GB6227.1-2010食品安全國家標準食品添加劑日落黃.pdf

GB 6227.12010食品安全國家標準 食品添加劑 日落黃 2010-12-21 發(fā)布 2011-02-21 實施中 華 人 民 共 和 國 國 家 標中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準準中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 1 前 言 本標準代替 GB6227.11999食品添加劑 日落黃 。 本標準與 GB6227.11999 相比，主要變化如下： 增加了安全提示； 取消了60.0的質(zhì)量規(guī)格，將85.0的指標修改為87.0； 修改了鑒別試驗的方法； 分光光度比色法平行測定的允許差由 2.0%修改為 1.0%； 干燥減量、氯化物和硫酸鹽總量指標由15.0修改為13.0，并修改了檢測方法； 增加了對氨基苯磺酸鈉、2-萘酚-6-磺酸鈉、6,6-氧代雙（2-萘磺酸）二鈉、4,4-（重氮亞氨基）二苯磺酸二鈉鹽等未反應中間體及 1-苯基偶氮基-2-萘酚指標和檢測方法； 增加了未磺化芳族伯胺（以苯胺計）指標和檢測方法； 砷（As）的檢測方法由化學限量法修改為原子吸收法； 取消了重金屬（以 Pb 計）的質(zhì)量規(guī)格； 增加了鉛（Pb）指標和檢測方法； 增加了汞（Hg）指標和檢測方法。 本標準的附錄 A、附錄 B 和 附錄 C 為規(guī)范性附錄，附錄 D 為資料性附錄。 本標準所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為： GB6227.11986，GB6227.11999。 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 2 食品安全國家標準 食品添加劑日落黃 1 范圍 本標準適用于由對氨基苯磺酸重氮化后與薛佛氏鹽偶合而制得的食品添加劑日落黃。 2 規(guī)范性引用文件 本標準中引用的文件對于本標準的應用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 僅所注日期的版本適用于本標準。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標準。 3 化學名稱、結(jié)構(gòu)式、分子式和相對分子質(zhì)量 3.1 化學名稱 6-羥基-5-(4-磺酸基苯基)偶氮-2-萘磺酸的二鈉鹽 3.2 結(jié)構(gòu)式： 3.3 分子式 C16H10N2Na2O7S2 3.4 相對分子質(zhì)量 452.37（按 2007 年國際相對原子質(zhì)量） 4 技術(shù)要求 4.1 感官要求：應符合表 1 的規(guī)定。 表1 感官要求 項 目 要 求 檢驗方法 色澤 橙紅色 自然光線下采用目視評定。 組織狀態(tài) 粉末或顆粒 4.2 理化指標：應符合表 2 的規(guī)定。 表2 理化指標 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 3 項 目 指 標 檢驗方法 日落黃，w/% 87.0 附錄 A 中 A.4 干燥減量、氯化物（以NaCl計）及硫酸鹽（以NaSO4計）總量,w/% 13.0 附錄 A 中 A.5 水不溶物,w/% 0.20 附錄 A 中 A.6 對氨基苯磺酸鈉,w/% 0.20 附錄 A 中 A.7 2-萘酚-6-磺酸鈉,w/% 0.30 附錄 A 中 A.8 6,6-氧代雙（2-萘磺酸）二鈉,w/% 1.0 附錄 A 中 A.9 4,4-（重氮亞氨基）二苯磺酸二鈉鹽,w/% 0.10 附錄 A 中 A.10 1-苯基偶氮基-2-萘酚/（mg/kg） 10.0 附錄 A 中 A.11 未磺化芳族伯胺（以苯胺計）/% 0.01 附錄 A 中 A.12 副染料,w/% 4.0 附錄 A 中 A.13 砷（AS）/（mg/kg） 1.0 附錄 A 中 A.14 鉛（PA）/（mg/kg） 10.0 附錄 A 中 A.15 汞（Hg）/（mg/kg） 1.0 附錄 A 中 A.16 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 4 附 錄 A （規(guī)范性附錄） 檢驗方法 A.1 安全提示 本標準試驗方法中使用的部分試劑具有毒性或腐蝕性，按相關(guān)規(guī)定操作，操作時需小心謹慎。若濺到皮膚上應立即用水沖洗，嚴重者應立即治療。在使用揮發(fā)性酸時，要在通風櫥中進行。 A.2 一般規(guī)定 本標準所用試劑和水， 在沒有注明其他要求時， 均指分析純試劑和 GB/T 66822008 規(guī)定的三級水。試驗中所需標準溶液、雜質(zhì)標準溶液、制劑及制品在沒有注明其他規(guī)定時，均按 GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603 規(guī)定配制和標定。 A.3 鑒別試驗 A.3.1 試劑和材料 A.3.1.1 硫酸。 A.3.1.2 乙酸銨溶液：1.5g/L。 