著呈螺旋狀對稱的核衣殼。核衣殼的直徑為915nm，由RNA、核蛋白及三個多聚酶所組成。,根據(jù)核糖核蛋白抗原性不同分為三個類型，即A、B、C三型。其中B、C兩型僅能對人致病，A型可對人、豬、馬和禽致病。 依據(jù)病毒表面的兩種糖蛋白血凝素和神經(jīng)氨酸酶可將A型流感病毒分成若干亞型。目前已有16種HA和9種NA，不同的H抗原或N抗原之間無交叉反應(yīng)。,核酸為單股負鏈RNA，分為8個不同的片段，在核酸外面包被著螺旋排列的殼粒，主要是由核蛋白(NP)構(gòu)成。,8個核酸片段：,A 型和B 型AIV中,1 個6 個片段均編碼單個蛋白,分別為PB2 、PB1 、PA 、HA 、NP 和NA ;第7 個和第8 個片段均編碼2 個蛋白,分別為M1 、M2 和NS1 、NS2 。這10 個病毒蛋白中,有8 個是病毒粒子的組成成分( HA、NA、NP、M1 、M2 、PB1 、PB2 和PA) ,分子質(zhì)量最小的RNA 段編碼2 個非結(jié)構(gòu)蛋白,即NS1 和NS2 。,流感病毒病毒有囊膜，對乙醚、氯仿、丙酮等脂溶劑敏感。20%乙醚4處理2h 可使病毒裂解，但血凝滴度不受影響。常用消毒藥容易將其滅活，如福爾馬林、-丙內(nèi)酯、去氧膽酸鈉、稀酸、氨離子、鹵素化合物(如漂白粉和碘劑等)、重金屬離子等都能迅速破壞其傳染性。禽流感病毒對熱比較敏感，65加熱30分鐘或煮沸(100) 2分鐘以上均可滅活。病毒在糞便中存活1周，在水中可存活1個月，在pH 4.1的條件下也具有存活能力病毒對低溫抵抗力較強，在有甘油保護的情況卜，可保持活力1年以上。病毒在直接陽光下40-48小時即可滅活，紫外線直接照射，可迅速破壞其傳染性。對凍融作用相對較穩(wěn)定，但反復凍融，最終可使病毒滅活。,流行病學,禽流感病毒在自然條件下，能感染多種禽類 。病毒在這些野禽中大多形成無癥狀的隱性感染，而成為禽流感病毒的天然貯毒庫。 家禽中以火雞最為敏感，雞、雉雞、鴿、鵪鶉、鷓鴣、鴕鳥等均可受禽流感病毒的感染而大批死亡。,傳染源：主要來自野生禽類（尤其是野生水禽）、受感染的家禽以及觀賞鳥等。,傳播途徑：禽流感是高度接觸性的傳染病，可通過多種途徑傳播感染，被感染禽群的糞便及分泌物污染的飼料、飲水、空氣中的塵埃以及籠具、蛋品、種苗、衣物、運輸工具，均可通過各種渠道進入其他的健康禽群。帶病毒的候鳥和野生水禽在遷棲過程中，沿途可散播病毒。觀賞鳥、參賽的鴿子以及其它參加展覽的鳥類都可直接或間接將病毒散播到敏感禽群內(nèi)。與帶毒的人或豬的接觸也可能引起病毒的傳播。,該病一年四季均可流行，但以冬季和氣溫驟冷驟熱的季節(jié)更易暴發(fā)。,癥狀,產(chǎn)蛋雞在感染H9N2等低致病力病毒后，最常見的癥狀是產(chǎn)蛋率下降，但下降程度不一。,小鴨流鼻汁癥狀,病鴨的呼吸癥狀,肉雞、未開產(chǎn)的種雞和蛋雞除沒有產(chǎn)蛋下降的變化外，其余的癥狀與上述產(chǎn)蛋雞相似。鴿、雉、珍珠雞、鴕鳥、鵪鶉、鷓鴣等感染低致病力禽流感后，臨床癥狀與雞相似。,由高致病力毒株，如H5N1禽流感病毒感染雞后形成的高致病力禽流感，其臨床癥狀多為急性經(jīng)過。,病雞頭部腫脹，冠和肉髯發(fā)黑，眼分泌物增多，眼結(jié)膜潮紅、水腫，拉稀糞。褪色蛋、無殼蛋、畸形蛋增多， 雞腳鱗片下呈紫紅色或紫黑色。少數(shù)病雞出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，包括轉(zhuǎn)圈、前沖、后退、頸部扭歪或后仰望天等。