GB-T5009.189-2003銀耳中米酵菌酸的測定.pdf

I C S 6 7 . 0 4 0C 5 3中 華 人 民 共 和 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn)G B / T 5 0 0 9 . 1 8 9 -2 0 0 3 部分代替 G 1 3 1 1 6 7 5 - - 1 9 8 9銀耳中米酵菌酸的測定D e t e r mi n a t i o n o f b o n g k r e k i c a c i d i n t r e m e l l a f u c i f o r mi s b e r k2 0 0 3 - 0 8 - 1 1 發(fā)布2 0 0 4 - 0 1 - 0 1 實施中 華 少 味民 共 和 國 衛(wèi) 生 部，中 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn) 化 管 理 委 員 會 免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載G B / T 5 0 0 9 . 1 8 9 - 2 0 0 3前 曰 J 曰本標(biāo)準(zhǔn)代替G B 1 1 6 7 5 -1 9 8 9 銀耳衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 中5 . 1 米酵菌酸的測定。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國衛(wèi)生部提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由河南省食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所、 河南省南陽地區(qū)衛(wèi)生防疫站負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人 ： 任中善、 馬軍、 趙國慶、 張丁、 韋喜亭 。標(biāo)準(zhǔn)下載網(wǎng)()免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載G B / T 5 0 0 9 . 1 8 9 - 2 0 0 3引言 米酵菌酸 b o n g k r e k ic a c id ( B A ) ， 即酵米面黃桿菌毒素 A ( f l a v o t o x i n A) 是由椰 毒假單胞 菌( p s e u d o m a n a s c o c o v e n e n a n s ） 產(chǎn)生的一種1 if 以引起食物中毒的毒素。系統(tǒng)命名為： 3 - 梭甲基- 1 7 一 甲氧基6 , 1 8 , 2 1 - =甲基一 廿 二碳- 2 , 4 , 8 , 1 2 , 1 4 , 1 8 , 2 0 一 七烯二酸。標(biāo)準(zhǔn)下載網(wǎng)()免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載G B / T 5 0 0 9 . 1 8 9 -2 0 0 3銀耳中米酵菌酸的測定范 圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了銀耳中米酵菌酸的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用 于銀耳 中米酵菌酸 的測 定。薄層色譜測定法原理 試樣中的米酵菌酸經(jīng)提取、 凈化及濃縮后 ， 根據(jù)其在短波紫外光 G F 2 ; ； 硅膠薄層色譜上顯示黑色點的最低檢 出量測定含量 。儀器3 . 1 層析槽（ 內(nèi)徑長X寬X高， 2 5 c mX6 c mX 4 c m) .3 . 2 G F , ; , 硅膠薄層 5 0 m m X 2 0 0 m m X 0 . 3 mm ) ， 自制， 經(jīng) 1 1 0 0C -1 1 5 活化 2 h -3 h ， 置干燥器中可保存一周 。3 . 3 紫外線燈（ 波長 2 5 4 r im) o3 . 4 紫外分光光度計。