A.3.2 儀器和設(shè)備 A.3.2.1 分光光度計。 A.3.2.2 比色皿：10mm。 A.3.3 鑒別方法 應滿足如下條件： A.3.3.1 稱取約0.1g試樣（精確至0.01g） ，溶于100mL水中，顯橙色澄清溶液。 A.3.3.2 稱取約0.1g試樣（精確至0.01g） ，加10mL硫酸后顯橙紅色，取此液2滴3滴加入5mL水中顯橙黃色。 A.3.3.3 稱取約0.1g試樣（精確至0.01g） ，溶于100mL乙酸銨溶液中，取此溶液1mL，加乙酸銨溶液配至100mL，該溶液的最大吸收波長為482 nm2nm。 A.4 日落黃的測定 A.4.1 三氯化鈦滴定法(仲裁法) A.4.1.1 方法提要 在酸性介質(zhì)中，日落黃中的偶氮基被三氯化鈦還原分解，按三氯化鈦標準滴定溶液的消耗量，計算其含量。 A.4.1.2 試劑和材料 A. 酒石酸氫鈉； 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 5 A. 三氯化鈦標準滴定溶液：c(TiCl3)=0.1mol/L(現(xiàn)用現(xiàn)配，配制方法見附錄B)； A. 鋼瓶裝二氧化碳。 A.4.1.3 儀器和設(shè)備 A錐形瓶(500mL)； B棕色滴定管(50mL)； C包黑紙的下口玻璃瓶(2000mL)； D裝有 100g/L 碳酸銨溶液和 100g/L 硫酸亞鐵溶液等量混合液的容器(5000mL)； E活塞； F空瓶； G裝有水的洗氣瓶。 圖 A.1 三氯化鈦滴定法的裝置圖 A.4.1.4 分析步驟 稱取約 0.5g 試樣（精確至 0.0001g） ，置于 500mL 錐形瓶中，溶于 50mL 煮沸并冷卻至室溫的水中，加入 15g 酒石酸氫鈉和 150mL 沸水，振蕩溶解后，按圖 A.1 裝好儀器，在液面下通入二氧化碳的同時，加熱沸騰，用三氯化鈦標準滴定溶液滴定使其固有顏色消失為終點。 A.4.1.5 結(jié)果計算 日落黃以質(zhì)量分數(shù)1w計，數(shù)值用表示，按公式(A.1)計算： %100)4/)(1000/(11=mMVcw（A.1） 式中： c 三氯化鈦標準滴定溶液濃度的準確數(shù)值，單位為摩爾每升（mol/L） ； V 滴定試樣耗用的三氯化鈦標準滴定溶液體積的準確數(shù)值，單位為毫升（mL） ； M 日落黃的摩爾質(zhì)量數(shù)值，單位為克每摩爾（g/mol）M（C16H10N2Na2O7S2）=452.37； m1 試樣的質(zhì)量數(shù)值，單位為克（g） 。 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 6 計算結(jié)果表示到小數(shù)點后 1 位。 平行測定結(jié)果的絕對差值不大于 1.0（質(zhì)量分數(shù)） ，取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。 A.4.2 分光光度比色法 A.4.2.1 方法提要 將試樣與已知含量的日落黃標準品分別用水溶解，用乙酸銨溶液稀釋定容后，在最大吸收波長處，分別測其吸光度值，計算其含量。 A.4.2.2 試劑和材料 A. 乙酸銨溶液：1.5g/L； A. 日落黃標準品：87.0（質(zhì)量分數(shù)，按A.4.1測定） 。 A.4.2.3 儀器和設(shè)備 A. 分光光度計； A. 比色皿：10mm。 A.4.2.4 日落黃標樣溶液的配制 稱取約 0.25g 日落黃標準品（精確到 0.0001g） ，溶于適量水中，移入 1000mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。吸取 10mL，移入 500mL 容量瓶中，加乙酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，備用。 A.4.2.5 日落黃試樣溶液的配制 稱量與操作方法同A.4.2.4標樣溶液的配制。 A.4.2.6 分析步驟 將日落黃標樣溶液和日落黃試樣溶液分別置于 10mm 比色皿中，同在最大吸收波長處用分光光度計測定各自的吸光度值，用乙酸銨溶液作參比液。 A.4.2.7 結(jié)果計算 日落黃以質(zhì)量分數(shù)1w計， 數(shù)值用表示，按公式(A.2)計算： 0001wmAAmw=（A.2） 式中： A 日落黃試樣溶液的吸光度值； m0日落黃標準品的質(zhì)量數(shù)值，單位為克（g） ； A0日落黃標樣溶液的吸光度值； m試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）； w0日落黃標準品的質(zhì)量分數(shù)。 計算結(jié)果表示到小數(shù)點后 1 位。 平行測定結(jié)果的絕對差值不大于 1.0（質(zhì)量分數(shù)） ，取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 7 A.5 干燥減量、氯化物(以NaCl計)及硫酸鹽(以Na2S04計)總量的測定 A.5.1 干燥減量的測定 A.5.1.1 分析步驟 稱取約 2g 試樣（精確至 0.001g） ，置于已在 1352恒溫干燥箱恒量的稱量瓶中，在 1352恒溫干燥箱中烘至恒量。 