,雞冠腫脹壞死， 眼臉及周圍高度腫脹,雞冠與肉呈腫脹紫紺,腳鱗的紫變 感染AIV的病雞多呈腳鱗的紫變與雞冠壞死、 出血為本病的特征，本圖所示者為腳膝關(guān)節(jié) (圖上方)周圍的紫色變化,病鴨角弓反張,病變,常見的肉眼病理變化為喉氣管充血、出血，在氣管叉處有黃色干酪樣物阻塞，氣囊膜混濁，典型的纖維素性腹膜炎，輸卵管黏膜充血、水腫，卵泡充血、出血、變形，腸黏膜充血或輕度出血，胰腺有斑狀灰黃色壞死點。,腺胃乳頭、腺胃與肌胃交界處、腺胃與食道交界處、肌胃角質(zhì)膜下、十二指腸黏膜出血。,腺胃及肌胃出血,鴨流感胰腺出血病變,流感病毒的研究情況：,1 病毒結(jié)構(gòu)蛋白M2： M2基因包含1439 和728995兩個部分,其初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在剪切40727位的內(nèi)含子后, 拼接成成熟的mRNA后翻譯成M2蛋白。M2蛋白是97個氨基酸的跨膜蛋白,大量表達于感染細胞表面,包括細胞外氨基端(23個氨基酸殘基) 、跨膜區(qū)(2543氨基酸殘基) 以及位于細胞內(nèi)的羧基端( 54 個氨基酸殘基) 。,M2蛋白是一個相對較小的病毒成分,其生物活性形式是一個寡四聚體。M2蛋白包括3個半胱氨酸殘基Cys217、Cys219 和Cys250,大多數(shù)M2 通過 Cys217和Cys219形成二硫鍵連接成M2二聚體,再 由非共價鍵連接形成同源四聚體,而Cys250 被?；?化。,M2蛋白在病毒復制中具有重要作用,也是抗病毒藥物作用靶點 M2蛋白是重要的病毒抗原,在疫苗發(fā)展中具有重要意義,2 病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1： NS1主要在核內(nèi),在感染的早期就被大量合成，A型流感病毒NSl基因全序列為890個核苷酸,有兩個編碼區(qū)。第1個編碼區(qū)編碼含202個237個氨基酸的NSl 蛋白,在不同病毒株系間有差異。第2 個編碼區(qū)編碼含121個氨基酸的NS2蛋白,其5端有56個核苷酸與NSl相同,整個mRNA 包含一個中斷的含473個核苷酸的區(qū)域。,（1）NSl 蛋白對宿主細胞蛋白合成有抑制作用 研究表明,AIV 的NSl 蛋白具有RNA 結(jié)合活性,其可以通過以下方式抑制宿主細胞蛋白的合成:抑制宿主細胞mRNA 的多聚腺苷酸化; 與宿主細胞內(nèi)的多種蛋白質(zhì)相互作用; 結(jié)合宿主細胞發(fā)生多聚腺苷酸化的mRNA 并抑制宿主細胞mRNA的核輸出; 與小核RNA 結(jié)合,阻斷前mRNA 的剪接過程,（2）NSl 蛋白有利于病毒的合成與表達 AIV 的NSl 蛋白在與宿主細胞核蛋白相互作用,抑制宿主細胞核內(nèi)mRNA 輸出的同時,也大大 提高了宿主細胞的前mRNA 在細胞核內(nèi)的濃度與 壽命,因為病毒的帽依賴性內(nèi)切酶能從宿主細胞前 mRNA 上將多聚腺苷酸帽子切下來并用來作為合 成病毒RNA 的引物,所以宿主細胞前mRNA 在細 胞核內(nèi)的積累有利于病毒mRNA 的合成。,（3）NS1 蛋白與宿主細胞凋亡的關(guān)系 NSl 蛋白通過上調(diào)表達PKR 細胞內(nèi)抑制物的濃度來抑制PKR 的激活,或是通過直接結(jié)合PKR 和抑制IRF23 ( IFN regulatory factor3 ,IRF3) ,來抑制PKR 的激活,從而延緩細胞凋亡。