離體蛙心灌流及某些離子.ppt

離體蛙心灌流及某些離子、藥物 對離體蛙心活動的影響,(perfusion of frogs heart),主要內(nèi)容,相關(guān)理論知識 實(shí)驗(yàn)部分 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)對象 實(shí)驗(yàn)儀器與藥品 實(shí)驗(yàn)步驟 結(jié)果分析與討論,相關(guān)理論知識,正常的蛙心能按靜脈竇的節(jié)律性自動產(chǎn)生興奮，心臟的自動節(jié)律性活動，需要有一個合適的理化環(huán)境。 蟾蜍心臟離體后，用任氏液灌流，在一定時間內(nèi)仍能保持節(jié)律性興奮和收縮活動。由于心臟的正?；顒舆€有賴于內(nèi)環(huán)境因素的相對穩(wěn)定，改變灌流液的成分可引起心臟活動的改變。,相關(guān)理論知識,心肌細(xì)胞的生理特性表現(xiàn)為：自動節(jié)律性、興奮 性、傳導(dǎo)性和收縮性。 心肌細(xì)胞外離子濃度的變化和因體內(nèi)生物活性物 質(zhì)（如激素）引起的細(xì)胞膜離子通透性的改變，對 心肌細(xì)胞的生物電活動和生理特性必然會產(chǎn)生明顯 的影響。,影響心肌細(xì)胞電生理特性的原因,1.心肌的自動節(jié)律性 （1）最大復(fù)極電位與閾電位的差距 （2）4期自動除極速度,2.心肌的興奮性 （1）靜息電位水平：依賴于細(xì)胞外K+濃度 （2）Na+通道的性狀,相關(guān)理論知識,3.心肌的傳導(dǎo)性 主要取決于動作電位0期除極速度和幅度,4.心肌的收縮性 依賴于細(xì)胞外鈣離子濃度,相關(guān)理論知識,影響心肌細(xì)胞電生理特性的原因,相關(guān)理論知識,離子對心臟活動的影響,鉀離子 K+參與心肌細(xì)胞的復(fù)極化和自律細(xì)胞的4期自動去極化過程，其改變不僅取決于細(xì)胞內(nèi)外K+濃度梯度，還與細(xì)胞膜對K+通透性有關(guān)，因此其影響是多方面的,相關(guān)理論知識,離子對心臟活動的影響 鈣離子 Ca2+對Na+內(nèi)流存在競爭抑制作用，稱膜屏障作 用，對靜息電位無影響。 Ca2+o ，可使心肌細(xì) 胞的興奮性降低，傳導(dǎo)減慢，收縮力增強(qiáng)。,相關(guān)理論知識,迷走神經(jīng)和乙酰膽堿 迷走神經(jīng)興奮時，節(jié)后纖維釋放Ach,激動心肌 細(xì)胞膜上M型膽堿受體，產(chǎn)生負(fù)性變力、負(fù)性傳導(dǎo)、 負(fù)性變時等效應(yīng)。 心交感神經(jīng)與去甲腎上腺素 心交感神經(jīng)節(jié)后纖維釋放的遞質(zhì)是去甲腎上 腺素，激動心肌細(xì)胞膜上的受體，產(chǎn)生正性變 力、正性傳導(dǎo)、正性變時等效應(yīng)。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.本實(shí)驗(yàn)的目的是學(xué)習(xí)離體蛙心的灌流方法。 2.用離體蛙心灌流的方法觀察：,實(shí)驗(yàn)對象 蟾蜍,實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備 RM6240生物采集系統(tǒng) 張力換能器 蛙類手術(shù)器械 蛙心插管 試管夾 縫合線 蛙心夾 鐵支架 滴管,實(shí)驗(yàn)藥品 任氏液 lKCl 3CaC12 l：10,000 E l：10,000 ACh 3乳酸 2.5NaHCO3,實(shí)驗(yàn)步驟,一、離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備 1.破壞腦和脊髓 2.暴露心臟,一、離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備 1.觀察心臟的解剖結(jié)構(gòu),實(shí)驗(yàn)步驟,（腹面）,（背面）,實(shí)驗(yàn)步驟 一、離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備,1.蛙心插管 1.1 在主A干下穿一線打一松結(jié)；在左主A下再穿一線結(jié)扎。,實(shí)驗(yàn)步驟 一、離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備,1.蛙心插管 1.2 在主動脈根部剪一 斜口，將插管插入動脈 圓錐， 在心室收縮時 將插管插入心室，結(jié)扎 固定。,1.用試管夾將蛙心管固定 在鐵支架上 2.把張力換能器固定鐵支 架支臺上，在心室舒張期 將與換能器相連的蛙心夾 夾在心尖上。,實(shí)驗(yàn)步驟 二、連接儀器和裝置,注意事項,1.蛙心插管內(nèi)液面勿過高或過低，每次換液時，必須用任氏液沖洗3次。 2.每次加藥，心搏曲線出現(xiàn)變化后立即將插管內(nèi)液體吸出。 3.隨時滴加任氏液于心臟表面使之保持濕潤。 4.換能器頭端應(yīng)向下傾斜以免液體進(jìn)人換能器。 5.各種試劑的滴管不要混淆,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。,觀察項目,一、描記正常心搏曲線,曲線幅度 收縮的程度 曲線疏密 心率 曲線基線 舒張的程度,二、觀察離子、藥物和酸堿的影響 1)更換任氏液為3%氯化鈣溶液12滴，記錄心率和收縮幅度，沖洗（下同） 2)滴加12滴1%氯化鉀溶液 3)滴加12滴1：10000去甲腎上腺素溶液 4)滴加12滴1：10000腎上腺素溶液 5)滴加12滴1：10000 乙酰膽堿溶液 6)滴加12滴 2.5%碳酸氫鈉溶液 7)滴加12滴3%乳酸溶液,觀察項目,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,結(jié)果分析與討論,1.任氏液：正常對照 2. 3%CaCl2灌流：,結(jié)果分析與討論,3. 1%KCl灌流：,結(jié)果分析與討論,4. 1:10000 E灌流,4期 If 、I CaT通道,4期自動去極速度,自律性,心率,與心肌1受體結(jié)合,Ca2+內(nèi)流 肌漿網(wǎng)釋放Ca2+,興奮-收縮耦聯(lián),收縮力,cAMP,結(jié)果分析與討論,5. 1:10000 Ach灌流,與心肌M受體結(jié)合,K+外流, Ca2+內(nèi)流,E-C耦聯(lián),收縮力,最大復(fù)極電位 4期K+外流,自律性,心率,Ca2+i,碳酸氫鈉 乳酸,結(jié)果分析與討論,6. 2.5NaHCO3 灌流 中和H+，Ca2+與肌鈣