A.5.1.2 結(jié)果計算 干燥減量的含量以質(zhì)量分數(shù)2w計，數(shù)值用表示，按公式(A.3)計算： %1002322=mmmw（A.3） 式中： m2試樣干燥前質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）； m3試樣干燥至恒量質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。 計算結(jié)果表示到小數(shù)點后1位。 平行測定結(jié)果的絕對差值不大于 0.2%（質(zhì)量分數(shù)） ，取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。 A.5.2 氯化物(以NaCl計)的測定 A.5.2.1 試劑和材料 A. 硝基苯； A. 活性炭；767針型； A. 硝酸溶液：1+1； A. 硝酸銀溶液：c(AgNO3)=0.1mol/L； A. 硫酸鐵銨溶液 配制方法：稱取約 14g 硫酸鐵銨，溶于 100mL 水中，過濾，加 10mL 硝酸，貯存于棕色瓶中； A. 硫氰酸銨標準滴定溶液：c(NH4CNS)=0.1mol/L。 A.5.2.2 試樣溶液的配制 稱取約2g試樣（精確至0.001g），溶于150mL水中，加約15g活性炭，溫和煮沸2 min3min，加入1mL硝酸溶液，不斷搖動均勻，放置30min(其間不時搖動)。用干燥濾紙過濾。如濾液有色，則再加5g活性炭，不時搖動下放置1h，再用干燥濾紙過濾(如仍有色則更換活性炭重復操作至濾液無色)。每次以10mL水洗活性炭三次，濾液合并移至200mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻。用于氯化物和硫酸鹽含量的測定。 A.5.2.3 分析步驟 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 8 移取50mL試樣溶液，置于500mL錐形瓶中，加2mL硝酸溶液和10mL硝酸銀溶液 (氯化物含量多時要多加些)及5mL硝基苯，劇烈搖動至氯化銀凝結(jié)，加入1mL硫酸鐵銨溶液，用硫氰酸銨標準滴定溶液滴定過量的硝酸銀到終點并保持1min，同時以同樣方法做一空白試驗。 A.5.2.4 結(jié)果計算 氯化物(以NaCl計) 以質(zhì)量分數(shù)3w計，數(shù)值用表示，按公式(A.4)計算： %100)200/50(1000/ )(410113=mMVVcw（A.4） 式中： c1 硫氰酸銨標準滴定溶液濃度的準確數(shù)值，單位為摩爾每升（mol/L）； V 滴定空白溶液耗用硫氰酸銨標準滴定溶液體積的準確數(shù)值，單位為毫升（mL）； V0 滴定試樣溶液耗用硫氰酸銨標準滴定溶液體積的準確數(shù)值，單位為毫升（mL）； M1 氯化鈉的摩爾質(zhì)量數(shù)值，單位為克每摩爾（g/mol）M1（NaCl）=58.4； m4試樣的質(zhì)量數(shù)值，單位為克（g）。 計算結(jié)果表示到小數(shù)點后1位。 平行測定結(jié)果的絕對差值不大于0.3（質(zhì)量分數(shù)），取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。 A.5.3 硫酸鹽(以Na2S04計)的測定 A.5.3.1 試劑和材料 A. 氫氧化鈉溶液： 2g/L。 A. 鹽酸溶液：1+1999。 A. 氯化鋇標準滴定溶液：c(1/2BaCl2)=0.l mol/L（配制方法見附錄B） 。 A. 酚酞指示液：10g/L。 A. 玫瑰紅酸鈉指示液：稱取0.lg玫瑰紅酸鈉，溶于10mL水中(現(xiàn)用現(xiàn)配)。 A.5.3.2 分析步驟 吸取25mL試樣溶液（A.5.2.2），置于250mL錐形瓶中，加1滴酚酞指示液，滴加氫氧化鈉溶液呈粉紅色，然后滴加鹽酸溶液至粉紅色消失，搖勻，溶解后在不斷搖動下用氯化鋇標準滴定溶液滴定，以玫瑰紅酸鈉指示液作外指示液，反應液與指示液在濾紙上交匯處呈現(xiàn)玫瑰紅色斑點并保持2min不褪色為終點。 同時以相同方法做空白試驗。 A.5.3.3 結(jié)果計算 硫酸鹽（以Na2SO4計） 以質(zhì)量分數(shù)4w計，數(shù)值用表示，按公式(A.5)計算： %100)200/25()2/(1000/ )(423224=mMVVcw（A.5） 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 9 式中： c2 氯化鋇標準滴定溶液濃度的準確數(shù)值，單位為摩爾每升（mol/L）； V2 滴定試樣溶液耗用氯化鋇標準滴定溶液體積的準確數(shù)值，單位為毫升（mL）； V3 滴定空白溶液耗用氯化鋇標準滴定溶液體積的準確數(shù)值，單位為毫升（mL）； M2 硫酸鈉的摩爾質(zhì)量的數(shù)值，單位為克每摩爾（g/mol）M2（Na2SO4）=142.04； m4 試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。 