,（4）NS1 蛋白的干擾素及腫瘤壞死因子的頡頏作用 流感病毒NSl 基因在抑制干擾素、細胞因子和NF2B 通路中發(fā)揮了關(guān)鍵性作用。 NS1 蛋白可作為一種鑒別診斷標志,通過檢測抗NS1 蛋白的抗體來區(qū)分野毒感染和疫苗免疫,并可作為早期感染的依據(jù)。,3 禽流感病毒抗原的變異與效應(yīng)： （1）禽流感病毒抗原變異 1.1點突變 流感病毒的RNA復制酶缺乏校正閱讀能力,編碼HA和NA蛋白質(zhì)的基因非同義替換的積累使其基因容易發(fā)生突變而發(fā)生抗原漂移. 流感病毒HA 基因的突變率較高,據(jù)估計,每個復制周期中每個核苷酸的突變幾率為2 10- 3 ,也就是說病毒每復制一代, HA基因上大約有一個堿基發(fā)生變異.,1.2基因重排 A型流感病毒是分節(jié)段、單股負連的RNA病毒,有8個基因片段. 當2個或2個以上的不同病毒粒子同時感染1個宿主細胞時,在病毒的增殖過程中,不同毒粒子的8個基因組片段可以隨機相互交換,從而發(fā)生核酸片段水平上的重新組合,理論上通過基因片段的重排有可能產(chǎn)生256種遺傳不同的子代病毒. 在自然界,這種混合感染的現(xiàn)象比較常見,例如日本在20世紀80年代和90年代曾從發(fā)生豬流感(H3N2 , H1N1 )混合感染的豬群中分離到H1N2 基因重組型流感病毒. 通過基因重排有可能產(chǎn)生高致病力的毒株,幸運的是,迄今為止,造成嚴重損失的均為H5 和H7 亞型.,(2)禽流感病毒抗原變異引起的效應(yīng)： HA受體結(jié)合位點變異 切割位點附近的氨基酸變異 HA切割位點附近的潛在糖基化位點改變,4 致病機制： 流感病毒的感染過程,吸附、穿膜與脫殼,與病毒表面蛋白血凝素有關(guān) 血凝素裂解為兩個由二硫鍵連接的亞基（HA1與HA2）是誘發(fā)感染的前提 流感病毒的受體結(jié)合部位(receptor binding site)位于HA頭部頂端 細胞受體是位于細胞膜糖蛋白或糖脂鏈末端的唾液酸,血凝素結(jié)構(gòu),流感病毒的復制及調(diào)控,只有當vRNA與NP同時存在時，vRNA才可轉(zhuǎn)運到細胞核內(nèi) NP、RNA聚合酶亞基和NS1在感染后最初數(shù)小時即生成 其他蛋白質(zhì)如HA、NA、M1、M2和NS2合成較晚 流感病毒在特定時間內(nèi)合成的蛋白成分均要通過宿主細胞的介入進入核內(nèi)完成vRNP的組裝 M1是vRNP向核外轉(zhuǎn)運的動力，只有在細胞中合成M1，并且進人細胞核后才發(fā)生vRNP的核外轉(zhuǎn)運,病毒的組裝、成熟與釋放,NP在細胞漿內(nèi)合成后 ，很快進人細胞核與vRNA結(jié)合形成核殼體 M1蛋白合成后到達細胞膜，緊貼于細胞膜內(nèi)側(cè)面 病毒膜蛋白合成后先要進行結(jié)構(gòu)上的修飾和加工 ，然后被轉(zhuǎn)移到宿主細胞膜上 病毒以出芽方式釋放子代病毒顆粒,流感病毒感染發(fā)病機制,流感病毒感染和病毒復制主要在上呼吸道上皮細胞，但常引起機體局部炎癥和全身性反應(yīng) 機體反應(yīng)主要與炎癥性細胞因子、趨化因子、誘導性一氧化氮合酶(iNOS)、粘附分子和微小纖溶酶表達與活化有關(guān),激活p53和phosphatidylinositol 3 - kinase ( PBK) /Akt信號通路誘導病毒的增殖 誘導IKK-NF-B信號通路，利于病毒復制 直接激活Fas/FasL細胞凋亡信號，導致細胞的凋亡 NS1蛋白能通過作用于其特定的靶目標,例如NF-、PKR及IRF3等來激活干擾素所誘導的連鎖反應(yīng),從而促進細胞凋亡,禽流感的診斷技術(shù),禽流感的確診主要依據(jù)實驗室方法，實驗室方法診斷方法主要包括病原學，血清學和分子診斷三部分。