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文檔簡(jiǎn)介
RT-PCR技術(shù)原理簡(jiǎn)介,張曉濤,RT-PCR簡(jiǎn)介,RT- PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)即逆轉(zhuǎn)錄PCR RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。 RT-PCR技術(shù)靈敏而且用途廣泛,可用于檢測(cè)細(xì)胞中基因表達(dá)水平,細(xì)胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。,RT-PCR原理,掌握PCR技術(shù)。 學(xué)會(huì)操作RT-PCR簡(jiǎn)介PCR儀。 熟悉瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)。,首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再 以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。,RT-PCR兩種方法,RT-PCR反應(yīng)體系,RT引物的選擇,RT逆轉(zhuǎn)錄酶的選擇,RT-PCR操作流程,1.從細(xì)胞或特定組織中提取總RNA; 2.逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn); 3.擴(kuò)增內(nèi)參和目的基因并比較基因表達(dá)差異。,實(shí)驗(yàn)流程(兩步法),實(shí)驗(yàn)流程(一步法),RT實(shí)驗(yàn)要素決定特異性和靈敏度,問(wèn)題(一)RT-PCR沒(méi)有產(chǎn)物,原 因,對(duì) 策,問(wèn)題(二)非特異性擴(kuò)增,原 因,Thank You!,
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