計算結(jié)果表示到小數(shù)點后1位。 平行測定結(jié)果的絕對差值不大于0.2（質(zhì)量分數(shù)），取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。 A.5.4 干燥減量、氯化物(以NaCl計)及硫酸鹽(以Na2SO4計)總量的結(jié)果計算 干燥減量和氯化物(以NaCl計)及硫酸鹽(以Na2SO4計)的總量以質(zhì)量分數(shù)5w計， 數(shù)值用表示， 按公式(A.6)計算： 4325wwww+=（A.6） 式中： 2w干燥減量的質(zhì)量分數(shù)； 3w氯化物(以NaCl計)的質(zhì)量分數(shù)； 4w 硫酸鹽(以Na2SO4計) 的質(zhì)量分數(shù)。 計算結(jié)果表示到小數(shù)點后1位。 A.6 水不溶物的測定 A.6.1 儀器和設(shè)備 A.6.1.1 玻璃砂芯坩堝： G4，孔徑為5m15m； A.6.1.2 恒溫干燥箱。 A.6.2 分析步驟 稱取約3g試樣（精確至0.001g），置于500mL燒杯中，加入5060熱水250mL，使之溶解，用已在1352烘至恒量的G4玻璃砂芯坩堝過濾，并用熱水充分洗滌到洗滌液無色，在1352恒溫干燥箱中烘至恒量。 A.6.3 結(jié)果計算 水不溶物以質(zhì)量分數(shù)6w計，數(shù)值用表示，按公式(A.7)計算： %100566=mmw （A.7） 式中： m6 干燥后水不溶物質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）； m5 試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。 計算結(jié)果表示到小數(shù)點后2位。 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 10 平行測定結(jié)果的絕對差值不大于 0.05（質(zhì)量分數(shù)） ，取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。 A.7 對氨基苯磺酸鈉的測定 A.7.1 方法提要 采用反相液相色譜法，用外標法進行定量，計算對氨基苯磺酸鈉的質(zhì)量分數(shù)。 A.7.2 試劑和材料 A.7.2.1 甲醇。 A.7.2.2 對氨基苯磺酸鈉。 A.7.2.3 乙酸銨溶液：2gL。 A.7.3 儀器和設(shè)備 A.7.3.1 高效液相色譜儀：輸液泵-流量范圍0.1 mL/min5.0mL/min，在此范圍內(nèi)其流量穩(wěn)定性為 1%； 檢測器-多波長紫外分光檢測器或具有同等性能的紫外分光檢測器。 A.7.3.2 色譜柱：長為150mm，內(nèi)徑為4.6mm的不銹鋼柱，固定相為 C18、粒徑5m。 A.7.3.3 色譜工作站或積分儀。 A.7.3.4 超聲波發(fā)生器。 A.7.3.5 定量環(huán)：20L。 A.7.3.6 微量注射器：20L100L。 A.7.4 色譜分析條件 A.7.4.1 檢測波長：254nm； A.7.4.2 柱溫：40； A.7.4.3 流動相：A，乙酸銨溶液；B，甲醇； 濃度梯度：40min線性濃度梯度從A（95）比B（5）至A（50）比B（50）； A.7.4.4 流量：1mL/min。 A.7.4.5 進樣量：20L。 可根據(jù)儀器不同，選擇最佳分析條件，流動相應搖勻后用超聲波發(fā)生器進行脫氣。 A.7.5 試樣溶液的配制 稱取約 0.1g 試樣（精確至 0.0001g） ，加乙酸銨溶液溶解，稀釋至 100mL，此為試樣溶液。 A.7.6 標準溶液的配制 稱取約 0.01g（精確至 0.0001g）已置于真空干燥器中干燥 24h 后的對氨基苯磺酸鈉，用乙酸銨溶液溶解， 稀釋至 100mL。 吸取 10mL 上述溶液， 加乙酸銨溶液稀釋至 100mL 后， 再分別吸取 2.5mL、 2.0mL、1.0mL 此溶液，再用乙酸銨溶液分別稀釋定容至 100mL，作為系列標準溶液。 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 11 A.7.7 分析步驟 在A.7.4規(guī)定的色譜分析條件下，分別用微量注射器吸取試樣溶液及各系列標準溶液注入并充滿定量環(huán)進行色譜檢測，待最后一個組分流出完畢，進行結(jié)果處理。測定系列標準溶液中對氨基苯磺酸鈉的峰面積，繪制成標準曲線。測定試樣溶液中對氨基苯磺酸鈉的峰面積，根據(jù)標準曲線計算對氨基苯磺酸鈉的含量。色譜圖見附錄D。 A.8 2-萘酚-6-磺酸鈉的測定 A.8.1 方法提要 采用反相液相色譜法，用外標法進行定量，計算2-萘酚-6-磺酸鈉的質(zhì)量分數(shù)。 A.8.2 試劑和材料 A.8.2.1 2-萘酚-6-磺酸鈉； A.8.2.2 其余同A.7.2。 A.8.3 儀器和設(shè)備 同 A.7.3。 