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第一部分 線栓模型制作1、實(shí)驗(yàn)器材(從左到右):第一行:干棉球、酒精棉球、10水合氯醛注射器、碘伏棉簽第二行:三種不同粗細(xì)的魚線(魚線最好在2.0、2.5mm處各用記號(hào)筆作好標(biāo)記,便于觀察進(jìn)入距離)、彎盤內(nèi)為手術(shù)器材第三行:記號(hào)筆、自制拉鉤(皮筋+曲別針大頭針)2、麻醉:可用飲料瓶自制捕鼠器(適用于不敢手抓大鼠的),用于打麻藥,根據(jù)大鼠的重量選擇不同粗細(xì)的飲料瓶(太粗了大鼠可在瓶中回頭)。效果圖 3、麻倒后綁在手術(shù)臺(tái)上。4、剪去頸前的鼠毛,碘伏消毒。5、沿經(jīng)部正中切開皮膚。說(shuō)明:切開皮膚前最好將結(jié)扎動(dòng)脈的線事先剪好(后面會(huì)用到)。 6、鈍性分離皮下組織。如圖:大鼠腹側(cè)可見事先剪好的結(jié)扎線。7、分離到氣管前肌后,沿右側(cè)胸鎖乳突肌腱向下分離,見到頸動(dòng)脈鞘后可上拉鉤。8、分離動(dòng)脈鞘。如圖:分離好后見光滑的頸總動(dòng)脈。 9、分離出頸總、頸外、頸內(nèi)動(dòng)脈,結(jié)扎頸總、頸外動(dòng)脈,注意中間那根線不要系緊,用來(lái)插魚線時(shí)防止出血的。10、夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈,用眼科剪將頸總動(dòng)脈剪一小口。 11、插入魚線,魚線進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈后按圖中注釋方法插(成功率在90%以上)。說(shuō)明:(1)這一步魚線選擇是關(guān)鍵,根據(jù)大鼠重量(作的多了后根據(jù)動(dòng)脈粗細(xì)就可選擇了)選魚線。我們的經(jīng)驗(yàn)是:250g以下的選0.26mm的線,250-300g的選0.26mm蘸臘的或0.28的都可以。(2)如果遇到魚線怎么也查不進(jìn)去的情況,可讓大鼠休息一會(huì),換細(xì)點(diǎn)的魚線再試,這種情況不一定都是進(jìn)到翼腭動(dòng)脈了,我曾解剖過(guò)4例這種情況的大鼠,有三例都是在如顱的地方卡住了,可惜我們手里沒有0.24mm的魚線。(3)通過(guò)實(shí)踐,我們認(rèn)為結(jié)扎或夾閉翼腭動(dòng)脈沒有必要,按我們的方法,熟練的話,從切開到縫合完畢也就是15分鐘,算上準(zhǔn)備工作(如麻醉、消毒等)半小時(shí)也可以搞定了,這樣一上午兩人作10只大鼠不成問(wèn)題。(4)我們體會(huì)最好用蘸臘的魚線作模型,好處是進(jìn)線深度控制的好,不容易出現(xiàn)蛛網(wǎng)膜下腔出血。我們?cè)囘^(guò)0.26mm的魚線(不帶臘)在250g以下的大鼠進(jìn)入深度足有2.5cm 12、成功后結(jié)扎中間那根線,可見第一個(gè)標(biāo)記距動(dòng)脈分叉約2mm。13、縫合。14、縫好后用酒精棉球消毒皮膚縫合處。15、縫好后的效果如圖,外面的魚線最后用記號(hào)筆涂黑,便于再灌拔線時(shí)觀察。16、將大鼠放回籠內(nèi)。 17、2小時(shí)再灌。18、醒后看效果,左爪不能伸展(完全醒后可見繞圈或追尾、傾倒),我們的體會(huì),癥狀2-3分的死亡率高,1-2分的死亡率低,有的大鼠第二天或幾天后可無(wú)明顯癥狀,但取腦后還是有梗死灶的。附:一般文獻(xiàn)上的MCAO制作方法評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)局灶性腦缺血再灌注模型的制備根據(jù)longa提出的可逆性大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAo)線栓法并根據(jù)大鼠腦解剖結(jié)構(gòu)圖加以改進(jìn)制作局灶性腦缺血再灌注模型,以10%水合氯醛0.3ml/kg腹腔麻醉,頸正中切口,暴露頸總動(dòng)脈(CCA)、頸外動(dòng)脈(ECA)及翼腭動(dòng)脈,將0.26mm單絲尼龍魚線頭端0.5cm用石蠟包被,并于20mm長(zhǎng)處標(biāo)記,全部大鼠均通過(guò)右側(cè)CCA切口處插入,翼腭動(dòng)脈短暫夾閉以防誤插,栓線長(zhǎng)度自CCA分叉處約1820mm,根據(jù)動(dòng)物體重而定,栓塞右側(cè)大腦中動(dòng)脈,然后縫合皮膚,栓線尾端部分固定于皮膚上。缺血達(dá)到2h后小心抽出栓線,即形成再灌注。假手術(shù)對(duì)照只是不插入尼龍魚線,其余步驟同手術(shù)組。在缺血期間及再灌注后2h保持體溫在(370.5)。模型成功的標(biāo)志為以大鼠手術(shù)麻醉清醒后出現(xiàn)左側(cè)肢體癱瘓,站立不穩(wěn),提尾時(shí)向一側(cè)轉(zhuǎn)圈為模型成功的判斷標(biāo)準(zhǔn)。神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分參考Longa及Bederson的5分制法在動(dòng)物麻醉清醒后24h進(jìn)行

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