MTT法測定肺癌對化療藥物敏感性的實驗分析.doc

MTT法測定肺癌對化療藥物敏感性的實驗分析【摘要】目的研究肺癌患者外周血淋巴細(xì)胞抗癌藥敏試驗和化療療效的相關(guān)性，為臨床腫瘤個體的化療療效提供有效地依據(jù)。方法用MTT吸光度法來測定我院收治的30例肺癌患者外周血標(biāo)本對臨床上常用的幾種化療藥物敏感性或者耐藥性，然后比較其差異。結(jié)果肺癌化療的敏感性個體存在的差異是比較大的，各個藥物對患者淋巴細(xì)胞的抑制率和平時具體醫(yī)療事件中臨床上得到的數(shù)據(jù)是一致的，各種用藥方案中存在比較大的差異（P<；0.05）.結(jié)論患者外周淋巴細(xì)胞抗癌藥敏試驗，對臨床上腫瘤化療個體的指導(dǎo)和療效預(yù)測有很大價值。【abstract】objectivetostudythelungcancerpatientsperipheralbloodlymphocytecancerdrugsusceptibilitytestandchemotherapycurativeeffectofcorrelation,forclinicalcancerindividualchemotherapycurativeeffectprovideeffectivebasis.MethodsusingMTTmethodtodeterminethespectrophotometrywere30casesofourpatientswithlungcancerperipheralbloodofclinicalspecimensofseveralnormalchemotherapydrugsensitivityordrugresistance,andthencomparethedifference.Resultsthesensitivityofthelungcancerchemotherapyindividualdifferencesislarger,theelderbrotherthedrugtotheperipheralbloodlymphocyteinhibitionratetothespecificmedicalincidentwhenpeaceclinicaldatafromisconsistent,allkindsofexistingintheregimenofthebigdifference(P<；0.05).Conclusionpatientsperipherallymphocytescancerdrugsusceptibilitytestofclinicalcancerchemotherapy,individualguidanceandcurativeeffectofthepredictionisofgreatvalue.【關(guān)鍵詞】MTT肺癌化療在臨床上，肺癌患者的死亡率極高，并且還在逐年增加，化療是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)上治療肺癌尤其是晚期肺癌的最有效的手段之一，長期以來，大多數(shù)醫(yī)生在利用化療治療肺癌患者時都采用常規(guī)的治療方法，但實際上腫瘤和其他大多數(shù)病癥一樣，也存在著個體之間的差異，而且大量臨床實踐表明，化療的名感性差異和患者腫瘤細(xì)胞的耐藥性有關(guān)，因此在治療之前對要去進(jìn)行敏感性測試可以使藥物更加適應(yīng)不同個體，并且可以使治療更加個性化和合理化。收集我院在2010-2011年間收治的采用四甲基偶氮唑鹽（MTT）治療的32例肺癌患者的外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)后檢測抗藥敏感性，根據(jù)個體的敏感程度進(jìn)行個性化化療，并觀察患者敏感記錄和化療療效之間的相關(guān)性。1資料與方法1.1實驗觀察患者的情況1.1.1一般資料我院在2010-2011年間收治的肺癌患者32例，男性14例，女性18例，所有患者均有非常典型的肺癌表現(xiàn)，鱗癌17例，腺癌15例，患者年齡在27-75歲之間，各位患者病灶均很明確，對患者進(jìn)行性別、年齡、臨床治療歷史和病程等方面進(jìn)行分析，差異性較小（P>；0.05）沒有統(tǒng)計學(xué)意義。1.1.2取血分別在32例患者身上取外周靜脈血2ml。1.1.3試驗用藥品為32例患者所用的藥物均為臨床上治療肺癌的常用藥物，包括順鉑、多西紫三醇、長春瑞賓、吉西他濱，利用生理鹽水配置母液，再用培養(yǎng)液配置工作液，對于工作液應(yīng)當(dāng)在20下保存以備使用。試驗中的用藥量結(jié)和臨床上治療普通患者一樣。1.1.4試劑采用哈爾濱制藥六廠出產(chǎn)的小牛血清、MTT和生理鹽水配兌成2mg/ml的工作液，在20的條件下保存，天津天士力制藥有限公司出產(chǎn)的完全培養(yǎng)液RPMI、淋巴細(xì)胞分離液、二甲基亞砜。