A.8.4 試樣溶液的配制 同 A.7.5。 A.8.5 標準溶液的配制 稱取約 0.01g（精確至 0.0001g）已置于真空干燥器中干燥 24h 后的 2-萘酚-6-磺酸鈉，用乙酸銨溶液溶解， 稀釋定容至 100mL。 吸取 10mL 上述溶液， 加乙酸銨溶液稀釋定容至 100mL。 分別吸取 2.5mL、2.0mL、1.0mL，再用乙酸銨溶液準確稀釋定容至 100mL，作為系列標準溶液。 A.8.6 色譜分析條件 同 A.7.4。 A.8.7 分析步驟 在 A.8.6 規(guī)定的色譜分析條件下，分別用微量注射器吸取試樣溶液及各系列標準溶液注入并充滿定量環(huán)進行色譜檢測，待最后一個組分流出完畢，進行結(jié)果處理。測定系列標準溶液中 2-萘酚-6-磺酸鈉鹽的峰面積，繪制成標準曲線。測定試樣溶液中 2-萘酚-6-磺酸鈉鹽的峰面積，根據(jù)標準曲線計算 2-萘酚-6-磺酸鈉鹽的含量。色譜圖見附錄 D。 A.9 6,6-氧代雙（2-萘磺酸）二鈉的測定 A.9.1 方法提要 采用反相液相色譜法，用外標法進行定量，計算 6,6-氧代雙（2-萘磺酸）二鈉的質(zhì)量分數(shù)。 A.9.2 試劑和溶液 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 12 A.9.2.1 6,6-氧代雙（2-萘磺酸）二鈉； A.9.2.2 其余同A.7.2。 A.9.3 儀器和設(shè)備 同 A.7.3。 A.9.4 試樣溶液的配制 同 A.7.5。 A.9.5 標準溶液的配制 稱取約 0.01g（精確至 0.0001g）已置于真空干燥器中干燥 24h 后的 6,6-氧代雙（2-萘磺酸）二鈉，用乙酸銨溶液溶解，稀釋定容至 100mL。吸取 10mL 上述溶液，加乙酸銨溶液，稀釋定容至 100mL 后分別吸取 10.0mL、5.0mL、2.0mL、1.0mL，再用乙酸銨溶液稀釋定容至 100mL，作為系列標準溶液。 A.9.6 色譜分析條件 同 A.7.4。 A.9.7 分析步驟 在 A.9.6 規(guī)定的色譜分析條件下，分別用微量注射器吸取試樣溶液及各系列標準溶液注入并充滿定量環(huán)進行色譜檢測，待最后一個組分流出完畢，進行結(jié)果處理。測定系列標準溶液中 6,6-氧代雙（2-萘磺酸）二鈉的峰面積，繪制成標準曲線。測定試樣溶液中 6,6-氧代雙（2-萘磺酸）二鈉的峰面積，根據(jù)標準曲線計算 6,6-氧代雙（2-萘磺酸）二鈉的含量。色譜圖見附錄 D。 A.10 4,4-（重氮亞氨基）二苯磺酸二鈉鹽的測定 A.10.1 方法提要 采用反相液相色譜法，用外標法進行定量，計算 4,4-（重氮亞氨基）二苯磺酸二鈉鹽的質(zhì)量分數(shù)。 A.10.2 試劑和材料 A.10.2.1 4,4-（重氮亞氨基）二苯磺酸二鈉鹽； A.10.2.2 其余同A.7.2。 A.10.3 儀器和設(shè)備 同 A.7.3。 A.10.4 試樣溶液的配制 同 A.7.5。 A.10.5 標準溶液的配制 稱取約 0.01g（精確至 0.0001g）已置于真空干燥器中干燥 24h 后的 4,4-（重氮亞氨基）二苯磺酸二鈉鹽，用乙酸銨溶液溶解，稀釋定容至 100mL。吸取 10mL 上述溶液，加乙酸銨溶液，稀釋定容至食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 13 100mL 后分別吸取 10.0mL、5.0mL、2.0mL、1.0mL，再用乙酸銨溶液稀釋定容至 100mL，作為系列標準溶液。 A.10.6 色譜分析條件 A.10.6.1 檢測波長：358nm。 A.10.6.2 其他均同A.7.4。 A.10.7 分析步驟 在 A.10.6 規(guī)定的色譜分析條件下，分別用微量注射器吸取試樣溶液及各系列標準溶液注入并充滿定量環(huán)進行色譜檢測，待最后一個組分流出完畢，進行結(jié)果處理。測定系列標準溶液中 4,4-（重氮亞氨基）二苯磺酸二鈉鹽的峰面積，繪制成標準曲線。測定試樣溶液中 4,4-（重氮亞氨基）二苯磺酸二鈉鹽的峰面積，根據(jù)標準曲線計算 4,4-（重氮亞氨基）二苯磺酸二鈉鹽的含量。色譜圖見附錄 D。 A.11 1-苯基偶氮基-2-萘酚的測定 A.11.1 方法提要 采用反相液相色譜法，用外標法進行定量，計算 1-苯基偶氮基-2-萘酚的質(zhì)量分數(shù)。 A.11.2 試劑和材料 A.11.2.1 1-苯基偶氮基-2-萘酚； A.11.2.2 甲醇和2g/L乙酸銨溶液的混合液：1+1； A.11.2.3 其余同A.7.2。 A.11.3 儀器和設(shè)備 同 A.7.3。 A.11.4 試樣溶液的配制 同 A.7.5。 A.11.5 標準溶液的配制 稱取約 0.01g（精確至 0.0001g）已置于真空干燥器中干燥 24h 后的 1-苯基偶氮基-2-萘酚。用甲醇溶解，移入 1000mL 容量瓶中，以甲醇和 2g/L 乙酸銨溶液的混合液定容。吸取 10mL 上述溶液，以甲醇和 2g/L 乙酸銨溶液的混合液定容至 1000mL,然后分別吸取 2.0mL、1.0mL、0.5mL，以甲醇和 2g/L 乙酸銨溶液的混合液定容至 100mL 作為系列標準溶液。 