,病原學檢測技術(shù),1病毒的分離培養(yǎng) 病毒的分離培養(yǎng)是檢測禽組織中AIV 的一種經(jīng)典、準確、敏感的病原學診斷方法，可以作為AIV 檢測的標準。 目前常用的方法有雞胚分離培養(yǎng)和細胞培養(yǎng)。 缺點：檢測周期長，操作程序繁雜，不適用于該病的快速診斷。 2神經(jīng)氨酸酶促試驗 利用AIV囊膜表面的NA能夠水解含有N乙酰神經(jīng)氨酸的底物來檢測病毒的存在與否。 優(yōu)點：特異性強，檢測結(jié)果十分可靠。但該方法并未被廣泛應(yīng)用到臨床中,血清學診斷技術(shù),血凝與血凝抑制試驗 神經(jīng)氨酸酶抑制試驗 酶聯(lián)免疫吸附試驗 免疫熒光技術(shù) 中和試驗 瓊脂擴散試驗,分子診斷技術(shù),RT-PCR 和Realtime RT-PCR 熒光RT-PCR、 RT-PCR-ELISA 依賴核酸序列的擴增技術(shù)(NASBA) 環(huán)介導的等溫擴增技術(shù)(LAMP) 基因芯片技術(shù),防治措施,加強飼養(yǎng)管理，建立完善的生物安全體系 做好免疫接種, 增強機體特異抵抗力 規(guī)范免疫方法及免疫程序,加強飼養(yǎng)管理，建立完善的生物安全體系,加強飼養(yǎng)管理, 提供營養(yǎng)全價平衡的飼料,增強水禽的體質(zhì)，提高水禽的抵抗力。 要控制禽流感, 就要降低環(huán)境中野毒的含量。對禽舍內(nèi)、外環(huán)境一周兩次消毒。 家禽場實行“ 全進全出”制度。避免各種日齡的家禽混養(yǎng)。 高致病力禽流感被OIE 列為A 類疫病，一旦發(fā)生應(yīng)立即通報。 一旦發(fā)生高致病力禽流感，應(yīng)采取果斷措施(封鎖、隔離、消毒、焚燒發(fā)病雞群) 防止病毒擴散。,做好免疫接種, 增強機體特異抵抗力,免疫預防是最佳選擇。 由于禽流感病毒不斷發(fā)生變異, 為疫苗研制造成困難。 盡管如此， 疫苗接種仍然是預防禽流感的一種非常有效措施。 目前，禽流感疫苗的種類主要有滅活疫苗、重組載體疫苗、和核酸疫苗,免疫方法及程序,免疫方法 頸部后段皮下注射、肌肉注射 免疫接種劑量 15日齡的肉雞，每只一次0.3ml，日齡較大的雞每只0.5ml；中鵝每只1ml，成年鵝每只2ml3ml；小鴨每只0.3ml，中鴨每只0.5ml，成鴨每只注射1ml2ml。 關(guān)于疫苗的接種時間和次數(shù) 在生產(chǎn)中使用時，由于個體差異、操作失誤、飼養(yǎng)管理條件、其他疾病及藥物的影響等，實際保護時間要比室內(nèi)試驗短些，所以每3個月接種一次為妥；對于飼養(yǎng)期較長的家禽，可在515日齡時接種一次，5060日齡時接種一次，開產(chǎn)前接種一次，以后每3個月再接種一次。,思 考,病毒基因節(jié)段的重配是一種常見的現(xiàn)象，而禽流感病毒的重配正是科學家們最擔心的一個問題，因為如果真的產(chǎn)生了既具有禽流感的高