1.2方法1.2.1分離和培養(yǎng)PBL的分離和培養(yǎng)要在無菌條件下進(jìn)行，將2ml外周靜脈血加入相同體積的Hanks液進(jìn)行均勻混合，利用試管加入到4ml淋巴分離液中，每分鐘離心2000圈，分離出PBL，再用Hanks液清洗兩次，然后用含有15%小牛血清的RPMI培養(yǎng)液配置成單細(xì)胞懸液，活細(xì)胞數(shù)量可以達(dá)到90%以上，把細(xì)胞濃度控制在252/ml將去接入到孔板，每個孔保持在100ul。每個孔的加藥量在20ul左右，設(shè)置8組單藥組，每組設(shè)置4個復(fù)孔，然后將剩余的96個孔放入到37的二氧化碳孵化箱進(jìn)行培養(yǎng)。1.2.2MTT檢測在培養(yǎng)48h在每孔加入大約20ul的MTT工作液，然后把上清液去掉，每個孔加入100ulDMSO,然后稍微震動，以便使藍(lán)色晶體充分溶解然后用酶標(biāo)儀測量各個孔的光密度。1.2.3判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷抑制率采用以下通用公式進(jìn)行：抑制率=（1-藥物的光密度值/對照組光密度值）100%；外周血淋巴細(xì)胞抑制率若>；20%即為敏感，藥敏感率=藥敏例數(shù)/總例數(shù)。1.3統(tǒng)計學(xué)分析通過對以上32例患者的年齡、性別、病程等進(jìn)行分析比較，差異較小，沒有實際統(tǒng)計學(xué)意義（P>；0.05）.對患者要敏感程度各種指標(biāo)進(jìn)行比較，并對所得數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行t檢驗，有顯著性差異，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<；0.05）.2結(jié)果3討論隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，臨床上治療癌癥的新化療藥物不斷被研發(fā)出來，但是在臨床治療中醫(yī)護(hù)人員往往只注重治療的一般療效，對患者個體差異關(guān)注的比較少。實際上針對不同病例進(jìn)行腫瘤治療是非常必要的，可以使患者在癌癥化療過程中的到做好的治療效果和最小的傷害，實踐證明對患者采用MTT方法進(jìn)行藥敏試驗可以掌握患者藥敏程度。并且MTT方法簡單易操作，并且操作快捷，是目前最有效的藥敏試驗之一，并且臨床上得到了很好地證明。臨床上醫(yī)生可以在具體治療時根據(jù)患者的藥敏試驗選擇化療藥物。當(dāng)然，MTT方法也可以根據(jù)不同的臨床需要進(jìn)行不同藥物和不同濃度的用藥方案，從而使臨床用藥更加注重患者個體差異。參考文獻(xiàn)1SargentJM.TheuseoftheMTTassaytostudydrugresistanceinfreshtumoursamples.RecentResultsinCancerResearch,2011,31(05):55-582閔發(fā)勝,張寧,楊生斌,余漢中,孫建國,章必成.NSCLC患者外周血淋巴細(xì)胞抗癌藥敏試驗與化療療效的相關(guān)性J.華南國防醫(yī)學(xué)雜志,2010,2(06):20-213HeinzLudwig；WernerLinkesch；HeinzGisslinger；ElkeFritz；HelmutSinzinger；Thaddä；usRadaszkiewicz；AndreasChott；RoswithaFlener；MichaelMicksche；Interferon-alfacorrectsthrombocytosisinpatientswithmyeloproliferativedisordersJ.CancerImmunologyImmunotherapy,4WalterBerger,UlrikeSetinek,PeterHollaus,ThomasZidek,ElisabethSteiner,L.Elbling,H.Cantonati,JohannesAttems,AndreaGsur,MichaelMicksche.MultidrugresistancemarkersP-glycoprotein,multidrugresistanceprotein1,andlungresistanceproteininnon-smallcelllungcancer:prognosticimplicationsJ.JournalofCancerResearchandClinicalOncology,2010,15(08):33-345鄧曉斌,王珊,鄒琳,李長春,章均,歐陽軍.小兒惡性腫瘤化療前后外周血多藥耐藥基因、多藥耐藥相關(guān)蛋白基因、肺耐藥蛋白基因的變化及臨床意義J.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2011,18(06):32-366BergerW,SetinekU,Hollau