A.11.6 色譜分析條件 A.11.6.1 檢測波長：382nm。 A.11.6.2 濃度梯度：50min線性濃度梯度從A（80）比B（20）至A（10）比B（90） 。 A.11.6.3 其他同A.7.4。 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 14 A.11.7 分析步驟 在 A.11.6 規(guī)定的色譜分析條件下，分別用微量注射器吸取試樣溶液及各系列標準溶液注入并充滿定量環(huán)進行色譜檢測， 待最后一個組分流出完畢， 進行結(jié)果處理。 測定系列標準溶液中 1-苯基偶氮基-2-萘酚的峰面積，繪制成標準曲線。測定試樣溶液中 1-苯基偶氮基-2-萘酚的峰面積，根據(jù)標準曲線計算1-苯基偶氮基-2-萘酚的含量。色譜圖見附錄 D。 A.12 未磺化芳族伯胺(以苯胺計)的測定 A.12.1 方法提要 以乙酸乙酯萃取出試樣中未磺化芳族伯胺成分，將萃取液和苯胺標準溶液分別經(jīng)重氮化和偶合后再測定各自生成染料的吸光度予以比較與判別。 A.12.2 試劑和材料 A.12.2.1 乙酸乙酯。 A.12.2.2 鹽酸溶液：1+10。 A.12.2.3 鹽酸溶液：1+3。 A.12.2.4 溴化鉀溶液：500gL。 A.12.2.5 碳酸鈉溶液：200g/L。 A.12.2.6 氫氧化鈉溶液：40gL。 A.12.2.7 氫氧化鈉溶液：4g/L。 A.12.2.8 R鹽溶液：20g/L。 A.12.2.9 亞硝酸鈉溶液：3.52g/L。 A.12.2.10 苯胺標準溶液：0.1000g/L。 配制：用小燒杯稱取 0.5000g 新蒸餾的苯胺，移至 500mL 容量瓶中，以 150mL 鹽酸溶液（1+3）分三次洗滌燒杯，并入 500mL 容量瓶中，水稀釋至刻度。移取 25mL 該溶液至 250mL 容量瓶中，用水定容。此溶液苯胺濃度為 0.1000g/L。 A.12.3 儀器和設(shè)備 A.12.3.1 可見分光光度計。 A.12.3.2 40mm比色皿。 A.12.4 試樣萃取溶液的配制 稱取約2.0g試樣（精確至0.001g）于150mL燒杯中，加100mL水和5mL氫氧化鈉溶液（40g/L），在溫水浴中攪拌至完全溶解。將此溶液移入分液漏斗中，少量水洗凈燒杯。每次以50mL乙酸乙酯萃取兩次，合并萃取液。以10mL氫氧化鈉溶液（4g/L）洗滌乙酸乙酯萃取液，除去痕量色素。再每次以10mL食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 15 鹽酸溶液（1+3）對乙酸乙酯溶液反萃取三次。合并該鹽酸萃取液，然后用水稀釋至100mL，搖勻。此溶液為試樣萃取溶液。 A.12.5 標準對照溶液的制備 吸取2.0mL苯胺標準溶液至100mL容量瓶中，用鹽酸溶液（1+10）稀釋至刻度，混合均勻，此為標準對照溶液。 A.12.6 重氮化偶合溶液的制備 吸取10mL試樣萃取溶液，移入透明潔凈的試管中，浸入盛有冰水混合物的燒杯內(nèi)冷卻10min。在試管中加入1mL溴化鉀溶液及0.5mL亞硝酸鈉溶液，稍用力搖勻后仍置于冰水浴中冷卻10min，進行重氮化反應。另取一個25mL容量瓶移入1mL R鹽溶液和10mL碳酸鈉溶液。將上述試管中的苯胺重氮鹽溶液加至盛有R鹽溶液的容量瓶中，邊加邊略振搖容量瓶，用少許水洗凈試管一并加入容量瓶中，再以水定容。充分混勻后在暗處放置15min。該溶液為試樣重氮化偶合溶液。 標準重氮化偶合溶液的制備，吸取10mL標準對照溶液，其余步驟同上。 A.12.7 參比溶液的制備 吸取10mL鹽酸溶液（1+10）、10mL碳酸鈉溶液及1mL R鹽溶液于25mL容量瓶中，水定容。該溶液為參比溶液。 A.12.8 分析步驟 將標準重氮化偶合溶液和試樣重氮化偶合溶液分別置于比色皿中， 在510nm波長處用分光光度計測定各自的吸光度Aa、Ab，以A.12.7作參比溶液。 A.12.9 結(jié)果判定 AbAa即為合格。 A.13 副染料的測定 A.13.1 方法提要 用紙上層析法將各組分分離，洗脫，然后用分光光度法定量。 A.13.2 試劑和材料 A.13.2.1 無水乙醇。 A.13.2.2 正丁醇。 A.13.2.3 丙酮溶液：1+1。 A.13.2.4 氨水溶液：4+96。 A.13.2.5 碳酸氫鈉溶液：4g/L。 A.13.3 儀器和設(shè)備 A.13.3.1 分光光度計。 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 16 A.13.3.2 層析濾紙：1號中速，150mm250mm。 A.13.3.3 層析缸：240mm300mm。 A.13.3.4 微量進樣器：100L。 A.13.3.5 納氏比色管：50mL有玻璃磨口塞。 A.13.3.6 玻璃砂芯漏斗：G3，孔徑為15m40m。 A.13.3.7 50mm比色皿。 A.13.3.8 10mm比色皿。 A.13.4 分析步驟 A.13.4.1 紙上層析條件 A. 展開劑：正丁醇+無水乙醇+氨水溶液6+2+3。 A. 溫度：2025。 