試劑 本標(biāo)準(zhǔn)所用的試劑除特殊規(guī)定外， 均為分析純 ， 水為蒸餾水或同等純度的水， 溶液為水溶液。4 . 1 硅膠： G F Z , ； 層析用。4 . 2 薄層色譜展開劑： 石油醚一 無水乙醚一 冰乙酸 6 0 +4 0 +1 . 5 04 . 3 米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)溶液： 稱取米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)品， 用甲醇配制成每毫升含有米酵菌酸 2 0 r g 供測定用 ， 置于 4 冰箱中避光保存。4 . 4 甲醇。4 . 5 冰乙酸。4 . 6 石油醚， 沸程 3 0 0C - 6 0 0C o4 . 7 無水乙醚。4 . 8 三氯甲烷。4 . 9 8 5 g / 1 0 0 m l . 磷酸。4 . 1 0 4 0 g / I碳酸氫鈉水溶液。4 . 1 1 6 mo l / l . 鹽酸 。分析步驟5 . 1 米酵菌酸的提取 干銀耳試樣經(jīng)粉碎過 4 0目篩后， 稱取 2 0 g ， 置具塞錐形瓶中， 加人甲醇 2 0 m l ， 于室溫中避光浸泡1 h ， 然后再加人蕊氯甲烷 8 0 m l和 8 5 g / 1 0 0 m l 磷酸 0 . 2 m l- ， 鮮銀耳試樣經(jīng)剪碎、 磨細(xì)及混勻后稱取1 0 g ， 加人甲醇 1 6 ml , 于室溫中避光浸泡 1h ， 然后再加人三氯 甲烷 6 4 m l , 和 8 5 g / 1 0 0 m l , 的磷酸0 . 1 6 mI ； 振蕩 3 0 mi n ， 過濾 ， 干銀耳取濾液 5 0 mI . ， 鮮銀 耳取濾液 4 0 mL o標(biāo)準(zhǔn)下載網(wǎng)()免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載G B / T 5 0 0 9 . 1 8 9 -2 0 0 3 將以上濾液移人分液漏斗中， 加人與濾液體積相同的碳酸氫鈉水溶液， 振搖 2 ra i n ， 靜置分層， 用帶自 動控制球吸管吸出 ！ 幾 層于另分液漏斗， ， ， 再用碳酸氫鈉水溶液重復(fù)提取兩次， 每次 1 0 m l - ， 輕搖， 靜置， 將二次碳酸氫鈉水層合并， 加人只氯甲烷 2 5 m l ， 振搖 2 m i n ， 靜置分層后棄去只氯甲烷層， 于分液漏斗中慢慢滴人 6 m o l / I 鹽酸以調(diào)該溶液 p 1 -1 至 2 -3 ， 加人石油醚（ 沸程 3 0 0C 一 6 0 C) 5 0 n i l （ 鮮銀耳試樣加 4 0 m L ) ， 振搖 3 m i n ， 靜置分層， 取出石油醚層于梨形瓶中， 再重復(fù)用石油醚 3 0 m1 . 和 2 0 m L各提取 一 次（ 鮮銀耳試樣兩次均為 2 0 m l . ) ， 將石油醚層并人同一瓶中， 于 4 0 水浴中減壓吹氣濃縮至干， 用甲醇移至帶 1 n i l刻度的濃縮管中， 丁 飛 4 0 用減壓法濃縮至 0 . 2 ml一 以下， 并用少許甲醇洗管壁， 繼續(xù)濃縮至十， 加甲醇0 . 1 2 5 m l . ， 將干物質(zhì)溶解， 混勻， 作為樣液以供薄層色譜測定用。5 . 2 薄層色譜測定 以薄層板的短邊為底邊， 距底邊3 c m的基線上用微量注射器滴加2 0 u 川m I 標(biāo)準(zhǔn)液8 川泌 與1 0 p 1 _兩個點， 以及樣液兩個點， 每點 1 0 川 （ 鮮銀耳試樣滴加 2 0 川. ) , 在樣液的一個點 上 再滴加 2 0 fA g / mI. 標(biāo)準(zhǔn)液 1 0川 。用展開劑展開 1 6 c m， 取出揮 千。在 2 5 4 n m紫外燈光下觀察結(jié)果如下： a ） 標(biāo)準(zhǔn)點應(yīng)出現(xiàn)黑色點； b ） 如樣液點在標(biāo)準(zhǔn)點相應(yīng)位貴 卜 未出現(xiàn)黑色點 ， 則試樣中米酵菌酸的含量在測定方法靈敏度 0 . 2 5 t cg / g 以下； 如在相應(yīng)位置上有黑色點， 而另一點中樣液與標(biāo)準(zhǔn)液點重疊， 則為陽性， 根據(jù) 樣液黑點的強度估計減少滴加微升數(shù)， 或經(jīng)稀釋后再滴人不同微升數(shù)， 直至樣液與標(biāo)準(zhǔn)色點 的強度與面積一致為止米酵菌酸的比移值為 0 . 