A.13.4.2 試樣溶液的配制 稱取約 1g 試樣（精確至 0.001g） ，置于燒杯中，加入適量水溶解后，移入 100mL 容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻備用，該試樣溶液濃度為 1%。 A.13.4.3 試樣洗出液的制備 用微量進樣器吸取 100L 試樣溶液，均勻地注在離濾紙底邊 25mm 的一條基線上，成一直線，使其在濾紙上的寬度不超過 5mm，長度為 130mm，用吹風機吹干。將濾紙放入裝有配制好展開劑的層析缸中展開，濾紙底邊浸入展開劑液面下 l0mm，待展開劑前沿線上升至 150mm 或直到副染料分離滿意為止。取出層析濾紙，用冷風吹干。 用空白濾紙在相同條件下展開， 該空白濾紙應與上述步驟展開用的濾紙在同一張濾紙上相鄰部位裁取。 副染料紙上層析示意圖見圖 A.2。 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 17 基線主染 料130mm150mm250mm25mm副染 料(1)副 染 料(2) 圖 A.2 副染料紙上層析示意圖 將展開后取得的各個副染料和在空白濾紙上與各副染料相對應的部位的濾紙按同樣大小剪下,并剪成約 5mm15mm 的細條， 分別置于 50mL 的納氏比色管中， 準確加入 5mL 丙酮溶液， 搖動 3min5min后，再準確加入 20mL 碳酸氫鈉溶液，充分搖動，然后分別在 G3玻璃砂芯漏斗中自然過濾，濾液應澄清，無懸浮物。分別得到各副染料和空白的洗出液。在各自副染料的最大吸收波長處，用 50mm 比色皿，將各副染料的洗出液在分光光度計上測定各自的吸光度值。 在分光光度計上測定吸光度時，以 5mL 丙酮溶液和 20mL 碳酸氫鈉溶液的混合液作參比液。 A.13.4.4 標準溶液的配制 吸取 2mL 試樣溶液移入 100mL 容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，該溶液為標準溶液。 A.13.4.5 標準洗出液的制備 用微量進樣器吸取 100L 標準溶液，均勻地點注在離濾紙底邊 25mm 的一條基線上，用吹風機吹干。 將濾紙放入裝有預先配制好展開劑的層析缸中展開， 待展開劑前沿線上升 40mm， 取出用冷風吹干，剪下所有展開的染料部分，按 A.13.4.3 的方法進行操作，得到標準洗出液。用 10mm 比色皿在最大吸收波長處測吸光度值。 同時用空白濾紙在相同條件下展開，按相同方法操作后測空白洗出液的吸光度值。 A.13.4.6 結(jié)果計算 副染料以質(zhì)量分數(shù)7w計，數(shù)值用表示，按公式(A.8)計算： ()()SbAbAbAwSSnn+=)2/100)(5/117LL（A.8） 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 18 式中： A1An 各副染料洗出液以 50mm 光徑長度測定出的吸光度值； b1bn 各副染料對照空白洗出液以 50mm 光徑長度測定出的吸光度值； As 標準洗出液以 10mm 光徑長度測定出的吸光度值； bS 標準對照空白洗出液以 10mm 光徑長度測定出的吸光度值； 5 折算成以 10mm 光徑長度的比數(shù)； 100/2 標準洗出液折算成 1試樣溶液的比數(shù)； S 試樣的質(zhì)量分數(shù)%。 計算結(jié)果表示到小數(shù)點后 1 位。 平行測定結(jié)果的絕對差值不大于 0.2（質(zhì)量分數(shù)） ，取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。 A.14 砷的測定 A.14.1 方法提要 日落黃經(jīng)濕法消解后，制備成試樣溶液，用原子吸收光譜法測定砷的含量。 A.14.2 試劑和材料 A.14.2.1 硝酸。 A.14.2.2 硫酸溶液：1+1。 A.14.2.3 硝酸-高氯酸混合溶液：3+1。 A.14.2.4 砷（As）標準溶液：按GB/T 602配制和標定后，再根據(jù)使用的儀器要求進行稀釋配制成含砷相應濃度的三種標準溶液。 A.14.2.5 氫氧化鈉溶液：1g/L。 A.14.2.6 硼氫化鈉溶液：8g/L(溶劑為1g/L的氫氧化鈉溶液)。 A.14.2.7 鹽酸溶液：1+10。 A.14.2.8 碘化鉀溶液：200g/L。 A.14.3 儀器和設(shè)備 A.14.3.1 原子吸收光譜儀 A.14.3.2 儀器參考條件：砷空心陰極燈分析線波長：193.7nm；狹縫：0.5 nm1.0nm；燈電流：6 mA10 mA 。 A.14.3.3 載氣流速：氬氣 250mL/min。 A.14.3.4 原子化器溫度：900。 A.14.4 分析步驟 A.14.4.1 試樣消解 稱取約 1g 試樣（精確至 0.001g） ，置于 250mL 三角或圓底燒瓶中，加 10mL15mL 硝酸和 2mL食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 19 硫酸溶液，搖勻后用小火加熱趕出二氧化氮氣體，溶液變成棕色，停止加熱，放冷后加入 5mL 硝酸-高氯酸混合液， 強火加熱至溶液透明或微黃色， 如仍不透明， 放冷后再補加 5mL 硝酸-高氯酸混合溶液，繼續(xù)加熱至溶液透明無色或微黃色并產(chǎn)生白煙（避免燒干出現(xiàn)炭化現(xiàn)象） ，停止加熱，放冷后加 5mL 水加熱至沸，除去殘余的硝酸-高氯酸(必要時可再加水煮沸一次)，繼續(xù)加熱至發(fā)生白煙，保持 10min，放冷后移入 100mL 容量瓶（若溶液出現(xiàn)渾濁、沉淀或機械雜質(zhì)須過濾） ，用鹽酸溶液稀釋定容。 