2 2 05 . 3 結(jié)果計算 見式（ 1 ) 。X - - 0X D X 工 ” ” ” （l） 式掃 X 一 一 米酵菌酸含量， 單位為微克每克（ Ix g / g ) ; 0 . 2 米酵菌酸的最低檢出量， 單位為微克（ f-t g ) ; V , . 一 加人甲醇溶解的體積， 單位為毫升（ mL ) ; v ： 一 一出現(xiàn)最低檢出量時滴加樣液的體積 ， 單位為毫升（ M L ) ; 0 樣液的總稀釋倍數(shù)； 甲醇溶解時相當(dāng)試樣的質(zhì)里一 單位為克（ g ) a5 . 4 確證試驗 對含量高的試樣可以進(jìn) 一 步作確證試驗； 將剩余的陽性樣液 與 空自甲醇液分別經(jīng)薄層分離后， 刮下并收集與米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)相應(yīng)的色譜帶與空白處硅膠。各加甲醇 4 m L , 于室溫中浸泡 1 h -2 h , 混勻， 離心， 吸出上清液， 以空自硅膠甲醇洗脫液作對照， 用紫外分光光度計測定， 應(yīng)在 2 6 7 n m和 2 3 6 n m處有米酵菌酸的兩個最高吸收峰。高壓 液相 色譜測 定 法6 原 理試樣中的米酵菌酸經(jīng)提取、 凈化及濃縮后， 根據(jù)在高壓液相色t4 土的出峰面積測定含量。7 試劑7 . 2高壓液相色譜洗脫劑： 甲醇一 水 冰乙酸仁 7 5 +2 7 +1 . 7 ， 在配制前， 所用試劑及水均需分別重蒸餾。其他試劑同 4 . 3 , 4 . 4 , 4 . 5 , 4 . 6 , 4 . 7 , 4 . 8 , 4 . 9 , 4 . 1 0 , 4 . l l o標(biāo)準(zhǔn)下載網(wǎng)()免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載GB / T 5 0 0 9 . 1 8 9 -2 0 0 38 儀器8 . 18. 28. 38 . 48 . 58 . 6高壓液相色譜儀。2 0 u L 試樣環(huán)。紫外檢測器， 調(diào)波長至 2 6 7 r i m,積分儀 。 。預(yù)柱 4 . 6 m m( I D ) X5 c m， 內(nèi)裝 L 1 a 硅膠， 粒度直徑為 1 0 p cma分析柱 A lt e x U l t r a s p h e r e T M - O D S , 粒度直徑為 5 t1 m, 4 . 6 m m ( I D ) X2 5 c m o9 分析步驟9 . 1 米酵菌酸的提取 同5 . 1 1 但最后不用甲醇轉(zhuǎn)移， 直接于瓶內(nèi)加入甲醇 0 . 5 m I . ， 將干物質(zhì)溶解 ， 混勻， 取出上清液經(jīng)離心后， 置小試管中， 作為樣液供高壓液相色譜測定用。9 . 2 高壓液相色譜測定 高壓液相色譜操作條件 ： 流速 1 . 1 m l . / m i n ， 紙速 0 . 5 c m / m i n ， 檢定器靈敏度為將 1 0 fj.g / m I-標(biāo)準(zhǔn)液 2 0 p l ， 調(diào)至滿刻度的 7 0 %-9 0 %。在做高壓液相色譜時， 首先用洗脫液平衡分析柱， 從進(jìn)樣 口裝置分別進(jìn)人不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液與樣液各 2 0川一 。在米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)峰面積的直線范圍內(nèi)， 將樣液與標(biāo)準(zhǔn)的峰面積相比以求出試樣中米酵菌酸的含量。米酵菌酸的保留時間為 1 7 m i n ,9 3 結(jié)果計算 見式（ 2 ) 0 A入一X萬 八 2X V X D X 生（2 ） 式 中 ： X 一 米酵菌酸的含量， 單位為微克每克（ 拼 9 9 ） ； 一 米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度， 單位為微克每毫升（ tx g / m l .