同時按相同的方法制備空白溶液。 A.14.4.2 測定 量取25mL消解后的試樣溶液至50mL容量瓶，加入5mL碘化鉀溶液，用鹽酸溶液稀釋定容，搖勻，靜置15min。 同時按相同的方法以空白溶液制備空白測試液。 開啟儀器，待儀器及砷空心陰極燈充分預熱，基線穩(wěn)定后，用硼氫化鈉溶液作氫化物還原發(fā)生劑，以標準空白、標準溶液、樣品空白測試液及樣品溶液的順序，按電腦指令分別進樣。測試結(jié)束后電腦自動生成工作曲線及扣除樣品空白后的樣品溶液中砷濃度，輸入樣品信息（名稱、稱樣量、稀釋體積等） ，即自動換算出試樣中砷含量。 平行測定結(jié)果的絕對差值不大于 0.1mg/kg，取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。 A.15 鉛的測定 A.15.1 方法提要 日落黃經(jīng)濕法消解后，制備成試樣溶液，用原子吸收光譜法測定鉛的含量。 A.15.2 試劑和材料 A.15.2.1 鉛（Pb）標準溶液：按GB/T 602配制和標定后,再根據(jù)使用的儀器要求進行稀釋配制成含鉛相應濃度的三種標準溶液。 A.15.2.2 氫氧化鈉溶液：1g/L。 A.15.2.3 硼氫化鈉溶液：8g/L(溶劑為1g/L的氫氧化鈉溶液)。 A.15.2.4 鹽酸溶液：1+10。 A.15.3 儀器和設(shè)備 A.15.3.1 原子吸收光譜儀。 A.15.3.2 儀器參考條件：GB 5009.12-2010 第三法 火焰原子吸收光譜法。 A.15.4 分析步驟 可直接采用A.14.4.1的試樣溶液和空白溶液。 按GB 5009.12-2010 第三法 火焰原子吸收光譜法操作。 平行測定結(jié)果的絕對差值不大于 1.0mg/kg，取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。 A.16 汞的測定 A.16.1 方法提要 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 20 日落黃經(jīng)微波或回流消解后，制備成試樣溶液，用原子吸收光譜法測定汞的含量。 A.16.2 試劑和材料 A.16.2.1 汞（Hg）標準溶液：按GB/T 602配制和標定后,再稀釋配制成1mL含汞0.5g、1g、2g的三種標準溶液。 A.16.2.2 硝酸。 A.16.2.3 過氧化氫。 A.16.2.4 氫氧化鈉溶液：1g/L。 A.16.2.5 硼氫化鈉溶液：8g/L(溶劑為1g/L的氫氧化鈉溶液)。 A.16.2.6 鹽酸溶液：1+10。 A.16.3 儀器和設(shè)備 A.16.3.1 原子吸收光譜儀。 A.16.3.2 儀器參考條件：汞空心陰極燈分析線波長：253.7nm；狹縫：0.5nm；燈電流：6mA 。 A.16.3.3 載氣流速：氬氣200mL/min。 A.16.3.4 原子化器溫度：常溫。 A.16.4 分析步驟 A.16.4.1 微波消解 稱取約 0.1g 試樣（精確至 0.001g） ，置于消解罐中，加入 10mL 硝酸和 2mL 過氧化氫，蓋好安全閥后，將消解罐置于微波爐中，10min 內(nèi)升溫至 130，停留 2min 后再 5min 升溫至 150，停留 3min后再 5min 升溫至 180，保溫 10min。待完全冷卻后將試樣轉(zhuǎn)移至 25mL 容量瓶中（若溶液出現(xiàn)渾濁、沉淀或機械雜質(zhì)須過濾） ，用鹽酸溶液稀釋定容。 A.16.4.2 回流消解 參考 GB/T 5009.17-2003 第二法 冷原子吸收光譜法中的回流消解。 同時按相同的方法制備空白溶液，作為空白參比液。 A.16.4.3 測定 開啟儀器，待儀器及汞空心陰極燈充分預熱，基線穩(wěn)定后，用硼氫化鈉溶液作氫化物還原發(fā)生劑，以標準空白、標準溶液、樣品空白及樣品溶液的順序，按電腦指令分別進樣。測試結(jié)束后電腦自動生成工作曲線及扣除樣品空白后的樣品溶液中汞濃度，輸入樣品信息（名稱、稱樣量、稀釋體積等），即自動換算出試樣中汞含量 。 平行測定結(jié)果的絕對差值不大于0.1mg/kg，取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。 食品伙伴網(wǎng)GB 6227.12010 21 附 錄 B （規(guī)范性附錄） 三氯化鈦標準滴定溶液的配制方法 B.1 試劑和材料 B.1.1 鹽酸。 B.1.2 硫酸亞鐵銨。 B.1.3 硫氰酸銨溶液：200g/L。 B.1.4 硫酸溶液：1+1。 B.1.5 三氯化鈦溶液。 B.1.6 重鉻酸鉀標準滴定溶液： c(1/6K2Cr2O7)=0.1mol/L